Pour commencer, prenez 50 millilitres chacun, un milieu de fibroblaste et un milieu épithélial vaginal, dans des tubes coniques séparés de 50 millilitres. Dégazez le milieu chauffé sous vide stérile pendant cinq minutes. Ensuite, désinfection des plateaux propres avec du CaviCide et de l’éthanol pour le module de débit dynamique.
Retirez les dosettes de l’emballage et placez-les dans les plateaux du module de flux dynamique. Pipeter deux millilitres de milieu épithélial vaginal dégazé dans le réservoir d’entrée apicale. Et ajoutez trois millilitres de milieu de fibroblaste dégazé dans le réservoir d’entrée basal.
Pipette 500 microlitres de milieu épithélial vaginal dégazé jusqu’au réservoir de sortie apicale et 500 microlitres de milieu fibroblastique dégazé jusqu’au réservoir de sortie basale. Faites glisser les plateaux contenant les dosettes dans le module de flux dynamique. Maintenant, exécutez le cycle principal deux fois.
Si aucune gouttelette ne se forme après quatre cycles d’amorçage, entrez en contact direct avec l’orifice à l’intérieur du réservoir de sortie de la gousse. Pipetez 200 microlitres du fluide respectif pour permettre au fluide de s’écouler entre le réservoir dans le canal afin d’amorcer à la main les dosettes. Ensuite, retirez les pointes de pipette des puces d’organe ensemencées de fibroblastes utérins humains.
Placez une gouttelette de support respectif sur tous les ports de chaque puce. Glissez les chips dans les gousses et placez les gousses sur les plateaux. Aspirez tout support à la surface des puces, puis glissez chaque plateau dans un module de flux dynamique.
Ensuite, sur le module, réglez le haut et le bas comme liquides, le débit apical à 15 microlitres par heure, le débit basal à 30 microlitres par heure, l’étirement à 0% et la fréquence à zéro hertz. Exécutez le cycle de régulation sur le module et laissez couler pendant la nuit. Une feuille continue de cellules épithéliales vaginales qui ont progressivement formé plusieurs couches cellulaires après la différenciation a été observée sur le dispositif de puce d’organe.
