Pour commencer, mélangez la quantité calculée de chaque souche bactérienne pour obtenir un total d’environ 5 millions d’unités formant colonies par millilitre. Centrifuger le mélange à 7 000 G pendant sept minutes à quatre degrés Celsius. Ensuite, pipetez soigneusement le surnageant.
Remettez la pastille en suspension dans la solution saline équilibrée de Hank à faible capacité tampon et à faible glucose. Maintenant, détachez les puces d’organes contenant les cellules épithéliales vaginales humaines différenciées des pods. Bouchez la sortie du canal basal de la puce à l’aide d’une pointe de pipette.
Ajoutez 200 microlitres de milieu de différenciation sans antibiotique à l’entrée du canal basal sans appuyer sur le piston de la pipette. Libérez la pointe de la pipette de la pipette, ce qui permet au fluide de s’écouler librement dans le canal. Ensuite, pipetez 37 microlitres de l’inoculum bactérien jusqu’à l’entrée du canal apical de la puce tout en aspirant par la sortie.
Tirez sur l’embout. Ensuite, bouchez l’entrée et la sortie du canal apical avec des pointes de pipette. Pour les puces de contrôle, pipetez 37 microlitres de la solution saline équilibrée de Hank’s à faible capacité tampon et du glucose dans l’entrée du canal apical.
Après avoir aspiré tout fluide à la surface de la puce, placez les puces dans une boîte de Pétri de 150 millimètres. Des colonies de L. crispatus et de G. vaginalis ont été détectées dans les 48 heures suivant le placage, confirmant que des bactéries saines et dysbiotiques se sont greffées dans les puces vaginales. Le pH des puces vaginales inoculées avec L. crispatus était similaire à celui des puces témoins non inoculées, et lorsqu’elles étaient co-cultivées avec G. vaginalis, elles présentaient une augmentation significative du pH.
