Amplification par PCR et ligature adaptative de la séquence cible pour la détection de SNP multigéniques dans le cancer gastrique

Pour commencer, prélevez les acides nucléiques extraits des échantillons de tissus cancéreux gastriques inclus dans la paraffine. Placez les composants du kit de détection multigénique des articulations du cancer gastrique sur mesure sur la glace. Après avoir soigneusement mélangé les composants, centrifugez-les pendant 10 secondes, puis ajoutez les réactifs dans un tube PCR de 0,2 millilitre séquentiellement et mélangez pendant cinq secondes par vortex.

Placez chaque tube de réaction sur le thermocycleur et exécutez le programme d’amplification des échantillons d’ADN et des produits d’ADNc. Décongelez l’enzyme de digestion de l’amorce sur de la glace. Ajoutez deux microlitres d’enzyme de digestion d’amorce dans chaque tube de réaction.

Après avoir vortex et centrifugé les tubes, placez-les sur le thermocycleur et exécutez le programme de digestion. Décongelez l’adaptateur connectant les réactifs sur la glace. Étiquetez un microtube à centrifuger de 1,5 millilitre en tant qu’adaptateur de mélange X et ajoutez les composants requis.

Prélevez le produit d’amorçage digéré du thermocycleur. Ajoutez les réactifs de ligature dans le tube, faites un vortex pendant cinq secondes et centrifugez à basse vitesse pendant 10 secondes à 2 500 G. Placez ensuite le tube sur le thermocycleur et exécutez le programme d’amplification pour les échantillons d’ADN et pour les produits à ADNc.