Enrobage de tissu oculaire et cryosectionnement dans un composé à température de coupe optimale pour l’imagerie par fluorescence

Une fois la cryoprotection de l’œil de lapin terminée, transférez-le d’une solution de saccharose à 30 % dans une boîte de dissection de 100 millimètres. Sous un microscope à dissection, retournez soigneusement l’œil pour éliminer l’excès de solution de saccharose de la partie interne de l’œil. À l’aide d’une lingette, essuyez doucement l’excès de solution de saccharose de la partie externe de l’œil, remplissez un moule d’enrobage jetable avec une température de coupe optimale ou un composé OCT à une profondeur de 0,5 à un centimètre.

Placez l’œil dans le moule d’enrobage vers le haut et remplissez lentement la partie interne de l’œil avec le composé OCT, en évitant la formation de bulles. Une fois que l’œil est apparu dans le composé OCT et ne touche pas les surfaces internes du moule, enveloppez le moule d’enrobage dans de la paraffine et stockez-le à quatre degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, placez le moule d’enrobage dans un plat de dissection.

Si possible, retirez délicatement le composé OCT de l’intérieur de l’œil avec une lingette. Transférez l’œil dans un nouveau moule d’enrobage rempli de composé OCT frais. Remplissez ensuite le moule comme vous l’avez fait précédemment pour vous assurer que le support d’enrobage final est exempt de débris ou d’imperfections.

Étiquetez le moule à des fins d’orientation. Positionnez l’œil vers le haut dans le moule cryogénique, de sorte que le composé OCT tapisse la rétine interne. Utilisez la tête du nerf optique comme point de repère pour déterminer la partie supérieure de l’œil Placez le moule d’enrobage étiqueté sur de la glace sèche, en vous assurant que l’œil ne touche pas les surfaces internes du moule ou n’est pas exposé à l’air.

Montez le bloc sur le cryostat avec la partie supérieure de l’œil vers le haut et la partie inférieure vers le bas. Avec la cornée et l’iris restants tournés vers la droite ou la gauche. Positionnez une lame fraîche parallèlement à l’axe vertical de l’œil pour la sectionner.

Après avoir coupé les sections et séché pendant la nuit, placez une diapositive dans un congélateur à 80 degrés Celsius. Les images de fluorescence d’une cryosection rétinienne entière de l’œil de lapin ont montré une couche d’épithélium pigmentaire rétinien pigmentée uniforme sans détachement significatif de la couche photoréceptrice sus-jacente. Une image en fond clair de la coupe rétinienne démontre en outre la morphologie rétinienne intacte de toutes les couches.