Dissection de l’œil de lapin entier et préparation du tissu oculaire pour l’analyse histologique

Après l’énucléation transconjonctivale de l’œil de lapin, placez immédiatement 50 millilitres de paraformaldéhyde à 4% et de PBS sur de la glace. Après 15 minutes, transférez l’œil dans une boîte de dissection de 100 millimètres et remplissez la boîte de PBS pour éviter que l’œil ne se dessèche. Sous un microscope de dissection, à l’aide d’une lame chirurgicale, commencez à faire une incision d’un millimètre en avant du limbe, en la maintenant parallèle au plan de l’iris.

Insérez des ciseaux incurvés dans l’incision initiale et continuez à couper circonférentiellement, en maintenant une distance d’un millimètre du limbe. Retirez ensuite la cornée à l’aide d’une pince et essuyez doucement le PBS avec une lingette de laboratoire. Placez la cornée dans une solution de saccharose à 30 % à température ambiante pour la cryoprotection.

Faites une première coupe avec des ciseaux incurvés à travers l’iris. Ensuite, coupez circonférentiellement autour de l’œil, comme pour l’ablation de la cornée, pour séparer l’iris du reste du tissu. Retirez l’iris à l’aide d’une pince et essuyez doucement l’excès de PBS avec la lingette de laboratoire.

Placez l’iris dans une solution de saccharose à 30 % à température ambiante pour la cryoprotection. Après avoir retiré la cornée et l’iris, placez l’œil dans 50 millilitres de paraformaldéhyde à 4% et mettez-le sur un agitateur doux. Laissez l’œil dans du paraformaldéhyde à 4 % à quatre degrés Celsius pendant la nuit.

Le lendemain, placez l’œil dans une boîte de dissection et remplissez la boîte de PBS. Sous le microscope de dissection, à l’aide d’une pince, saisissez soigneusement la capsule antérieure du cristallin. Ensuite, insérez soigneusement les ciseaux dans la chambre postérieure, en orientant les lames vers l’arrière le long de la lentille.

Faites une première coupe à travers les zones de l’objectif avec des ciseaux incurvés. Continuez à faire de petites entailles circonférentielles à travers les zonules du cristallin. Pour confirmer le retrait du cristallin, saisissez doucement la capsule antérieure du cristallin à l’aide d’une pince et essayez de la soulever.

Lors de la séparation, placez la lentille dans une solution de saccharose à 30 % à température ambiante pour la cryoprotection. Placez l’œil dans 50 millilitres de saccharose à 30% et de PBS à quatre degrés Celsius pendant 24 à 48 heures pour la cryoprotection. Pour accélérer la cryoprotection, remplacez la solution initiale de saccharose par une solution fraîche après huit à 12 heures.