Pour commencer, disposez tout le matériel nécessaire à la chirurgie de la souris sur la table d’opération. Placez la souris anesthésiée sur la table, en vous assurant que l’oreiller est sous son cou. Désinfectez le site chirurgical en alternant trois fois par désinfectant des écouvillons circulaires de bétadine ou de chlorhexidine et d’alcool.
Effectuez un pincement des orteils pour confirmer la profondeur de l’anesthésie. À l’aide de ruban chirurgical, retenez les membres antérieurs de la souris. À l’aide d’un microscope à dissection, affichez la surface ventrale du cou de la souris et ajustez le grossissement pour observer confortablement le site chirurgical.
Après avoir pratiqué une incision longitudinale d’un centimètre sur la ligne médiane, insérez la pointe des ciseaux fermés dans l’incision et ouvrez-la doucement pour effectuer une dissection contondante du tissu conjonctif sous-cutané, séparant les deux glandes salivaires. À l’aide d’une pince fine, tirez doucement la glande salivaire droite à travers l’incision pour la reposer sur la surface extérieure, ou utilisez un écarteur à crochet émoussé pour rétracter la glande salivaire latéralement. Poursuivez la dissection émoussée du tissu conjonctif jusqu’à ce que le sterno-cléidomastoïdien et les muscles digastriques soient visibles.
À l’aide d’une pince à bout coudé, continuez la dissection minutieuse du tissu conjonctif près de l’extrémité caudale du triangle musculaire pour exposer la veine jugulaire, le nerf vague et l’artère carotide commune, ou ACC. Continuez à disséquer le tissu conjonctif autour de l’ACC de la base du triangle musculaire jusqu’au muscle omohyoïde. Utilisez de petites boules de coton pour contrôler tout saignement mineur et pour absorber les fluides sécrétés par les glandes salivaires.
Disséquez le tissu conjonctif pour séparer l’ACC du nerf vague, en prenant soin de minimiser la manipulation et les dommages au nerf vague. Après avoir mobilisé l’ACC, placez un morceau d’un centimètre de suture 6-0 sur le sternum et passez la pince à pointe inclinée sous l’ACC. Avec la pince à bout coudé dans la main droite et la pince fine dans la main gauche, passez la suture à la pince à bout coudé et saisissez près de l’extrémité de la suture.
Tirez doucement sur la moitié de la longueur de la suture sous l’ACC. Après avoir placé une deuxième suture, attachez sans serrer chaque suture autour de l’ACC sans resserrer les nœuds ni restreindre la circulation sanguine. À l’aide de la pince à bout incliné, retirez soigneusement le tissu conjonctif à l’extrémité supérieure du triangle musculaire au-dessus du muscle omohyoïdien pour localiser l’ACC et sa bifurcation dans l’artère carotide externe et l’artère carotide interne.
Ensuite, placez un morceau de suture sur le sternum et enlevez soigneusement le tissu conjonctif de tous les côtés de l’artère carotide externe près de la bifurcation. Passez la pince à bout coudé sous l’artère carotide externe. Avec la pince fine dans la main gauche, passez la suture dans la pince à pointe coudée dans l’espace entre l’artère carotide interne et externe et tirez doucement sur la moitié de la longueur de la suture.
Attachez sans serrer la suture autour de l’artère carotide externe sans serrer le nœud. Pour préparer l’aiguille pliée, tenez une aiguille d’un demi-pouce de calibre 33 avec le biseau vers le haut. Saisissez la pointe de l’aiguille à l’aide d’un tourne-aiguille stérile et pliez-la d’environ 30 à 40 degrés vers le biseau.
Serrez le nœud de la suture autour de l’artère carotide externe. Faites ensuite glisser la suture inférieure de l’ACC vers le muscle sterno-cléido-mastoïdien aussi loin que possible, et resserrez le nœud. Placez une boule de coton au bord de la cavité pour absorber le liquide et le sang sécrétés pendant l’injection.
En tenant la seringue dans la main droite et la pince fine dans la main gauche, amenez l’aiguille vers l’artère immédiatement au-dessus de la suture inférieure sur l’ACC. À l’aide de la pince fine, tirez doucement l’extrémité libre de la suture inférieure dans le sens caudal pour placer un faible niveau de tension sur l’ACC. Insérez l’aiguille dans le CCA juste après le biseau et relâchez lentement la tension de la suture.
Avec la main gauche, poussez le piston de la seringue pour injecter lentement la solution contenant l’agent d’intérêt ou de contrôle. Saisissez ensuite la suture supérieure lâchement attachée sur le CCA avec la pince fine et soulevez pour plier l’artère. Retirez l’aiguille et mettez la seringue de côté.
Avec la pince à bout coudé dans la main droite, maintenez le pli dans l’artère et serrez le nœud dans la suture supérieure sur le CCA. À l’aide de boules de coton, absorbez tout sang résiduel dans la cavité chirurgicale. Localisez le site d’injection sur l’ACC et déterminez le nombre de sutures nécessaires pour la fermer.
Irriguez soigneusement le site d’injection et la lumière de la zone isolée de l’ACC avec une solution saline stérile pour éliminer le sang coagulé. À l’aide de la pince à pointe coudée, saisissez l’aiguille de suture 9-0 près des eaux usées. Tenez l’artère et appuyez doucement sur les côtés du CCA avec la pince fine.
Ensuite, passez l’aiguille et la suture des deux côtés de l’artère en une seule bouchée. Pour fermer le site d’incision avec un nœud de chirurgien, effectuez une attache d’instrument avec la pince fine et la pince à pointe coudée en utilisant un minimum de quatre lancers. À l’aide de la pince fine, détachez et retirez la suture autour de l’artère carotide externe, suivie d’une suture supérieure sur l’ACC pour rétablir la circulation.
Desserrez lentement la suture inférieure de l’ACC, mais ne la détachez pas immédiatement. Après avoir vérifié que le site d’injection est suffisamment fermé, retirez les sutures CCA supérieure et inférieure. Repositionnez la glande salivaire dans la cavité et, à l’aide d’un pack de sutures stériles, fermez l’incision avec une suture placée tous les trois à quatre millimètres.
Après injection intracarotidienne de cellules souches mésenchymateuses humaines de moelle osseuse marquées à la GFP, l’immunohistochimie de coupes cérébrales a révélé la présence de cellules positives à la GFP, indiquant le rattachement des cellules souches mésenchymateuses humaines de la moelle osseuse aux gliomes. Aucune différence significative n’a été observée dans l’efficacité de retour des cellules souches mésenchymateuses humaines de la GFP entre les procédures de ligature et de réparation de l’ACC. La dispersion des cellules souches mésenchymateuses humaines GFP dans la tumeur n’a révélé aucune différence significative entre le nombre médian de cellules GFP positives dans des champs de haute puissance entre les groupes de ligature CCA et de réparation CCA.
