Pour commencer, prenez des cellules RSC96 stimulées électriquement dans des boîtes de culture. Ensuite, utilisez un stylo d’histologie pour dessiner des cercles aux endroits où les cellules sont uniformément réparties sur la lamelle. Ajouter 50 à 100 microlitres de solution de perméabilisation dans les cellules et incuber à température ambiante pendant 20 minutes.
Ensuite, lavez les cellules trois fois avec du PBS pendant cinq minutes chacune. Ensuite, ajoutez 3 % de BSA dans les cercles pour couvrir uniformément le tissu et incubez à température ambiante pendant 30 minutes. Ensuite, retirez délicatement la solution bloquante et ajoutez l’anticorps primaire correctement dilué aux cellules.
Placez la plaque de culture cellulaire dans une boîte humide et incubez toute la nuit à quatre degrés Celsius. Ensuite, lavez les cellules trois fois avec du PBS pendant cinq minutes chacune tout en secouant continuellement. Ajoutez l’anticorps secondaire correspondant et incubez à température ambiante pendant 50 minutes.
À la fin de l’incubation, placez la lamelle dans du PBS et lavez-la trois fois en la secouant pendant cinq minutes chacune. Ensuite, laissez sécher la lame et ajoutez une solution de coloration DAPI à la lame séchée. Enfin, scellez la lamelle séchée avec un agent de montage anti-décoloration pour la fluorescence.
Acquérez des images à l’aide de longueurs d’onde d’excitation et d’émission spécifiques pour Alexa Fluor 488, SCI3 et SCI5. L’analyse microscopique a montré des cellules cytoplasmiques S-100 bêta positives dispersées en rouge dans tous les groupes, et une augmentation de la densité optique intégrée de la fluorescence bêta S-100 a été observée dans le groupe de cinq kilovolts par centimètre par rapport au groupe témoin et de 10 kilovolts par centimètre. Des cellules GFAP et Sox10-positives avec un cytoplasme dispersé ont été observées dans tous les groupes lors des essais de crawling cellulaire.
Cependant, l’expression de GFAP était significativement plus faible dans le groupe de cinq kilovolts par centimètre par rapport au groupe témoin et dans les groupes de 10 kilovolts par centimètre. Les cellules RSC96 du groupe de cinq kilovolts par centimètre ont montré une valeur grise moyenne significativement plus élevée de l’expression de Sox10, suggérant une expression accrue de Sox10.
