Pour commencer, lavez les condensats d’étoiles C qui se modèlent d’ARN en laissant la solution des condensats extraits se déstabiliser pendant au moins cinq minutes. Ensuite, tout en pipetant à partir du haut du niveau de liquide pour minimiser l’élimination des condensats, extrayez environ la moitié du volume du surnageant. Ajouter le même volume de chlorure de sodium à 0,3 molaire dans du tris-EDTA pour remplacer le surnageant éliminé et mélanger par pipetage.
Répétez le cycle d’élimination du surnageant et de remplacement de la mémoire tampon pour un total de trois cycles. Pour le mélange de transcription T7, préparer une solution mère de 10 millimolaires de DFHBI dans du sulfoxyde de diméthyle. Diluez ensuite une aliquote à une concentration finale de 600 micromolaires en utilisant de l’eau libre sans RNAse et DNAse.
Dégivrez les composants du kit de transcription sur de la glace. Ensuite, à l’aide d’embouts de pipette stériles, pipetez les composants affichés dans un tube de microcentrifugation autoclavé à température ambiante. Mélangez délicatement la solution par pipetage et utilisez-la immédiatement pour la synthèse de la transcription de l’ARN.
Pour ce faire, pipetez 3,3 microlitres de condensats lavés préparés à partir d’étoiles C de modèle d’ARN dans une chambre adaptée à l’imagerie microscopique. Et ajoutez le volume total du mélange de transcription fraîchement préparé. Acquérir des images de microscopie pour une durée de 18 heures, en commençant immédiatement après l’ajout du mélange de transcription aux condensats.
Pour la transcription des aptamères d’ARN, un résultat positif a été confirmé par l’augmentation de la fluorescence du florigène au fil du temps via la microscopie.
