Pour commencer, pipetez des gouttelettes de 20 microlitres d’hydrogel peptidique dans une plaque de 24 puits. Ensemencez 800 cellules de la lignée cellulaire SW1222 dans chaque puits pendant quatre jours. Le quatrième jour, pipetez le milieu.
Lavez bien chaque fois deux fois avec du PBS. Ensuite, ajoutez 400 microlitres de solution de formaldéhyde à 4% dans les puits. Une fois l’incubation terminée, utilisez une pointe de pipette P1000 pour aspirer la solution de formaldéhyde.
Ensuite, lavez à nouveau les puits avec du PBS. Incuber les cellules dans un millilitre de tampon de perméabilisation pendant 30 minutes à température ambiante. Après avoir pipeté le tampon et lavé les puits avec du PBS, ajoutez 0,5 millilitre de tampon de blocage.
Maintenant, lavez les puits avec du PBS après avoir retiré le tampon de blocage. Ensuite, pipetez 200 microlitres d’anticorps primaire dilué dans les puits. Incuber l’assiette toute la nuit à quatre degrés Celsius.
À l’aide d’une pointe de pipette P200, prélevez la solution. Ensuite, lavez les puits avec la solution PBS. Ensuite, ajoutez le conjugué de phalloïdine à un flacon d’anticorps secondaire dilué dans un rapport de un à 40.
Pipeter ce mélange dans les puits de la plaque. Ensuite, incubez la plaque à température ambiante pendant trois heures dans l’obscurité. Après avoir aspiré la solution et lavé les puits avec du PBS, pipetez 300 microlitres de solution DAPI dans chaque puits.
Après l’incubation, lavez à nouveau les puits avec du PBS après avoir pipeté la solution. Conservez l’assiette à quatre degrés Celsius jusqu’à sept jours. L’immunomarquage a montré que les organoïdes trouvés dans le peptide P non biofonctionnel, le peptide biofonctionnalisé P1 et le Matrigel étaient localisés dans les membranes apicales et basolatérales.
Le peptide P non biofonctionnel a induit l’expression de la jonction cellule-cellule dans la membrane basolatérale.
