Préparation et collecte d’embryons de drosophile pour la transgenèse

Pour commencer, mouillez un chiffon avec une solution de broyage. Fixez le chiffon sur le broyeur d’aiguilles, puis connectez une aiguille à une pompe à air à pied à l’aide d’un tube capillaire en silicone. Montez l’aiguille sur le porte-aiguille du moulin.

Ajustez l’angle de l’aiguille de manière à ce qu’elle soit pliée à 35 degrés par rapport à la plaque de broyage. Utilisez le bouton de commande grossier sous le microscope pour ajuster la position de la pointe de l’aiguille jusqu’à ce qu’elle soit placée juste au-dessus de la surface de meulage. Ensuite, utilisez la pompe à air du pied pour maintenir la pression intérieure de l’aiguille à 40 livres par pouce carré.

Ensuite, utilisez le bouton de commande fin pour que la pointe de l’aiguille touche la plaque de broyage. Après avoir broyé pendant trois à cinq secondes, déchargez l’aiguille lorsque des bulles d’air commencent à sortir de la pointe. Ensuite, chauffez une pipette de 200 microlitres avec la flamme extérieure d’un brûleur à alcool.

Lorsque la pointe de la pipette commence à fondre, étirez-la. Coupez l’extrémité scellée de la pointe de la pipette avec des ciseaux. Pour déchlorer les embryons de drosophile, retirez les mouches des plaques de gélose au jus de raisin avec une brosse.

Rincez les embryons collectés dans une passoire cellulaire avec de l’eau doublement distillée. Séchez la passoire cellulaire avec du papier de soie. Ensuite, placez la passoire séchée dans une boîte de Pétri contenant 30% d’eau de Javel.

Agitez manuellement la passoire cellulaire pour assurer un mélange uniforme. Rincez les embryons dans de l’eau doublement distillée pendant deux minutes avant de choisir les embryons flottants avec un pinceau pour faire une ligne pour une transgenèse ultérieure.