Initiation de lignées indépendantes de cultures de Sulfolobus acidocaldarius pour l’expérimentation de l’évolution de la température

Pour commencer, utilisez un spectrophotomètre pour mesurer la densité optique d’une culture de départ de sulfolobus acidocaldarius. Ensuite, créez des dilutions en série de la culture de départ de 10 à 1 à 10 à 6. Pipetez 100 microlitres chacune des dilutions 10 à 5 et 10 à 6, puis transférez-les dans les puits d’une plaque à six puits contenant du BBM plus solide.

Placez l’assiette dans une boîte avec un chiffon humide dans un incubateur statique à 75 degrés Celsius pendant cinq à sept jours jusqu’à ce que des colonies individuelles émergent. Pour établir le nombre souhaité de lignées évolutives à partir de colonies uniques, avec une boucle d’inoculation, choisissez une colonie au hasard. Remettre la colonie en suspension dans 1,5 millilitre de BBM plus préchauffé contenu dans un tube percé de deux millilitres.

Étiquetez le tube de manière appropriée. Après avoir répété la remise en suspension pour plusieurs colonies, remplissez un tube avec 1,5 millilitres du milieu comme contrôle négatif. Scellez le haut des tubes avec une membrane respirante, puis incubez-les dans un thermomélangeur jusqu’à ce que les cultures deviennent troubles.

Centrifugez les cultures clonales à 5 000 G pendant une minute à température ambiante. Après avoir jeté le surnageant, pipetez 200 microlitres de BBM plus dans le tube et remettez la pastille en suspension. Ajoutez 200 microlitres de glycérol à 50% dans chaque tube pour créer des tiges de glycérol.

Ensuite, conservez les tiges à 80 degrés Celsius jusqu’à ce que d’autres expériences soient effectuées.