Pour commencer, obtenez des cellules mononucléées humaines à partir de sang total. Vortex human FcR bloquant, et ajoutez la quantité requise de réactif dans les cellules. Incuber le tube avec des cellules à quatre degrés Celsius pendant cinq minutes.
Ajoutez 20 microlitres de CD11b MicroBeads pour 10 à la puissance de sept cellules au total, et incubez à quatre degrés Celsius pendant 20 minutes. Désinfectez soigneusement le support magnétique avec de l’éthanol à 70 %. Après l’incubation, ajoutez 10 millilitres de tampon d’isolement.
Mélangez et centrifugez le tube à 300G pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius. Une fois le support sec, positionnez la colonne magnétique sur le support magnétique. Après avoir retiré le surnageant, ajoutez un millilitre de tampon d’isolement et mélangez doucement avec la pipette.
Ensuite, chargez la suspension cellulaire sur la colonne et lavez-la trois fois avec trois millilitres de tampon d’isolement chaque fois que le réservoir de la colonne est vide. Placez la colonne dans un tube conique de 15 millilitres sans toucher la partie magnétique. Après avoir ajouté cinq millilitres de tampon d’isolement, enfoncez le piston dans le tube pour forcer le liquide à sortir à travers la colonne.
Centrifuger la suspension cellulaire recueillie dans le tube. Aspirez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans un milieu d’isolement. Après le comptage des cellules, aliquote 500 microlitres de suspension cellulaire dans chaque puits d’une plaque de 24 puits et incuber pendant la nuit.
Pour induire des cellules de type microglie, remplacez le milieu d’isolement de l’ensemencement de la veille par un milieu d’induction et incubez les cellules pendant 14 jours. Les cellules induites de type microglie présentaient de minuscules corps soma et de nombreux collatéraux ramifiés.
