Pour commencer, préparez des micro-sphères d’hydrogel de zinc, de calcium, de cuivre et d’alginate ferrique. Pour le test de performance antimicrobienne, ajoutez 10 millilitres de chacune des deux solutions bactériennes dans un tube à centrifuger stérile de 15 millilitres. Ensuite, incubez les cultures avec 0,5 millilitre de microsphères d’hydrogel dans un agitateur à température constante.
Diluez chaque solution bactérienne, 10 fois à la puissance cinq fois, avec de l’eau stérile. À l’aide de billes de verre stériles, répartissez uniformément 200 microlitres de solution bactérienne sur un milieu solide LB. Placez les plaques dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant 12 heures pour évaluer la formation de la colonie.
Ajoutez un milligramme par millilitre d’albumine sérique bovine ou de suspension BSA, à 500 microlitres de chaque microsphère et incubez pendant 24 heures. Ajoutez chaque échantillon saturé à un millilitre de PBS et agitez pendant 15 minutes à 37 degrés Celsius avec une agitation continue à 80 tours par minute. Après l’aliquotage, remplacez le milieu par un nouveau à une, trois, six, 12, 24, 36 et 48 heures.
Quantifier les concentrations de protéines surnageantes à des moments précis. Ajoutez les microsphères ALG préparées au PBS et incubez-les à 37 degrés Celsius pendant 24 heures. Obtenez du sang total de souris saines dans des tubes d’anticoagulation contenant du citrate de sodium.
Après le vortex, centrifugez le tube pendant 15 minutes à 1 500 tours par minute pour obtenir des globules rouges. Après avoir rincé les cellules, préparez une solution de globules rouges à 10 % avec du PBS et ajoutez 20 microlitres de solution de cellules sanguines aux groupes expérimentaux et témoins de la microsphère. Incuber les échantillons à 37 degrés Celsius pendant quatre heures et les centrifuger à 1 500 tr/min pendant 15 minutes.
Après avoir gardé le surnageant de côté, photographiez les globules rouges de chaque groupe après l’hémolyse. Enfin, mesurez les valeurs d’absorbance des surnageants dans chaque groupe et calculez le taux d’hémolyse à l’aide de la formule. Différentes microsphères ont montré une activité antibactérienne contre le staphylocoque doré et l’escherichia coli avec du cuivre et du zinc, des microsphères ALG, montrant les propriétés antibactériennes les plus fortes.
Le test de libération de médicament a révélé que le taux de libération de la microsphère de fer était relativement plus rapide que celui des trois autres ions. L’évaluation de la biocompatibilité a montré que les globules rouges de la suspension restaient intacts au contact de différentes microsphères, ce qui indique une hémolyse minimale par les microsphères.
