Pour commencer, à l’aide d’une pipette sérologique, versez deux millilitres de bouillon de lysogénie autoclave dans deux tubes à essai stériles de 14 millilitres. à l’intérieur d’un capot laminaire. Ajouter 20 microlitres de filtre stérilisé 5%Tween 80 dans les tubes à essai à l’aide d’une micro pipette.
Ensuite, ajoutez le cryostock de Mycobacterium smegmatis dans un tube avec une boucle d’inoculation. Incuber les tubes pendant 48 heures dans un incubateur à 300 rotations par minute et 37 degrés Celsius. Pour préparer les cultures secondaires, versez deux millilitres de milieu de bouillon de lysogénie autoclave dans deux tubes à essai stériles de 14 millilitres.
Ensuite, à l’aide d’une micro pipette, ajoutez 20 microlitres de filtre stérilisé 5%Tween 80 dans les tubes à essai. Ensuite, à l’aide d’une micro-pipette, transférez 20 microlitres de la culture primaire dans l’un des tubes. Incuber les cultures dans un incubateur à secousses à 300 rotations par minute et 37 degrés Celsius jusqu’à ce qu’elles atteignent une OD600 de 0,6 à 0,8.
