Pour commencer, dans un capot laminaire, distribuez six millilitres de média de Soutan complété par 2% de glucose dans les puits d’une plaque à six puits. Inoculez les puits avec 120 microlitres de cultures secondaires de mycobacterium smegmatis. Gardez-en un non inoculé comme témoin du milieu.
Ensuite, pipetez la culture de haut en bas avec une micropipette de 1 millilitre pour un mélange uniforme. Couvrez le couvercle et fermez soigneusement la plaque avec un film de paraffine. Incuber la plaque dans un incubateur statique à 37 degrés Celsius pendant sept jours.
Pour une estimation visuelle de la croissance du biofilm, placez les plaques dans un système de documentation en gel sous éclairage à lumière blanche épi. Pour mesurer le poids à sec, pesez une feuille de papier buvard. Extrayez le biofilm de la plaque à six puits et transférez-le sur le papier à l’aide d’une spatule.
Prélevez soigneusement la majeure partie du biofilm de la culture. Placez le biofilm sur le papier buvard. Placez le papier buvard dans un incubateur jusqu’à ce que le biofilm sèche complètement.
Mesurez ensuite le poids combiné du papier et du biofilm. Les pellicules du biofilm étaient visibles à partir du jour 3. La réticulation des cultures s’est améliorée avec l’ajout de 2 % de glucose dans le milieu de Soutan.
Le développement du biofilm était visible entre les jours 3 et 6. Un film avec une légère réticulation a été observé le jour 3. Ce film a mûri au jour 5 et s’est désintégré à partir du jour 6.
