Pour commencer, fixez le support en porte-à-faux d’un AFM sur le support de changement en porte-à-faux. À l’aide d’une pince d’horloger, montez le porte-à-faux sélectionné sur le support. Serrez la vis du support pour fixer le cantilever.
Placez et verrouillez le support en porte-à-faux sur la tête AFM qui repose sur le support. Utilisez la fonction de moteur pas à pas dans le logiciel AFM pour retirer la tête AFM au point le plus élevé. et définissez cette position sur 0,0.
Soulevez délicatement la tête AFM de son support, puis montez-la sur l’étage d’échantillonnage en plaçant les pieds dans leurs fentes respectives. Pour calibrer le cantilever, utilisez la fonction de moteur pas à pas pour le rapprocher de la surface de l’échantillon. Cliquez ensuite sur Approche dans la fenêtre Mode de contact pour la spectroscopie.
Abaissez le porte-à-faux par petits incréments de 15 micromètres. Appuyez sur Acquérir pour capturer une courbe de force. Sélectionnez ensuite la courbe de force, ouvrez-la dans la fenêtre du Gestionnaire d’étalonnage et sélectionnez Mode basé sur le contact dans la section Méthode.
Utilisez maintenant la fonction de sélection de la plage d’ajustement et sélectionnez la courbe de rétraction en porte-à-faux pour un ajustement linéaire de la courbe. Ensuite, cochez la case Sensibilité pour convertir l’unité de force de volt en Newton. Soulevez le porte-à-faux de 100 à 200 micromètres dans le liquide et sélectionnez la fonction de bruit thermique De nouveau, cliquez sur Sélectionner la plage d’ajustement et ajustez la courbe en cloche du bruit thermique avec une courbe de Lawrence.
Après l’ajustement de la courbe, choisissez la case Constante de ressort K. Vérifiez que la constante du ressort est proche de la valeur du fabricant et notez-la pour référence future. Ensuite, placez l’échantillon monté sur lame des vaisseaux rétiniens oculaires de rongeur ou de la matrice sous-endothéliale sur la scène AFM et visualisez les vaisseaux rétiniens.
Sélectionnez Mode de contact pour la spectroscopie dans la section Expérience du logiciel. Réglez ensuite la force du point de consigne sur 0,5 nano-Newtons et cliquez sur Approche. À l’aide des vis de platine sur la platine AFM, positionnez soigneusement la sonde en porte-à-faux à l’endroit souhaité sur l’échantillon.
Cliquez sur Approche pour positionner le porte-à-faux plus près de l’échantillon, puis cliquez sur Acquérir pour capturer les courbes de force. Enfin, enregistrez toutes les courbes de force pour analyse. Les courbes d’approche et de rétraction obtenues à partir d’un capillaire rétinien isolé d’une souris diabétique étaient plus raides que celles obtenues à partir d’une souris non diabétique.
