Pour commencer, préparez et positionnez le rat anesthésié pour l’électrophysiologie. Appliquez des impulsions d’ondes carrées cathartiques monophasiques pour stimuler le nerf phrénique afin d’enregistrer les réponses CMAP. Augmentez progressivement l’intensité du stimulus jusqu’à ce que l’amplitude de la réponse cesse d’augmenter.
Ensuite, augmentez l’intensité du stimulus à environ 120 % du niveau requis pour une réponse maximale afin d’assurer une stimulation super maximale et d’enregistrer une réponse supplémentaire. Mesurez et documentez les amplitudes crête à crête du CMAP en millivolts. Administrer une stimulation sous-maximale d’une durée de 0,1 milliseconde à une fréquence de 1 hertz.
Augmentez progressivement l’intensité par incréments de 0,03 milliampère pour susciter des réponses progressives jusqu’à ce qu’une réponse minimale tout ou rien soit obtenue. Ensuite, acquérez la réponse initiale avec une intensité de stimulus comprise entre 2 et 10 milliampères. Après avoir enregistré la première réponse incrémentielle, obtenez des incréments supplémentaires avec des intensités de stimulus progressivement plus élevées par incréments de 0,03 milliampères.
Assurez-vous que le pic négatif initial des réponses incrémentielles s’aligne temporellement sur le pic négatif de la réponse CMAP maximale. Étant donné l’implication du diaphragme dans la respiration, vérifiez la stabilité et l’absence de fractionnement dans chaque réponse incrémentielle pour confirmer la cohérence entre les trois réponses dupliquées. Observez les réponses incrémentielles en temps réel et superposez-les aux enregistrements précédents pour une distinction visuelle.
Ensuite, vérifiez que l’amplitude d’incrément est d’au moins 25 microvolts. Après avoir enregistré 10 réponses incrémentielles, vérifiez que l’amplitude de chaque incrément ne dépasse pas 1/3 de l’amplitude totale de la réponse finale. Pour estimer l’amplitude moyenne du SMUP, faites la moyenne des valeurs de 10 incréments.
Ensuite, divisez l’amplitude maximale du CMAP par l’amplitude moyenne du SMUP pour déterminer le MUNE. Sept jours après l’injection intrapleurale de CTB-SAP, MUNE est tombée à 60 unités motrices fonctionnelles chez les rats adultes, contre 74 chez les rats témoins. L’amplitude du CMAP est restée relativement stable, suggérant que la germination collatérale est un mécanisme compensatoire possible.
Le diaphragme CMAP, SMUP et MUNE ont été mesurés sur 28 jours après l’injection. Le CMAP n’a montré aucun changement notable. L’augmentation moyenne de la POP chez les rats CTB-SAP était d’environ 50 à 60 %.
La MUNE a été réduite d’environ 40 % chez les rats CTB-SAP, ce qui indique des effets significatifs du temps dans le traitement CTB-SAP.
