24 heures après l’injection de nanoparticule magnétique, anti-microARN 10b, pesez la souris et calculez le volume de d-luciférine à administrer pour une dose de 150 milligrammes par kilogramme. Préparez une seringue de calibre 28 avec le volume protégeant la solution de la lumière directe. Une fois anesthésiée, frottez doucement la souris pour éviter de blesser davantage le site chirurgical et injectez la dose de d-luciférine par voie intrapéritonéale.
Laissez la souris récupérer et attendez 10 minutes avant d’imager. Après avoir préparé un système d’imagerie in vivo, ou scanner IVIS, placez le tapis noir à faible fluorescence sur la platine d’imagerie et configurez le cône nasal pour l’imagerie. Dans le logiciel, cliquez sur Assistant d’imagerie.
Ensuite, sélectionnez l’imagerie par bioluminescence, puis le filtre ouvert. Sur l’écran suivant, sélectionnez l’imagerie du sujet et du champ de vision. Placez la souris anesthésiée en position couchée sur le scanner IVIS.
Cliquez sur la séquence d’acquisition et, à l’aide des paramètres d’exposition automatique avec un seuil de signal minimum de 3000 comptes, capturez une image pour la localisation des cellules de glioblastome U-251 marquées à la luciférase. Ensuite, dans l’assistant d’imagerie, sélectionnez fluorescence, puis paire filtrée avec éclairage épi. Dans l’écran suivant, sélectionnez la sonde Cy5.5.
Sélectionnez le sujet et le champ de vision de l’image. À l’aide des paramètres d’exposition automatique avec un seuil de signal minimum de 6 000 points, capturez une image pour la localisation de nanoparticules magnétiques, anti-microARN 10b. Placez la souris anesthésiée sur le lit d’IRM.
Immobilisez et positionnez la tête pour le balayage à l’aide d’une barre d’occlusion et de barres d’oreille. Installez la sonde de température rectale lubrifiée et assurez-vous que la surveillance de la respiration et de la température fonctionnent. Positionnez la bobine de cerveau de souris sur la tête en insérant les chevilles sur le lit de la souris dans les trous de la bobine, et collez la bobine en place pour réduire les mouvements pendant le balayage.
Placez un petit tampon de circulation d’eau chaude sur le dessus de la souris pour maintenir la température corporelle. Déplacez la souris et le lit d’imagerie en position pour la numérisation. Dans le logiciel d’acquisition, lancez l’étape de configuration de l’oscillation pour régler et faire correspondre les bobines IRM.
Assurez-vous que la trace est centrée et aussi profonde que possible. Acquérir un balayage d’alignement de piste à trois plans du cerveau. À l’aide des paramètres suivants, acquérez des scans bidimensionnels pondérés en T2 pour détecter la tumeur.
Acquérez une carte b0 de l’ensemble du cerveau pour calculer un shim localisé à l’aide de l’utilitaire de shim de carte. Utilisez des images tridimensionnelles pondérées en étoiles T2 pour visualiser les nanoparticules. Avec les paramètres suivants, acquérez une carte d’étoiles T2 pour une imagerie supplémentaire des nanoparticules en utilisant l’image bidimensionnelle pondérée en T2 comme référence pour positionner le balayage sur la tumeur.
Acquérez 10 images d’écho positives avec un espacement temporel de cinq millisecondes. Au point final expérimental, pesez la souris et calculez le volume de d-luciférine à administrer pour une dose de 150 milligrammes par kilogramme. Effectuez une imagerie de bioluminescence en direct 10 minutes après l’injection, comme décrit précédemment.
Placez la boîte de Pétri avec le cerveau excisé de la souris euthanasiée dans le scanner IVIS. Imagez le cerveau avec des modalités de bioluminescence et de fluorescence en utilisant les mêmes paramètres d’acquisition que l’imagerie in vivo. Les signaux de fluorescence et de bioluminescence Cy5.5 chez les souris injectées d’anti-microARN 10b de nanoparticules magnétiques ont montré une colocalisation claire, indiquant l’administration des nanoparticules à la tumeur, tandis que les souris témoins n’ont montré aucun signal de fluorescence.
L’imagerie par fluorescence ex vivo a montré la localisation des nanoparticules dans les principaux organes de clairance, tels que le foie et les reins. Une diminution caractéristique du signal IRM pondéré en T2 démontre le potentiel des nanoparticules magnétiques, anti-microARN 10b en tant qu’agent de contraste IRM, à traverser la barrière hémato-encéphalique et son accumulation dans la région tumorale.
