La récidive tumorale est une cause majeure d’échec du régime de la résection chirurgicale du GBM. Notre protocole fournit un modèle unique de récidive du GBM pour des études de traitement local efficaces de la rechute, post-recherche. Cette technique fournit une méthode pratique et réalisable pour construire le modèle de rechute de GBM post-résection, et peut être utilisée dans diverses études sur la rechute de GBM.
Commencez par préparer l’animal. Coupez le cuir chevelu de la souris d’environ un centimètre le long de la ligne médiane sur le front droit avec des ciseaux ophtalmiques. Réglez l’appareil stéréotaxique pour vous assurer que la couture à chevrons et la pointe de fontanelle avant sont situées au même niveau.
À l’aide d’un coton-tige trempé dans du violet génie, marquez un point à un millimètre à l’avant, à 1,8 millimètre à droite et à trois millimètres de la fontanelle avant. Percez le point à l’aide d’une mini-perceuse crânienne d’un millimètre de diamètre. Créez un pore d’environ un millimètre de diamètre et un millimètre de profondeur.
Retirez le liquide céphalo-rachidien exsudé à l’aide d’un coton-tige stérile. Ensuite, aspirez cinq microlitres de suspension de cellules tumorales avec une microseringue. Alignez verticalement la pointe de l’aiguille de la microseringue avec le trou de forage du crâne et insérez jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille pénètre dans le plan du crâne sur trois millimètres.
Ensuite, rétractez l’aiguille de 0,5 millimètre. Ouvrez la microseringue et injectez la solution à une vitesse d’un microlitre par minute. Conserver l’aiguille pendant 10 minutes après l’injection.
Ensuite, retirez lentement la microseringue et appuyez sur le point d’injection avec une boule de coton stérile et sèche. Suturer le cuir chevelu avec une suture chirurgicale 10-0 non résorbable et désinfecter l’incision. Surveillez la santé de l’animal et gardez-le au chaud.
Une fois la souris réveillée, replacez-la dans la cage du logement. 10 jours après le port de la tumeur, détecter la tumeur transplantée. Pour cela, injectez la souris par voie intrapéritonéale avec de la fluorescéine de potassium, et 11 secondes plus tard, imagez la souris avec un système d’imagerie bioluminescente in vivo.
Séparez le tissu du cuir chevelu et le crâne et vérifiez le trou de forage utilisé pour construire le modèle orthotopique intracrânien GBM. Si le trou a guéri, identifiez-le à l’aide d’un appareil stéréotaxique et percez-le comme indiqué précédemment. Étendez le diamètre total à cinq millimètres avec une perceuse crânienne et retirez le liquide céphalo-rachidien exsudé avec un coton-tige stérile.
Focalisez le microscope sur la tête de la souris et ajustez les réglages pour vous assurer que le trou de forage est situé au centre du champ de vision. Couper les méninges avec des microciseaux. Ensuite, retirez une partie du tissu tumoral avec une microcurette et un microscalpel au microscope.
Arrêtez le saignement avec de la gaze stérile et lavez l’injection avec une solution saline physiologique stérile. À l’aide d’une seringue d’un millilitre, injecter 10 microlitres de l’hydrogel disponible dans le commerce dans la cavité de résection. En utilisant ce protocole, les cellules GBM ont été implantées dans le cerveau des souris et la croissance tumorale a été testée par imagerie bioluminescente in vivo le jour 10.
La résection et l’injection d’hydrogel ont été effectuées le jour 11. La taille des tumeurs dans le modèle post-résection de rechute du GBM était significativement plus petite que celle du modèle de GBM intracrânien orthotopique. La surveillance de la croissance tumorale résiduelle au jour 25 a montré la récurrence des tumeurs.
La coloration H & E a confirmé que le modèle de rechute de GBM post-résection a été construit avec succès et que les tumeurs résiduelles ont récidivé de manière significative après la résection. La chose la plus importante à retenir dans cette procédure est de couper les méninges et de retirer une partie du tissu tumoral au microscope.
