Microscopie à fluorescence ex vivo de coupes de tissu cérébral murin

Pour commencer, prenez le cerveau congelé stocké dans un composé à température de coupe optimale hors d’un stockage à 80 degrés Celsius et placez-le à l’intérieur de la chambre du cryostat. Laissez les échantillons se réchauffer à la température de la chambre. À l’aide d’un rasoir à un seul tranchant, coupez le cerveau coronairement au site d’injection.

Montez l’échantillon sur le disque de l’échantillon en utilisant une petite quantité de température de coupe optimale. Appliquez une pression suffisante avec un poids réfrigéré à l’intérieur de la chambre pour un montage stable de l’échantillon. Déplacez l’échantillon monté et le disque de l’échantillon sur la tête de l’échantillon.

Coupez le tissu à la profondeur souhaitée en prélevant des sections de 20 micromètres. Une fois la profondeur souhaitée atteinte, ajustez le cryostat pour prélever des sections de cinq à sept micromètres de l’échantillon. Montez ensuite les sections sur la lame de verre pré-étiquetée.

Fixez les sections dans le paraformaldéhyde à 4 % pendant 15 minutes. Après la fixation, rincez cette lame trois fois avec DPBS. Ajoutez une goutte de 40 microlitres de support de montage contenant du DAPI sur la lame.

Placez soigneusement une lamelle en verre sur le support. Sous microscopie à fluorescence, visualisez le tissu à l’aide de DAPI et de Cy5.5. En microscopie à fluorescence ex vivo de tissus tumoraux, le signal fluorescent CY 5.5 observé a confirmé la délivrance de nanoparticules magnétiques.