Coloration de cellules de moelle osseuse de souris avec Hoechst pour détecter les cellules de population latérale par cytométrie en flux

Pour commencer, prélevez des cellules de moelle osseuse de la souris et ajoutez cinq microgrammes par millilitre de Hoechst 33342 à deux millilitres de suspension cellulaire. Préparez également le tube de contrôle négatif. Incuber dans un bain-marie à 37 degrés Celsius pendant 90 minutes avec une légère agitation toutes les 30 minutes Après l’incubation, refroidissez les cellules sur de la glace pendant cinq minutes, puis centrifugez-les à 250G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius.

Remettez les cellules en suspension dans une solution à froid contenant la solution saline équilibrée de Hank avec 2 % de FBS. Centrifugez à nouveau à quatre degrés Celsius pendant cinq minutes. Ensuite, remettez en suspension la pastille cellulaire résultante dans 500 microlitres de solution courante par échantillon.

Avant l’analyse par cytométrie en flux, complétez les cellules avec deux microgrammes par millilitre d’iodure de propidium et placez-les sur de la glace pendant environ cinq minutes.