Pour commencer l’enrobage de fibronectine, sélectionnez 12 inserts et 2 plaques de 24 puits. Placez les inserts dans une plaque à puits, en créant deux rangées de six. Préparez un microgramme par millilitre de solution de fibronectine en mélangeant 52 microlitres de solution mère de fibronectine et 1,2 millilitre de PBS dans un tube de 1,5 millilitre.
Répartissez 100 microlitres de la solution de fibronectine dans chaque insert. Incuber les inserts dans la plaque de puits à 37 degrés Celsius pendant trois heures. Après l’incubation, retirez l’excès de solution de fibronectine de chaque insert.
Lavez les inserts deux fois en ajoutant 100 microlitres d’eau distillée stérile dans chaque insert. Retirez l’eau dans le même ordre qu’elle a été ajoutée pour assurer un temps de lavage constant entre les inserts. Lavez maintenant les inserts avec 100 microlitres de milieu de culture cellulaire, puis retirez le milieu des inserts.
Ensuite, semez 200 microlitres de suspension cellulaire A431 dans les inserts. Pour le contrôle négatif, pipetez 200 microlitres de milieu de culture cellulaire dans les inserts. À l’aide d’un marqueur permanent, tracez une ligne divisant la deuxième plaque de puits en deux colonnes de trois puits de large.
Séparez chaque colonne en rangées. Étiquetez chaque région de la grille avec les paramètres appropriés. Ajoutez un millilitre de milieu de culture cellulaire dans chaque puits.
Transférez les inserts de la plaque de préparation à leur emplacement approprié dans la plaque d’expérience étiquetée et incubez à 37 degrés Celsius pendant 12 heures.
