Extraction et stockage des phéromones sexuelles volatiles des femelles C. elegans et C. remanei

Pour commencer, séparez les femelles vierges de l’étape 200 L4, brouillard-2 Caenorhabditis elegans un jour avant l’extraction des phéromones. Répartissez les femelles sur trois plaques distinctes OP50 NGM de six centimètres. Le jour de l’extraction, transférez 100 femelles vierges d’un jour dans un microtube à centrifuger contenant un millilitre de tampon M9.

Après le dernier lavage, incubez les femelles dans 100 microlitres de tampon M9 pendant six heures à 20 degrés Celsius pour permettre la production de phéromones. De même, isolez 15 à 20 femelles de Caenorhabditis remanei de stade L4 sur trois plaques NGM OP50. Après le lavage, incubez cinq femelles vierges dans 100 microlitres de tampon M9 pendant six heures à 25 degrés Celsius.

Centrifugez les vers à 15 000 G pendant 30 à 60 secondes. Transférez soigneusement le surnageant contenant des phéromones dans un tube propre. Jetez le tube contenant la pastille de ver.

Conservez l’extrait de phéromones sexuelles volatiles recueilli à moins 80 degrés Celsius.