Pour commencer, retirez de l’incubateur la plaque de culture contenant les vers femelles hermaphrodites adultes. Après avoir synchronisé les vers him-5, lavez les vers cinq fois avec le tampon M9. Transférez les mâles adultes d’un jour de la plaque ensemencée dans un tube contenant un tampon M9.
Placez les vers sur une plaque NGM non ensemencée pour éliminer les bactéries résiduelles et éviter l’interférence des aliments pendant le test. Préparez une plaque de dosage de chimioattraction avec une vis sans fin à 1,5 %, du chlorure de sodium 25 millimolaires, une base Tris 1,5 millimolaire et du chlorhydrate Tris 3,5 millimolaires. Faites chauffer la vis sans fin dans la solution de chimioattraction au micro-ondes jusqu’à ce qu’elle soit complètement dissoute.
Après refroidissement, utilisez une pipette pour répartir uniformément la solution de chimioattraction dans les boîtes de Pétri. Laissez les couvercles ouverts dans un endroit propre pour permettre à la surface de la tarière de sécher légèrement. Une fois que la surface a bien séché, fermez les couvercles.
Pour effectuer le test de chimioattraction, marquez trois endroits distincts sur le couvercle et le dessous de la boîte de Pétri. Appliquez deux microlitres d’azoture de sodium molaire à chaque point expérimental et témoin de la plaque. Choisissez 20 vers mâles en bonne santé et se déplaçant librement avec un ramasseur de vers.
Sous un microscope à dissection, relâchez le ver au point de départ. Ajoutez rapidement deux microlitres de tampon M9 au point de contrôle et deux microlitres de phéromone sexuelle à l’endroit expérimental sur le couvercle. Fermez doucement le couvercle et placez l’assiette dans un endroit calme et stable à la température.
Après 30 minutes, notez le test en comptant le nombre de vers à chaque endroit. Pour une meilleure évaluation de la chimiotaxie, enregistrez les trajectoires des vers à l’aide d’une caméra. L’indice de chimiotaxie pour les mâles HIM-5 était constamment supérieur à 0,5, indiquant une forte attirance pour la source de phéromones sexuelles, tandis que l’indice de chimiotaxie pour les mâles SRD-1 était autour de zéro.
Des tests de chimioattraction réussis ont montré que les mâles se rapprochaient de la source de phéromones au fil du temps, avec des trajectoires codées en couleur indiquant le temps, la distance, la vitesse, la rectitude et l’exactitude de la direction.
