Pour commencer, procurez-vous des moustiques stérilisés en surface dans un tube de 1,5 millilitre contenant du PBS. Transférez un moustique nettoyé sur une goutte de PBS 1X stérile placée sur la lame de microscope. À l’aide d’une pince à épiler, tenez le thorax du moustique pour l’empêcher de bouger.
Placez ensuite une aiguille au niveau du cou juste en dessous de la tête et tirez doucement sur la tête du moustique pour la séparer du thorax. À l’aide d’une aiguille, coupez les glandes salivaires au niveau du canal salivaire. Récupérez les glandes avec l’aiguille et placez-les dans une nouvelle goutte de PBS pour les rincer.
Ensuite, à l’aide d’une aiguille, récupérez les glandes salivaires. Placez le moustique sur son dos pour commencer à disséquer les ovaires. À l’aide d’une pince, tenez le moustique par le thorax pour l’empêcher de bouger et perforez le troisième segment abdominal, en commençant par le bas, avec une aiguille.
Tout en perçant le troisième segment abdominal, tirez vers le bas pour l’ouvrir et révéler les organes internes. Retirez tous les morceaux restants de l’exosquelette du moustique pour faciliter la libération des organes. Récupérez les deux ovaires à l’aide d’une pince stérilisée et placez-les dans une nouvelle goutte de PBS stérile sur la lame de microscope pour rincer.
Transférez les ovaires rincés dans un tube de 1,5 millilitre contenant 100 microlitres de tampon de conservation. Ensuite, à l’aide d’une aiguille stérile, séparez l’intestin moyen de l’intestin antérieur et postérieur. Retirez les tubules de Malpighi de l’intestin moyen et placez l’intestin moyen dans une nouvelle goutte de PBS stérile pour le rincer et éviter la contamination.
Transférez ensuite l’intestin moyen dans une autre goutte de PBS stérile. À l’aide d’une pince, ouvrez l’intestin moyen pour libérer les bactéries. Pipetez toutes les bactéries contenant du PBS et le tissu de l’intestin moyen dans un nouveau tube stérilisé de 1,5 millilitre contenant 100 microlitres de tampon de conservation.
Ajoutez cinq microlitres de PBS sur la même zone de la lame de microscope où l’intestin moyen a été placé précédemment. Pipetez le PBS dans le même tube de 1,5 millilitre pour récupérer les bactéries qui auraient pu coller à la lame. Enfin, utilisez une pince stérile pour saisir la carcasse du moustique et rangez-la dans un tube stérilisé de 1,5 millilitre contenant 100 microlitres de tampon de conservation.
