Merci à Elena Mitsi (assistant de recherche) et Sœur Carole Hancock (infirmière en recherche) et le personnel du théâtre pour leur contribution au tournage, et à David Shaw (infirmière en recherche) pour son soutien avec nos bronchoscopies de recherche. Merci également à notre bénévole Rebecca Dunphy pour permettre cette procédure pour être filmé.

Une. Les sujets sont accueillis à leur arrivée par l&#39;infirmière de recherche en santé respiratoire <ol><li> Le sujet a été à jeun depuis&gt; 4 h pour les aliments solides et 2 h pour les liquides clairs 1. </li><li> La procédure est réalisée comme un cas de jour avec des contrôles pré-et post-procédure appropriée (conformément à la politique standard de l&#39;hôpital). </li><li> Le sujet porte une chemise d&#39;hôpital. </li><li> Une canule de petit calibre est inséré (de préférence dans la main gauche) et reste en place jusqu&#39;à la fin de la période de récupération post-procédure 1. </li><li> Observations préprocédure sont prises (pression artérielle, fréquence cardiaque, saturation en oxygène [des] sats). </li><li> Le sujet est transféré à la suite de la bronchoscopie. </li></ol> 2. Le sujet est-elle prête pour la procédure dans la suite par une recherche des cliniciens expérimentés dans respiratoire bronchoscopie <ol><li> L&#39;équipement de surveillance est fixée notamment; 3 ECG, oxymètre de pouls 1,10 et sphygmomanomètre. Anesthésiqueappui d&#39;ic n&#39;est pas nécessaire, y compris le consentement éclairé. </li><li> L&#39;oxygène peut être administré via une canule nasale jusqu&#39;à 4 L / min, pour atteindre sats&gt; 90% 1. </li><li> L&#39;opérateur vérifie le bronchoscope, cela implique d&#39;assurer aspiration efficace en aspirant une solution saline normale stérile. </li><li> L&#39;anesthésie topique avec de la lidocaïne est atteint dans les voies nasales (en utilisant Instillagel 1) et de la muqueuse buccale (à l&#39;aide de la xylocaïne) </li><li> Si la sédation est approprié et demandé par le sujet, le midazolam par voie intraveineuse est administré 1. Un agent de renversement approprié (flumazénil) est immédiatement disponible. </li><li> Matériel de réanimation doit être disponible immédiatement 1,10. </li></ol> 3. Le bronchoscope est insérée et positionnée <ol><li> Intubation est généralement par le nez. Si ce n&#39;est pas possible en raison de polypes nasaux, cornets enflammées, ou tout inconfort alors le sujet est intubé par la bouche (bouche-garde est utilisé pour prévenirnuire à la portée ou les dents de l&#39;objet). </li><li> L&#39;anesthésie topique au niveau du larynx est réalisée en utilisant 4% de lidocaïne, généralement un total de 4-6 ml est utilisé. Généralement ce qui provoque la toux sur instillation. </li><li> Les cordes vocales sont passés, et d&#39;autres l&#39;anesthésie de la muqueuse à l&#39;aide de fractions de 2 ml de lidocaïne 2% à la carène, à la division du lobe inférieur droit (RLL) et lobe moyen droit (RML) et à l&#39;entrée RML. </li><li> Le bronchoscope est positionné à l&#39;intérieur de la RML, de préférence dans le segment médian, dans une position où il suffit d&#39;être dans une position sûre distale mais pas trop distale de telle sorte que les voies aériennes s&#39;effondre lorsque l&#39;aspiration est appliquée («test Clin &#39;à l&#39;aide du bouton d&#39;aspiration ). </li><li> Bon positionnement est indiqué lors de l&#39;essai de clin d&#39;oeil d&#39;un bronchoscope qui peut être entièrement maintenue en position par le bronchoscopiste et les voies respiratoires qui ne se ferme pas complètement immédiatement aspiration douce. </li></ol> 4. Le BAL est joué <ol><li> Quatre 60 ml seringues sont prérempli de solution saline normale réchauffé - 60 ml, 50 ml, 50 ml et 40 ml dans des seringues successives. Lorsque le sujet et sont prêts bronchoscopiste la première seringue de sérum physiologique est inculquée par l&#39;assistant de bronchoscopie tandis que le bronchoscopiste maintient la position dans la RML. </li><li> Aspiration de main douce est ensuite effectuée par l&#39;assistant en utilisant le même port et seringue de 50 ml. </li><li> Cette procédure est ensuite répétée en outre un 3x, avec un volume maximal de 200 ml utilisées dans notre technique spécifique. </li><li> Le fluide BAL récupéré est ensuite expulsé doucement dans des conteneurs appropriés ont déjà eu lieu sur la fonte des glaces. Les récipients en verre peuvent être presiliconized afin d&#39;inhiber la fixation cellulaire et de maximiser le rendement de la cellule. </li><li> Le LBA semble brumeuse contre la lumière avec des bulles de savon de surface formés par des agents tensioactifs. </li><li> Le bronchoscope est entièrement retirée lentement. </li><li> Le LBA est transporté sans délai sur la glace pour un traitement immédiat. </li></ol> 5. Récupération Sujet </p&gt; <ol><li> Le sujet est récupérée pour 2-4 heures par l&#39;infirmière de recherche en santé respiratoire dans un service. </li><li> Pendant ce temps, ils sont autorisés à se reposer et seulement manger et boire&gt; 60 min 1 après la procédure (lorsque leur hirondelle est évaluée comme sûr), afin de réduire les risques d&#39;aspiration. </li><li> Observations poste de procédure sont surveillés et enregistrés. Un examen clinique se produit avant la décharge. </li><li> Le sujet est informé prédécharge quant aux effets secondaires courants (fièvre, doux droit submammary gêne thoracique, mal de gorge) et un numéro de contact en cas d&#39;effets secondaires importants se produisent 1. </li><li> Le sujet est un suivi à 1-5 jours après l&#39;intervention d&#39;un contact clinique. Cela peut être soit par téléphone ou en personne. </li></ol> 6. Les cellules sont isolés en laboratoire - Effectuer sur fonte des glaces, si possible, <ol><li> Le volume de fluide BAL est enregistré et filtré à travers une double couche de tampon de gaze stérilepour enlever les bouchons de mucus dans prérefroidie, tubes de 50 ml à centrifuger stériles. </li><li> Les cellules sont sédimentées par centrifugation à 500 xg à 4 ° C pendant 5 à 10 min et lavées par vortex dans 50 ml de solution saline normale à froid. Centrifugation est répétée une fois. </li><li> Les cellules sont remises en suspension dans du milieu de culture (RPMI-1640 + 10% de sérum bovin foetal + 2 mM de L-glutamine + pénicilline [40 UI / ml], de la streptomycine [75 UI / ml], et de l&#39;amphotéricine B [0,5 UI / ml]) et comptage différentiel effectuée en utilisant un volume égal de bleu trypan et un hémocytomètre. </li><li> La suspension cellulaire est normalisée à la densité requise (on utilise 1 x 10 6 cellules / ml), introduit à la pipette dans des plaques de culture tissulaire appropriées, et incubées à 37 ° C pendant 3 heures pour permettre l&#39;adhérence des macrophages. 1 ml de cette suspension de cellules par puits est approprié pour des plaques de culture à 24 puits. </li><li> Pour le travail de lymphocytes, après 3 h d&#39;incubation, le milieu de culture est doucement à la pipette de haut en bas 3x, et recueilli. Ce milieu contient les lymphocyteset les macrophages non adhérentes et peut être utilisé pour évaluer la fonction des lymphocytes, il peut aussi être utilisé dans les étapes de purification, par exemple avec des billes magnétiques CD14 pour éliminer les macrophages. </li><li> Pour le travail macrophage, après 3 h d&#39;incubation, le milieu est soigneusement retiré avec un minimum de pipetage et remplacé par du frais, chaud milieu sans antibiotiques (RPMI 1640 + 10% de sérum bovin foetal + 2 mM de L-glutamine). Les macrophages sont adhérents à la plaque de culture de tissus (voir la figure 1). </li></ol>

<ol>
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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage.">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li><li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage.">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li></ol>

Andrea M. Collins est financé par la Fondation Bill et Melinda Gates, et aucun conflits d&#39;intérêts potentiels. Elle a reçu des fonds de Merck (MSD) et GSK pour assister à des conférences et des honoraires de conférencier. 50 LBA de recherche effectuées indépendamment. Jamie Rylance est financé par le Wellcome Trust, et n&#39;a aucun conflit d&#39;intérêts. Il n&#39;a pas reçu d&#39;autres fonds. 70 LBA de recherche effectuées indépendamment. Daniel G. Wootton est financé par une bourse de doctorat INDH, et n&#39;a pas de conflits d&#39;intérêts. 40 LBA de recherche effectuées indépendamment. Angela D. Wright n&#39;a pas de conflits d&#39;intérêts potentiels. Assistée avec plus de 100 BAL de recherche. Adam KA Wright n&#39;a pas de conflits d&#39;intérêts potentiels. Il a traité plus de 50 échantillons de LBA. Duncan G. Fullerton </strong&gt; N&#39;a pas de conflits d&#39;intérêts potentiels. 100 BAL de recherche effectuées indépendamment. Stephen B. Gordon n&#39;a pas de conflits d&#39;intérêts potentiels. Il a reçu des fonds de Merck (MSD) et Novartis à assister à des conférences. 400 BAL de recherche effectuées indépendamment.

Pour obtenir de bons résultats ce qui suit sont utiles: <ol><li> Bon anesthetisation à la base de la langue et de l&#39;oropharynx postérieur. Ceci est important car il améliore la tolérance de la procédure de l&#39;objet et de confort. </li><li> Soit un pédiatrique (diamètre extérieur de 3.4 à 3.6 mm) ou bronchoscope adulte (diamètre extérieur de 4.8 à 5.9 mm) peuvent être utilisées. </li><li> Si il n&#39;y a aucune gêne lors de l&#39;intubation nasale, intubation orale est préférée. En général intubation nasale est soit une technique simple ou devrait être abandonnée. </li><li> Après instillation initiale de la lidocaïne à l&#39;oropharynx, le sujet peut préférer le bronchoscope retirée en attendant le début de l&#39;anesthésie, en particulier si le bronchoscope est inséré par voie orale. </li><li> Veiller au moins 10 x 10 ml seringues préremplies sont à seulement 2-4 ml de lidocaïne. L&#39;air doit être laissé dans les seringues permettant d&#39;améliorer la prestation de l&#39;anesthésie directement sur les cordons et les muco endobronchiquesa. </li><li> Depuis la toux au cours de la procédure réduit significativement le rendement BAL; utilisant une solution saline chauffée et ayant de bonnes anesthésie des muqueuses sont importants pour réduire ce. </li><li> Les seringues de 50 ml doivent être remplies au préalable avec une solution saline chauffée. Il est commun pour les 50 premiers ml de solution saline normale inculquées à donner entre 10-20 ml raison de la perte d&#39;espace mort et le reste en cours d&#39;exécution dans les voies aériennes terminales. D&#39;autres aliquots de retour une plus grande proportion de fluide. </li><li> L&#39;opérateur doit toujours vérifier le bronchoscope avant l&#39;intubation, notamment en veillant à aspiration efficace en aspirant une solution saline normale stérile. Perte d&#39;aspiration peuvent souvent se produire en raison de vrillage du tube ou de fuites autour des connexions avec le bronchoscope ou dispositif d&#39;aspiration. </li><li> Au cours de l&#39;aspiration manuelle, idéalement les voies aériennes ne devrait pas s&#39;effondrer. Si l&#39;aspiration s&#39;effondre récurrente des voies respiratoires, les rendements BAL sont réduites à un mécanisme de soupape, et l&#39;inflammation locale et des saignements est plus probable: à son tour, rend les voies respiratoires mminerai irritable et la toux plus probable. Choisir le RML sous-segmentaire branche la plus appropriée et l&#39;utilisation de pressions d&#39;aspiration faibles sont donc à la fois importante. </li><li> Lorsque l&#39;air est constamment aspiré revérifier la connexion de la seringue au bronchoscope et également la position du bronchoscope dans les voies aériennes distale. Si c&#39;est un problème récurrent, post-procédure s&#39;assurer qu&#39;il n&#39;y a pas de trous dans le bronchoscope lui-même. </li><li> BAL de fumeurs est souvent plus foncée due à la présence de particules intracellulaires. Les fumeurs peuvent tolérer la bronchoscopie moins bien, et avoir augmentation de la toux. </li><li> Le rendement préférable de volume BAL est&gt; 100 ml. Un rendement de&gt; 150 ml est excellent. Nous n&#39;avons pas connu de rendements&gt; 170 ml. Il n&#39;y a pas de relation linéaire entre le rendement de la cellule et le rendement volumique BAL. </li><li> Les rendements de &lt;100 ml sont, dans notre expérience, plus susceptible de conduire à des effets secondaires tels que la toux, des douleurs thoraciques et de la fièvre. Nous conseillons que les sujets avec des rendements de &lt;100 ml Soyez recoVERED dans la position latérale gauche, ce qui peut faciliter le drainage de tout fluide restant du poumon. </li><li> Le contact clinique doit être faite avec le sujet dans les 1-5 jours pour assurer sans effets secondaires. </li><li> Midazolam sédation est utilisée pour &lt;50% des sujets dans le Royaume-Uni et &lt;5% au Malawi. Le midazolam ne semble pas directement à améliorer la tolérance; certains opérateurs estiment que la sédation peut parfois être contre-productive dans le maintien d&#39;un dialogue cohérent (et rassurant) avec le sujet. </li><li> Dans notre expérience, il ya une courbe d&#39;apprentissage importante avec cette technique. Par exemple la coordination entre le médecin et l&#39;infirmière prend du temps et les rendements sont souvent plus bas au début du processus d&#39;apprentissage. </li><li> Chez les sujets séropositifs, nous utilisons des antibiotiques à titre prophylactique prebronchoscopy. </li></ol>

Fond La fibroscopie bronchique a été développé pour la pratique clinique, il est largement utilisé à la fois diagnostique et thérapeutique 1,2. Lavage broncho-alvéolaire (BAL) élimine les cellules non adhérentes et les poumons revêtement fluide à partir de la surface muqueuse; biopsie est utilisée pour échantillonner les tissus des muqueuses et sous-muqueuses. Dans les environnements de recherche, BAL permet échantillonnage de innée (macrophages pulmonaires 3-5), cellulaire (et B et T-cellules 6), et humorale (immunoglobuline 7) réponses dans le poumon. BAL est internationalement accepté à des fins de recherche et 8 depuis 1999 la technique a été réalisée en 1000&gt; sujets au Royaume-Uni et au Malawi par notre groupe. Nous utilisons cette technique dans les études de la réponse immunitaire innée, cellulaires et humorales à l&#39;antigène pneumococcique y compris expérimentale transport humain pneumocoque 9,17, la fumée de biomasse 5, le VIH et la vaccination, et complément étudiants de traitementmeurt dans la récupération de pneumonie. Notre technique utilise une aspiration douce main de liquide instillé, ce qui est conçu pour maximiser le volume BAL retourné et appliquer une force de cisaillement minimum sur l&#39;épithélium cilié afin de préserver la structure et la fonction des cellules dans le liquide de LBA. Dans un contexte de recherche BAL utilise une technique différente de celle pratiquée par les voies respiratoires et les médecins de soins intensifs (de lavage souvent appelée bronchique, lavages, lavage, ou LBA) qui visent à obtenir un avantage diagnostique ou thérapeutique. La technique de recherche est conçu pour récolter les cellules et de préserver la viabilité à faciliter la croissance de cellules dans une culture ex vivo. Pour ces raisons, la technique de recherche utilise un volume instillation plus grande (typiquement de l&#39;ordre de 200 ml) et emploie aspiration manuel afin de réduire les dommages cellulaires. Les patients reçoivent un anesthésique local, offerts sédation consciente (midazolam), et tolèrent la procédure bien avec des effets secondaires minimes. Subjectives verbale et écriteinformations t améliore la tolérance et le consentement éclairé écrit est obligatoire 1. Objectif L&#39;objectif global est que la procédure doit être sûr et efficace. Sujets devraient pas connaître de perturbation physiologique et les opérateurs devraient systématiquement collecter plus de 100 ml de BAL de sujets. Après la procédure, les sujets devraient ressentir des effets secondaires minimes. Sécurité Sécurité du sujet est primordiale. Les sujets sont choisis avec soin en utilisant des critères d&#39;inclusion et d&#39;exclusion clairs. Ce protocole comprend une description des risques potentiels et les mesures prises pour les atténuer. Contre-indications à la bronchoscopie de recherche peuvent être exprimés en absolu ou relatif, et sont inclus dans notre protocole de l&#39;étude que l&#39;exclusion et les critères d&#39;inclusion. Nos sujets sont tous examinés pour assurer la pleine santé. Contre-indications absoluesinclure la colonne vertébrale cervicale instable, l&#39;hypoxie ne répond pas, l&#39;angine de poitrine instable, diathèse hémorragique, et une arythmie cardiaque maligne. Contre-indications relatives, y compris les conditions associées à une augmentation du taux de complications, notamment: Général: sujet 1, tout problème médical général, par exemple l&#39;épilepsie importante, avant la bronchoscopie mal tolérée, réactions indésirables connues à la lidocaïne ou le midazolam, la grossesse, une mauvaise nutrition mal coopérative. Respiratoire: hypoxie [saturations (CST) sur l&#39;air &lt;94%], l&#39;hypercapnie, l&#39;asthme instable 1, la fonction respiratoire altérée de manière significative 1 (FEV 1 &lt;1 L), l&#39;hypertension artérielle pulmonaire. Cardiovasculaire: urémie, dans les 6 semaines de l&#39;infarctus du myocarde 1, supérieure obstruction de la veine cave. Autres: immunosuppression (notre groupe se produit régulièrement cette procéduredure chez les sujets VIH positifs). Voir le Tableau 1 - Risques liés aux BAL pour la recherche.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:966px;" width="966">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:25px;">
			Material
			</td>
			<td style="width:161px;height:25px;">
			Company
			</td>
			<td style="width:151px;height:25px;">
			Catalogue Number
			</td>
			<td style="width:410px;height:25px;">
			Comments
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fibreoptic bronchoscope, light and suction source
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Surgical gown, sterile gloves
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sphygnomanometer
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Pulse oximeter
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			3 lead ECG monitor
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Nasal oxygen delivery 2-4l/min
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine 10% spray (Xylocaine)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			AstraZeneca
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine hydrochloride 2%
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine gel (Instillagel)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Farco-Pharma, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Normal saline, sterile 200ml
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Warm to 30oC
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			10ml taper-end syringe (x10)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of lidocaine
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Intravenous cannula 18G
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of midazolam
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Midazolam
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For sedation
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Flumazenil
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			60ml taper-end syringes (x4)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For normal saline injection and BAL fluid withdrawal.
			May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile gauze swab
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Vernaid, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile container for BAL fluid
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			See text and comments
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sigmacote
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			SL2
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer&#8217;s MSDS
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;"></td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred.
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon Cytospin centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			RPMI 1640 medium with L-glutamine
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			R8758
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fetal bovine serum
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			F6178
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Penicillin-Streptomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			P4333
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Amphotericin B
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A2942
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Tissue culture plates
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Greiner Bio-One, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			662160
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Glass microscope slides
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytofunnel
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A78710003
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytoclip
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			59910052
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Merck, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			111661
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Use according to manufacturer&#8217;s instructions
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bronchoalveolar lavage (bal) for research; obtaining adequate sample yield

Nous décrivons technique recherche pour fibroscopie avec lavage bronchoalvéolaire (BAL) utilisant main manuel aspiration tenue pour éliminer cellules n&#39;adhèrent et poumon fluide doublure partir la muqueuse. Dans les environnements de recherche, BAL permet échantillonnage de innée (macrophages du poumon), cellulaires (B et cellules T), et humorale (immunoglobulines) réponses dans le poumon. BAL est internationalement accepté à des fins de recherche et depuis 1999 la technique a été réalisée en 1000&gt; sujets au Royaume-Uni et au Malawi par notre groupe. Notre technique utilise une aspiration douce main de liquide instillé, ce qui est conçu pour maximiser le volume BAL retourné et appliquer une force de cisaillement minimum sur l&#39;épithélium cilié afin de préserver la structure et la fonction des cellules dans le liquide de LBA et de préserver la viabilité de faciliter la croissance des cellules en culture ex vivo. La technique de recherche utilise donc un plus grand volume insdistillat (typiquement de l&#39;ordre de 200 ml) et emploie aspiration manuel afin de réduire les dommages cellulaires. Les patients reçoivent un anesthésique local, offerts sédation consciente (midazolam), et tolèrent la procédure bien avec des effets secondaires minimes. Informations sous réserve verbale et écrite améliore la tolérance et le consentement éclairé écrit est obligatoire. Sécurité du sujet est primordiale. Les sujets sont choisis avec soin en utilisant des critères d&#39;inclusion et d&#39;exclusion clairs. Ce protocole comprend une description des risques potentiels et les mesures prises à les atténuer, une liste de contre-indications, et pré-contrôles post-procédure, ainsi que des techniques de bronchoscopie et de laboratoire précises.

De bons résultats cliniques sont un volume BAL de plus de 100 ml et un sujet qui a connu tout au plus, un léger inconfort (voir le tableau 1). Cela exige un sujet détendue et coopérative. Le clinicien doit être confiant, tout à fait prêt (Matériaux), et de compréhension envers les bénévoles. Inter-et intra-sujet variabilité du rendement cellulaire (y compris leucocytaire) a été décrite. Le nombre de cellules dérivées de sujets sains sont généralement&gt; 90% de macrophages avec un petit nombre de neutrophiles (&lt;2%) et les lymphocytes (5-10%). BAL cellules centrifugées sur des lames de microscope peut être teinté avec un colorant nucléaire différentiel pour obtenir cette information (figure 1). Sur la figure 1, les cellules BAL ont été fixées et colorées en utilisant Hemacolor coloration selon les instructions du fabricant. Au moins 300 cellules doivent être comptées pour obtenir des résultats fiables pour les macrophages,neutrophiles et les lymphocytes, cellules pour 500 types de cellules rares. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Danger </td><td> Risque </td><td> Réduit dans ce protocole par: </td></tr><tr><td colspan="3"> Effet de la bronchoscopie et BAL 1, 14 </td></tr><tr><td> Léger malaise </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Analgésie et la sédation appropriée. Approche confiante et bienveillante à l&#39;objet. </td></tr><tr><td> Épistaxis </td><td> &lt;1% # </td><td> Une légère pression pour l&#39;intubation nasale seulement. Si le sujet ou l&#39;inconfort ouverture rétrécie - intubation orale à la place. </td></tr><tr><td> Hémorragie endobronchique (hémoptysie) </td><td> &lt;0,1% * 15 </td><td> Pas de biopsies prises. Un contrôle attentif pendant la bronchoscopie - éviter muqueuse respiratoire. </td></tr><tr><td> Nausea, des vomissements et une pneumonie par aspiration </td><td> &lt;0,02% 14 # </td><td> Le jeûne pour la nourriture solide&gt; 4 h préprocédure 1. Anesthésie topique adéquate. La position Semirecumbent durant la procédure. Attention, post-procédure observation. </td></tr><tr><td> Fièvre </td><td> 0,01 14-1% # 16 </td><td> Concerne l&#39;inflammation, et peut minimisé par la collecte maximale de BAL. Seul lobe BAL seulement. # </td></tr><tr><td> Douleurs dans le nez / gorge et enrouement </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Anesthésie topique adéquates du nez, de la gorge et du larynx (en minimisant la toux). </td></tr><tr><td> Infection </td><td> &lt;0,1% en séronégatifs, 1% dans séropositifs 14, # </td><td> Norme bronchoscope procédure de lavage 1. Seul lobe BAL seulement. # La reconnaissance précoce de l&#39;infection: l&#39;examen clinique dans 1 heure und un contact clinique 1-5 jours après la bronchoscopie. </td></tr><tr><td> Douleur thoracique / toux </td><td> &lt;0,2% 14, # </td><td> Seul lobe BAL seulement. Collection maximale BAL. # </td></tr><tr><td colspan="3"> Effets de la drogue: la lidocaïne, midazolam </td></tr><tr><td> Arythmie </td><td> Très rare * </td><td rowspan="3"> Maximum de 5 mg / kg 14 lidocaïne utilisée. Sérum physiologique réchauffé inculqué. # L&#39;oxymétrie de pouls (sats&gt; 90% avec la supplémentation en oxygène), la surveillance cardiaque pendant toute la procédure. Antagoniste des benzodiazépines (flumazénil) disponible immédiatement. </td></tr><tr><td> Désorientation / agitation </td><td> &lt;0,1% † # </td></tr><tr><td> Dépression cardio-respiratoire </td><td> Très rare * </td></tr></tbody></table> * Non connu dans notre groupe dans plus de 1500 procédures de recherche. † idiosyncratic plutôt que la réaction dose-dépendante. # L&#39;expérience de notre groupe dans plus de 1500 procédures de recherche. Tableau 1. Risques liés aux BAL pour la recherche. Cela comprend le danger ou de risque et comment cela se réduit en utilisant la technique décrite. Effets de la bronchoscopie / BAL et aussi les effets des drogues médicinales utilisées sont incluses. <img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> Figure 1. Glisser Microscope Affichage BAL macrophages et des neutrophiles occasionnel. BAL cellules ont été fixées au méthanol et colorées avec Hemacolor rouge (éosine Y) et bleu (azur B).

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Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Nous décrivons une technique de recherche pour la fibroscopie bronchique et lavage broncho-alvéolaire en utilisant aspiration basse pression. La technique est utilisée pour récolter des cellules immunitaires à partir des surfaces de broncho-pulmonaire. L&#39;anesthésie locale et sédation consciente légère (midazolam) est utilisé. Sujets tolèrent les effets secondaires minimes procédure ainsi et d&#39;expérience.

Lavage broncho-alvéolaire (LBA) pour la recherche; obtention adéquate rendement de l&#39;échantillon

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

73.0K vues.  National Institute for Health Research.  Nous décrivons une technique de recherche pour la fibroscopie bronchique et lavage broncho-alvéolaire en utilisant aspiration basse pression. La technique est utilisée pour récolter des cellules immunitaires à partir des surfaces de broncho-pulmonaire. L'anesthésie locale et sédation consciente légère (midazolam) est utilisé. Sujets tolèrent les effets secondaires minimes procédure ainsi et d'expérience. 

Vidéo: Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

Génération de base de données complète en oncologie thoracique - Outil de recherche translationnelle

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Recherche

Médecine

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Occlusion bilatérale de l&#39;artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

Méthode pour l&#39;obtention de cellules cancéreuses ovariennes primaires à partir d&#39;échantillons solides

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Travailler avec les tissus humains pour la recherche translationnelle sur le cancer

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

induite Lavage-Surfactant Épuisement dans Pigs comme un modèle de syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ function. Clarifying the mechanism of blood vessel formation is therefore extremely useful for elucidating developmental processes and pathological mechanisms. Murine hind-limb vessels are often used as a model for physiological and pathological angiogenesis. Evaluation is mainly performed via a two-dimensional method using tissue sections. However, methods for evaluating three-dimensional (3D) vascular morphology are particularly limited. This paper introduces a method for visualizing murine hind-limbs using computed tomography (CT). Radiation-opaque resin is injected through the descending aorta, and whole vessels are filled with dye. By adjusting the time of dye injection, arterial-specific filling is also possible, and samples can be obtained with any micro-X-ray CT device. This contrast method provides a basic technique for the 3D evaluation of murine blood vessels in the lower extremities. Furthermore, this method can be used to visualize all blood vessels below the diaphragm and evaluate blood vessels in the abdominal organs.

Here, we describe a visualization and quantification method for murine hind-limb vessels using micro-X-ray computed tomography.

Préparation d’échantillons pour la visualisation tridimensionnelle basée sur la tomodensitométrie des vaisseaux murins des membres postérieurs

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

The Miniature Pig: A Large Animal Model for Cochlear Implant Research

Cochlear implants (CI) are the most effective method to treat people with severe-to-profound sensorineural hearing loss. Although CIs are used worldwide, no standard model exists for investigating the electrophysiology and histopathology in patients or animal models with a CI or for evaluating new models of electrode arrays. A large animal model with cochlea characteristics similar to those of humans may provide a research and evaluation platform for advanced and modified arrays before their use in humans. 
To this end, we established standard CI methods with Bama mini-pigs, whose inner ear anatomy is highly similar to that of humans. Arrays designed for human use were implanted into the mini pig cochlea through a round window membrane, and a surgical approach followed that was similar to that used for human CI recipients. Array insertion was followed by evoked compound action potential (ECAP) measurements to evaluate the function of the auditory nerve. This study describes the preparation of the animal, surgical steps, array insertion, and intraoperative electrophysiological measurements. 
The results indicated that the same CI used for humans could be easily implanted in mini-pigs via a standardized surgical approach and yielded similar electrophysiological outcomes as measured in human CI recipients. Mini-pigs could be a valuable animal model to provide initial evidence of the safety and potential performance of novel electrode arrays and surgical approaches before applying them to human beings.

Miniature pigs (mini-pigs) are an ideal large animal model for research into cochlear implants. Cochlear implantation surgery in mini-pigs can be utilized to provide initial evidence of the safety and potential performance of novel electrode arrays and surgical approaches in a living system similar to human beings.

Le cochon miniature : un grand modèle animal pour la recherche sur les implants cochléaires

Cochlear implants (CI) are the most effective method to treat people with severe-to-profound sensorineural hearing loss. Although CIs are used worldwide, ...

Isolation of Murine Intestinal Mesenchyme Resulting in a High Yield of Telocytes

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, fibroblasts, myofibroblasts, smooth muscle cells, immune cells, and the recently identified cell type, telocytes. Telocytes are unique mesenchymal cells with long cytoplasmic processes, reaching a distance of tens to hundreds of microns from the cell body. Telocytes have recently emerged as an important intestinal stem cell niche component, providing Wnt proteins that are essential for stem and progenitor cell proliferation.
Although protocols on how to isolate mesenchyme from the mouse intestine are available, it is not clear whether these procedures allow the efficient isolation of telocytes. Isolating telocytes efficiently requires special protocol adjustments that would allow dissociation of the strong cell-cell contact between telocytes and neighboring cells without affecting their viability. Here, available intestinal mesenchyme isolation protocols were adjusted to support the successful isolation and culture of mesenchyme containing a relatively high yield of viable single-cell telocytes.
The obtained single-cell suspension can be analyzed by several techniques, such as immunostaining, cell sorting, imaging, and mRNA experiments. This protocol yields mesenchyme with sufficiently conserved antigenic and functional properties of telocytes, and can be used for several applications. For example, they can be used for co-culture with mouse- or human-derived organoids to support organoid growth with no growth factor supplementation, to better reflect the situation in the original tissue.

Here, we present a protocol to isolate murine intestinal mesenchyme, including telocytes. These can be used for several applications, such as co-culture with mouse or human-derived organoids, to support growth and better reflect the situation in the original tissue.

Isolement du mésenchyme intestinal murin entraînant un rendement élevé en télocytes

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, ...

Preparing Zanba-Stir-Fried Tiebangchui (TBC) Sample for Processing Technology Optimization

To begin a single factor experiment to compare Tiebangchui, or TBC slice thickness, for processing technology optimization, prepare five test groups each having 30 grams of TBC, but different slice thickness. Then weigh 90 grams of Zanba, which is three times as much as that of the TBC in each group. Set the temperature and the time of the automatic stir fry machine to 140 degrees Celsius and 40 minutes respectively.After the machine has heated up to the set temperature, add the weighed amounts of TBC and Zanba into the machine. Then using a high speed smashing machine, grind the Zanba stir-fried TBC into powder. Next, weigh two grams of Zanba stir-fried TBC powder in a conical flask.To the sample in the flask, add three milliliters of ammonia solution followed by 50 milliliters of a mixture of isopropyl alcohol and ethyl acetate, having a volume ratio of one is to one. After recording the weight of the conical flask with the contents, ultrasonicate the TBC sample for 30 minutes at 220 volts and 40 kilohertz maintaining a temperature below 25 degrees Celsius. Weigh the conical flask with the sample once again after the ultrasonic extraction.Make up for the lost weight by adding the isopropyl alcohol and ethyl acetate mixture mentioned previously, and filter the sample solution. Evaporate 25 milliliters of the filtrate to dryness using a rotary evaporator at 40 degrees Celsius. Then dissolve the residue in five milliliters of a solution of 0.05 hydrochloric acid in methanol.Filter the solution through a 0.2 micron syringe filter, and analyze it by performing high performance liquid chromatography, or HPLC. Calculate the contents of the MDA and DDAs in different processing products according to the standard curve. Calculate the comprehensive score based on the results via the critic method.Following the method demonstrated above, compare the amounts of Zanba, processing temperatures, and times for processing technology optimization. The results of the single factor tests revealed that the comprehensive scores of Zanba stir-fried TBC were highest when the sliced thickness is two centimeters, the amount of Zanba is three times, the processing temperature is 120 degrees Celsius, and the processing time is 60 minutes. The results revealed the range of slicing thickness, amount of Zanba, processing temperature, and processing time to be used for future experiments.

Préparation de l’échantillon de Zanba-sauté tiebangchui (à confirmer) pour l’optimisation de la technologie de traitement

Découverte non invasive de biomarqueurs pour la protéomique des larmes à l’aide de la LC-MS

A Protein Suspension-Trapping Sample Preparation for Tear Proteomics by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for several ocular diseases and conditions. The suspension trapping column has been reported to be an efficient and user-friendly sample preparation workflow for the broad application of downstream proteomic analysis. Yet, this strategy has not been well-studied in the analysis of human tear proteome. The present protocol describes an integrated workflow from clinical human tear samples to purified peptides for non-invasive tear protein biomarker research using mass spectrometry, which provides insights into disease biomarkers and monitoring when combined with bioinformatics analysis. A protein suspension trapping sample preparation was applied and demonstrated the discovery of tear proteome with fast, reproducible, and user-friendly procedures, as a universal, optimized sample preparation for human tear fluid analysis. In particular, the suspension trapping procedure outperformed in-solution sample preparation in terms of peptide recovery, protein identification, and shorter sample preparation time.

Pleins feux sur l’auteur : Faire progresser l’analyse du liquide lacrymal à l’aide d’un protocole normalisé pour la recherche en protéomique 

This protocol describes a method for collecting tear samples using Schirmer strips and an integrated quantitative workflow for discovering non-invasive tear protein biomarkers. The suspension trapping sample preparation workflow enables fast and robust tear sample preparation and mass spectrometric analysis, resulting in higher peptide recovery yields and protein identification than standard in-solution procedures.

Préparation d’échantillons de piégeage de suspension de protéines pour la protéomique lacrymale par chromatographie liquide et spectrométrie de masse en tandem

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for ...