Le protocole global décrit les procédures chirurgicales facilement exécutées de retirer l’appendice connu sous le nom de patch caecal chez les souris. Le modèle d’appendicectomie murine peut être utilisé pour étudier les rôles biologiques de l’appendice dans la pathogénie de la maladie gastro-intestinale humaine. L’appendice humain est un organe contestable.
Des études récentes ont suggéré que l’appendice joue un rôle important dans le maintien de la santé intestinale. Pour étudier la fonction biologique de l’appendice, il est essentiel de générer un modèle animal d’appendicectomie associé à la maladie. Dans ce protocole, nous décrions une étape chirurgicale simple et sûre de l’enlèvement de l’appendice, connu sous le nom de patch caecal chez la souris.
Pour assurer le succès de ce modèle, il y a trois étapes clés comme vous le verrez dans la vidéo suivante. Tout d’abord, localiser le caecum des souris avant la chirurgie. Deuxièmement, faire une petite incision dans l’abdomen.
Troisièmement, désinfecter et fermer la souche de caecum. La première partie, l’appendicectomie souris. Préparez des instruments chirurgicaux stériles et des solutions de nettoyage avant la chirurgie.
Anesthésier et fixer la souris sur une plate-forme en position supinée en plaçant quatre bandes de ruban adhésif médical sur les membres pour prévenir le mouvement postural pendant la chirurgie. Touchez doucement tout l’abdomen de la souris pour trouver la sensation de bosse. Couvrir le drapé et désinfecter la zone rasée de l’abdomen de la souris aussi large que possible à l’aide de deux fois d’entoiodine.
Faire une incision longitudinale allant de 0,5 centimètre à un centimètre à la ligne médiane de l’abdomen. Selon l’emplacement prédéterminé du caecum, cherchez le caecum et extériorisez-le doucement pendant environ un centimètre de long pour identifier le patch caecal. Utilisez une solution saline physiologique préchauffée et stérile pour hydrater l’intestin.
Pour prévenir les complications potentielles des saignements postopératoires et de l’infection, ligate les vaisseaux sanguins mésentériques de caecum en utilisant le 8-0 Suture. Hydrater le caecum avec la solution saline. Marquer la région de résection à l’aide de la suture 4-0 avec boucle ouverte près de l’apex du caecum au côlon proximal.
Coupez le patch caecal sous la résection marquée à l’aide de micro-ciseaux et éliminez la teneur caecal résiduelle avec des cotons-tiges médicaux. Désinfecter la souche de caecum avec de l’entoiodine. Fermer la souche avec la suture en cours d’exécution à l’aide du 8-0 Suture.
Retirez soigneusement la boucle de fil 4-0, précédemment utilisée pour marquer la résection à la souche de caecum. Stériliser la position sutured à l’aide d’entoiodine. Réhydrater la zone de coupe avec la solution saline.
Fermer la couche de musculature avec la suture en cours d’exécution à l’aide de 8-0 fil de suture. Fermez les couches de peau à l’aide de sutures interrompues avec du fil de suture 4-0. Désinfecter la coupe chirurgicale deux fois avec de l’entoiodine.
Ensuite, retirer l’iode en utilisant 75% d’alcool médical. Retournez doucement la souris. Injectez sous-cutanément 0,1 milligramme par kilogramme de poids corporel de buprénorphine et 0,4 millilitres de solution saline physiologique.
Et reposez la souris sur le coussin chauffant, jusqu’à ce qu’elle revienne à la conscience. Remettre la souris à la cage stérile, et surveiller de près la souris pour les signes de douleur pendant trois jours après la chirurgie pour assurer sa récupération. La deuxième partie : Induction du cancer côlorectal colite-associé avec l’azoxyméthane, l’AOM, et le sulfate de sodium de Dextran, DSS, sept jours après appendicectomie.
Décongeler un aliquot d’AOM et le diluer à 1 milligramme par millilitre à l’aide d’une solution saline normale de 0,9 %. L’ensemble du processus de préparation se fait dans le capot des fumées. Dissoudre quatre grammes de poudre DSS dans 200 millilitres solution d’eau autoclavée pour préparer 2%DSS.
Chaque cage contient cinq souris. Faire une injection intraperitoneal d’AOM avec 0,01 millilitre par gramme par souris en se basant sur son poids. Remplacer l’eau autoclavée par 2%DSS pendant cinq jours.
Les souris seront nourries avec de l’eau autoclavée pendant deux cycles supplémentaires. La troisième partie: Résultats. Les résultats flow et ELISA indiquent le retrait réussi du patch caecal.
Cette procédure peut contribuer à la réduction significative des cellules plasmatiques iga-spécifiques, un changement évident de l’IgA sécrétoire dans les grandes entrailles, comparé à 3%DSS, qui a le taux élevé de mortalité et le changement significatif de poids en raison des selles sanglantes graves, du prolapsus d’anus, et de l’abcès abdominal. Le 2%DSS convient à l’ensemble du processus pour son taux de survie élevé à près de 80% et le changement de poids raisonnable dans les deux groupes de simulacre et d’appendicectomie. Comme montré dans ces images, nous avons avec succès induit les tumeurs côlorectales colite-associées.
Dans les images de coloration H&E, la flèche noire indique l’ulcère muqueux, la pointe de flèche indique l’adénocarcinome, et une flèche blanche indique l’infiltration de neutrophile entre les glandes. Différents stades de l’adénocarcinome peuvent être vus dans les groupes de feinte et d’appendicectomie. Ce modèle rentable d’appendicectomie murine peut être utilisé pour répondre à certaines questions importantes telles que: quel est le rôle de l’appendice dans la régulation des bactéries intestinales et comment il participe à la réponse immunitaire dans le tissu lymphoïde associé à l’intestin.
Rappelez-vous, pour éviter les dommages dans l’adhérence de l’intestin, le pré-emplacement du caecum et de l’incision petite de peau sont importants. En outre, nous avons utilisé le 2%DSS pour induire la colite. Mais une concentration plus élevée de DSS peut être utilisée pour d’autres souches de souris.
