The authors have no acknowledgements.

NOTE: Toutes les procédures d&#39;animaux ont été effectuées avec l&#39;approbation de la Commission institutionnelle de protection des animaux et l&#39;utilisation (IACUC) de l&#39;Université de Cincinnati et en conformité avec le Guide de soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health (NIH Publication Aucun . 85-23, révisée en 1996). 1. Euthanasier et stériliser la souris <ol><li> Placez la souris dans une sélection contenant une dose supratheraputic de l&#39;isoflurane et de permettre de respirer à l&#39;effet. Une fois que la souris est euthanasié, retirer de la boîte. </li><li> Cervicale disloquer tant que second moyen d&#39;euthanasie. </li><li> Stériliser la surface externe de la souris par le nettoyage de l&#39;animal avec 70% d&#39;éthanol. </li></ol> 2. Identification et isolement de Trois différents dépôts adipeux <ol><li> Le tissu adipeux brun (BAT) Isolement: <ol><li> Assurez-vous que la fourrure est humide de la purification de l&#39;alcool pour aider à couper à travers l&#39;épiderme et du derme layers. </li><li> Placez la souris dans une position couchée avec son dos contre la table. </li><li> Prenez la peau juste en dessous du diaphragme avec une pince, un ascenseur et inciser avec des ciseaux. </li><li> Couper transversalement autour de la circonférence de la souris pour exposer le péritoine. </li><li> Révéler le dépôt de BAT en forme de papillon par dégantage la moitié supérieure de la souris. Tenez les appendices et de l&#39;abdomen dans une main et en tirant la peau vers le haut vers la tête. </li><li> Orienter la souris, de sorte qu&#39;il est positionné à plat ventre sur la table. Faites attention de ne pas contaminer le dépôt exposée avec des cheveux. </li><li> Instruments chirurgicaux et les changements à une nouvelle paire de gants. </li><li> Repérez les omoplates et le dépôt correspondant. Retirez soigneusement toute adipeux blanc superficielle sommet le papillon puis disséquer le papillon de la graisse brune interscapulaire. Soyez prudent pour éviter le muscle étroitement associé à la graisse brune. NOTE: L&#39;utilisation d&#39;un microscope de dissection est recommandé pour l&#39;enlèvement de la white adipeux, ainsi que dans la séparation du tissu adipeux brun à partir de la scapula. </li><li> Retirer le gras de dépôt et de transférer à un tube de 2 ml à centrifuger. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). </li></ol></li><li> Isolement de tissu adipeux sous-cutanée (SQ), un tissu adipeux blanc Depot (WAT): <ol><li> Mettez sur une nouvelle paire de gants pour éviter la contamination croisée entre les dépôts de graisse. </li><li> Révélez la inguinale, triangulaires dépôts de la SQ par De gantage la moitié inférieure de la souris. Tenez les appendices supérieurs et du thorax dans une main et en tirant la peau vers le bas vers les pieds de l&#39;autre main. </li><li> Orientez la souris en position couchée tout en faisant attention de ne pas contaminer le dépôt exposée avec des cheveux. </li><li> Surgica Cleaninstruments de l et le changement à une nouvelle paire de gants. </li><li> Disséquer soigneusement les triangles de graisse de la SQ. Veillez à ne pas contaminer l&#39;échantillon avec le muscle, la graisse, les glandes mammaires voisin ou en coupant des vaisseaux et de contaminer l&#39;échantillon de sang. NOTE: L&#39;utilisation d&#39;un microscope de dissection est recommandé si les frontières ne sont pas clairement définis. </li><li> Retirer dépôts de graisse et transfert à 2 ml microtubes. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. </li><li> Pour la coloration, fixer ou intégrer en octobre Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). </li></ol></li><li> Isolement de gonadique Fat un tissu adipeux viscéral (VAT) et le tissu adipeux blanc (WAT) Depot: <ol><li> Mettez sur une nouvelle paire de gants pour éviter la contamination croisée entre les dépôts de graisse. </li><li> Avec la SCIssors, couper transversalement le péritoine, directement au-dessous du diaphragme. Couper le péritoine du diaphragme et le milieu du rectum coronaire pour exposer les organes abdominaux. </li><li> Repérez les testicules ou des ovaires et d&#39;identifier le tissu adipeux blanc ci-joint, connu sous le nom adipeux de l&#39;épididyme chez les hommes ou adipeux gonadique chez les femmes. </li><li> Instruments chirurgicaux et les changements à une nouvelle paire de gants </li><li> Disséquer soigneusement les deux dépôts de graisse épididyme des testicules, épididyme et canal déférent. Ou si féminine, décortiquer soigneusement les deux coussinets adipeux gonadiques par les ovaires. </li><li> Retirer dépôts de graisse et les transférer à deux tubes ml à centrifuger. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. </li><li> Pour la coloration, fixer ou intégrer en octobre Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). </li&gt; </ol></li></ol> 3. Isolement de tissu adipeux périvasculaire (TVAP) <ol><li> Isolement du Cœur: <ol><li> Placez la souris dans une position couchée avec des appendices supérieurs et inférieurs étendus vers l&#39;extérieur. </li><li> Appendices sécurisées à l&#39;aide du sparadrap. </li><li> Après avoir positionné la souris comme indiqué ci-dessus, créer des tensions en soulevant la pointe du sternum avec une pince. Couper horizontalement à travers la membrane, ce qui expose la partie inférieure de la cavité thoracique. </li><li> Tout en maintenant la tension, en soulevant la pointe du sternum, couper à travers la cage thoracique supérieurement vers la tête, juste à côté du sternum. </li><li> Ramassez la cage thoracique juste inférieure à la clavicule, et couper le long de la longueur inférieure de la clavicule sur vers l&#39;aisselle dans les deux directions. La cavité thoracique et son contenu (cœur, poumons, etc.) devraient maintenant être clairement visible. </li><li> Nettoyez la cavité thoracique de sang étrangère et fluide en utilisant ga stérileuze pour absorber le fluide. Si des organes ou des récipients collecteurs être sûr de profuse (info supplémentaire). </li><li> Une fois la zone dégagée de fluide, couper les vaisseaux des bronches et attachés à supprimer les poumons, ce qui permet une meilleure exposition du cœur. </li></ol></li><li> Localisation et Excision de tissu adipeux périvasculaire aortique (TVAP): <ol><li> Retirez les organes suivants de mieux identifier les parties inférieures de l&#39;aorte: foie, de l&#39;estomac, la rate, le pancréas, les intestins, et du côlon. </li><li> D&#39;abord commencer par l&#39;identification de l&#39;estomac et l&#39;œsophage. Couper l&#39;œsophage à la jonction gastro-œsophagienne de l&#39;estomac pour libérer du corps. </li><li> Ensuite, identifier les intestins et le mésentère environnante. Couper superficiellement par mésentère, car il se trouve très près à la partie rénale de l&#39;aorte, puis &quot;exécuter l&#39;intestin.&quot; </li><li> Couper le colon libre comme près du rectum que possible. Ainsi, la libération de l&#39;estomac, de l&#39;intestin et du colon de la souris. </li><li> Rédéplacer l&#39;estomac, de l&#39;intestin, du colon, du pancréas et de la rate en coupant à travers le mésentère de fixation et les vaisseaux. Le pancréas et de la rate devraient venir gratuit avec l&#39;estomac, de l&#39;intestin et du côlon. </li><li> Retirer le foie en coupant à travers les veines hépatiques et de fixation mésentère, retirez tous les lobes. </li><li> Coupez la couche de graisse viscérale et entourent les reins. Laissez les reins attachés à l&#39;aorte in vivo pour servir de marqueurs pour différents segments géographiques de l&#39;aorte. </li><li> Rincer la zone avec PBS 1x stérile et retirer tout le liquide par absorption avec une gaze stérile. </li><li> Utilisation de micro-ciseaux et micro-pinces, séparer l&#39;aorte de son attache dorsal à la colonne vertébrale et de son attache ventral à l&#39;oesophage. </li><li> Isoler l&#39;aorte et en suivant l&#39;aorte détacher la longueur de l&#39;aorte descendante à partir de l&#39;origine dans le coeur de la bifurcation dans la région iliaque. </li><li> Identifier et isoler les vaisseaux sous-clavière. Isoler ces naviresà partir du cou à la racine aortique pour mieux exposer la jonction de l&#39;aorte et la racine dans le cœur. </li><li> Retirez le thymus puis couper l&#39;artère brachiocéphalique, l&#39;artère carotide commune gauche et l&#39;artère sous-clavière gauche, permettant un mouvement du cœur. </li><li> Avec l&#39;aide d&#39;un microscope de dissection, voir le tissu adipeux (TVAP) couche périvasculaire entourant l&#39;aorte. </li><li> En prenant grand soin de ne pas pincer ou serrer la TVAP, tirez doucement le chemin de la TVAP de l&#39;aorte avec des micro-pince. Couper doucement la fixation de la TVAP de l&#39;aorte avec des micro-ciseaux à partir de la région thoracique juste au-dessus de l&#39;endroit où se trouve le diaphragme. REMARQUE: Un microscope de dissection est recommandé. </li><li> Répéter ce procédé, la totalité de la longueur de l&#39;aorte, de finition dans la région de l&#39;aorte sous-rénale, qui est situé juste au-dessus de la bifurcation iliaque du navire aortique. </li><li> Si arc aortique TVAP est souhaitée, utilisé la même méthode pour supprimer la TVAP de la moindre curvature de l&#39;arc. </li><li> Placez échantillons de TVAP dans 2 ml tube (s) à centrifuger. </li><li> Si l&#39;ARN ou la protéine est à extraire, geler le tissu par immersion dans l&#39;azote liquide et conserver à -80 ° C. Congeler l&#39;échantillon à la fois à prévenir la dégradation. Si la culture, couvrir le tissu dans DMEF-12 et mis sur la glace jusqu&#39;à ce que tous les échantillons sont prélevés pour la culture (info supplémentaire). REMARQUE: les dépôts adipeux supplémentaires à considérer si intéressé par une analyse complète de dépôt adipeux comprennent: rétropéritonéale, mésentérique, omental, péricardique et poplitée. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+in+the+United+States,+2009-2010.">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults,+1999-2010.">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li><li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+medical+care+costs+of+obesity:+an+instrumental+variables+approach.">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li><li>Marder, W., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Childhood+Obesity:+Costs,+Treatment+Patterns,+Disparities+in+Care,+and+Prevalent+Medical+Conditions.">Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions.</a> Thomson Medstat Research Brief. , (2006).</li><li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-fat+diet+increases+IL-1,+IL-6,+and+TNF-&#945;+production+by+increasing+NF-&#954;B+and+attenuating+PPAR-&#947;+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-&#945; production by increasing NF-&#954;B and attenuating PPAR-&#947; expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors.">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li><li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thematic+review+series:+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation.">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li><li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding.">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li><li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+of+white,+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells.">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown,+beige/brite:+different+adipose+cells+for+different+functions.">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li><li>Casteilla, L., P&#233;nicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

L&#39;obésité peut mener à une grande foule de morbidités et la pleine compréhension du rôle que joue adipeux ne est pas bien compris; recherche donc poursuivi dans le domaine de adipeux est nécessaire. Des modèles animaux, en particulier des modèles murins sont idéales pour la recherche initiale à la progression des maladies et des essais de traitements pharmaceutiques potentiels. En utilisant ces modèles, l&#39;isolement et l&#39;excision des dépôts adipeux précise est un outil extrêmement important et...

Adipeux fait une apparition remarquée sous les projecteurs des médias, due à l&#39;augmentation spectaculaire de l&#39;obésité au cours des dernières décennies du 20e siècle. L&#39;obésité touche actuellement plus d&#39;un tiers des adultes et 17% des enfants et des adolescents aux États-Unis (US) 1. Couvrant tous les groupes ethniques, les recherches statistiques entourant l&#39;épidémie d&#39;obésité a montré que les Noirs non hispaniques ont le plus haut taux ajusté selon l&#39;âge de l&#39;obésité (49,5%) par rapport aux Américains d&#39;origine mexicaine (40,4%), les tous les Hispaniques (39,1%), et non hispaniques blancs (34,3%) 2. L&#39;effet économique de l&#39;obésité est aussi une préoccupation croissante pour le système de soins de santé. En 2012, il a été estimé que le coût annuel des soins médicaux de l&#39;obésité aux États-Unis en 2005 était de $ 190,2 milliards, près de 21% du budget global de dépenses médicales. Malheureusement, l&#39;obésité infantile a été estimée à responsable de 14 milliards de dollars en coûts médicaux directs seul. Statistiquement, on a déterminé que le coût médical moyen deles personnes souffrant d&#39;obésité était $ 2741 plus d&#39;un an que ceux sans cette morbidité 3-5. L&#39;obésité est un facteur de risque majeur pour une variété de conditions telles que: le diabète de type 2, la dyslipidémie, les maladies cardiovasculaires, le cancer, les troubles musculo-squelettiques et l&#39;inflammation chronique. L&#39;obésité est profondément liée à la pathogenèse du syndrome métabolique et d&#39;autres maladies chroniques 8.6. Avec de telles connexions drastiques et négatives entre l&#39;obésité et d&#39;autres comorbidités, la recherche scientifique a attiré l&#39;attention de mieux comprendre l&#39;épidémie actuelle et les divers rôles joués par les pivots et adipeux. Historiquement, le tissu adipeux a été considéré comme négligeable et a été vu comme un simple tissu de remplissage simple. Actuellement, adipeux a été montré à jouer de nombreux rôles essentiels dans le fonctionnement de l&#39;organisme dans: le métabolisme, la régulation hormonale, l&#39;inflammation, la protection et l&#39;isolation 9. Le tissu adipeux est principalement composée deadipocytes, mais contient aussi des pericytes, des cellules endotheliales, les monocytes, les macrophages et les cellules souches pluripotentes 8. Le tissu adipeux est distribué dans tout le corps dans des dépôts distincts. Les principaux dépôts peuvent être trouvés sous-cutanée, sous-cutanée, intramusculaire, et viscéralement 10. Dépôts adipeux ont été montré pour avoir des profils métaboliques spécifiques de dépôt, qui ont montré une susceptibilité particulière de dépôt à l&#39;obésité et les troubles liés huit. Traditionnellement, le tissu adipeux a été classé en deux grandes catégories: tissu blanc adipeux (WAT) et de tissus adipeux brun (BAT); Bien que la littérature récente indique les présences d&#39;un troisième groupe baptisé adipeux brite ou beige 11. Le tissu adipeux a été démontré qu&#39;ils ont des couleurs différentes, des morphologies, des fonctions métaboliques, biochimiques caractéristiques génétiques et des motifs d&#39;expression 10. Adipocytes en WAT ont un seul, de grosses gouttelettes de lipides et des quantités variables de mitochondries. WATest dominante trouvée dans les localités sous-cutanées et viscérales du corps. WAT fonctions essentiellement comme un site de stockage d&#39;énergie et la protection des organes. Adipocytes dans BAT ont une morphologie multiloculaire et de nombreuses mitochondries. BAT se trouve principalement dans le cou et les gros vaisseaux sanguins du thorax, ainsi que les omoplates 12. MTD fonctions principalement dans les comportements dépenser d&#39;énergie qui régulent la thermogenèse 7. Adipeux Brite ou beige a été montré pour partager une morphologie analogue et d&#39;expression aux MTD, mais a été trouvé à l&#39;origine de 11 adipocytes blancs. La méthode chirurgicale décrite dans ce manuscrit offre aux chercheurs la capacité d&#39;analyser des effets différents que des facteurs tels que: l&#39;environnement, les produits pharmaceutiques, et de la génétique, ont sur adipeux; ainsi que le rôle bénéfique ou néfaste adipeux joue dans la maladie et la santé globale. En outre, en fournissant un moyen pour identifier et isoler les différents types de tissu adipeux àpermettre de mieux comprendre les relations et les différences biochimiques entre les dépôts. Cela peut aider à déterminer la relation entre la localisation, la fonction et le type de graisse dans le corps. Ce procédé décrit parvient en fournissant les moyens de visualisation brut, l&#39;analyse de l&#39;expression des gènes, l&#39;analyse d&#39;expression de protéine, l&#39;examen histologique, et l&#39;isolement de lignées de cellules primaires pour les études in vitro. Actuellement, il ya beaucoup d&#39;articles qui fournissent des informations sur le comportement métabolique des différents dépôts adipeux, ainsi que leurs emplacements anatomiques; mais ne fournit pas une méthode sur la façon de localiser précisément, identifier et isoler ces dépôts en profondeur. Cette méthode fournit une technique chirurgicale précise qui permet l&#39;isolement de plusieurs dépôts avec une quantité minimale de dissection et la contamination par rapport aux autres méthodes destinées à l&#39;isolat d&#39;un ou de deux dépôts de 13 à 14. L&#39;objectif de ce protocole est de fournirun procédé précis pour l&#39;identification et l&#39;isolement de différents types de dépôts de graisse à partir de plusieurs emplacements anatomiques.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="730">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:125px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isoflurane</td>
			<td>Med-Vet International&#160;</td>
			<td>#RXISO-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:125px;">07-678-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEF-12</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">D-6421</td>
			<td>Warm in waterbath before putting on tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">2 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Midsci</td>
			<td style="width:125px;">MCT-200-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P5368-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

Identification et la localisation du tissu adipeux inguinal sous-cutanée, adipeux brun interscapulaire, adipeux de l&#39;épididyme viscérale (figure 1), ainsi que le tissu adipeux arc périvasculaire aortique, adipeux de l&#39;aorte thoracique, adipeux aortique surrénale et adipeux aorte abdominale (figure 2) a été réalisée avec succès en utilisant la méthode chirurgicale décrite. L&#39;examen histologique et la différenciation entre les échantillons sur les MTD et Wat ont ...

Watch this Scientific Journal Video about Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots at JoVE.com

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Grâce à la connexion drastique et négative entre l&#39;obésité et d&#39;autres comorbidités, la recherche sur le rôle adipeux joue dans la maladie et la santé globale est justifiée. Nous présentons un protocole pour l&#39;isolement et l&#39;excision de dépôts adipeux permettant l&#39;étude du tissu adipeux à l&#39;aide in situ et des procédés in vitro.

Localisation, identification, et l&#39;excision des dépôts adipeux murin

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Research

JoVE Journal

Medicine

40.9K vues.  University of Cincinnati College of Medicine.  Grâce à la connexion drastique et négative entre l'obésité et d'autres comorbidités, la recherche sur le rôle adipeux joue dans la maladie et la santé globale est justifiée. Nous présentons un protocole pour l'isolement et l'excision de dépôts adipeux permettant l'étude du tissu adipeux à l'aide in situ et des procédés in vitro. 

Vidéo: Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

Une technique simplifiée pour<em&gt; In situ</emExcision&gt; de la cornée et éviscération du tissu rétinien de globe oculaire humain

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Recherche

Médecine

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.

Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.

Isolement et Excision de murin Aorte; Une technique polyvalente dans l&#39;étude des maladies cardiovasculaires

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Human Brown Adipose Tissue Depots Automatically Segmented by Positron Emission Tomography/Computed Tomography and Registered Magnetic Resonance Images

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in humans. Detecting BAT is typically confirmed by the uptake of the injected radioactive tracer 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) into adipose tissue depots, as measured by positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) scans after exposing the subject to cold stimulus. Fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI) has the ability to distinguish BAT without the use of a radioactive tracer. To date, MRI of BAT in adult humans has not been co-registered with cold-activated PET-CT. Therefore, this protocol uses 18F-FDG PET-CT scans to automatically generate a BAT mask, which is then applied to co-registered MRI scans of the same subject. This approach enables measurement of quantitative MRI properties of BAT without manual segmentation. BAT masks are created from two PET-CT scans: after exposure for 2 hr to either thermoneutral (TN) (24 &#176;C) or cold-activated (CA) (17 &#176;C) conditions. The TN and CA PET-CT scans are registered, and the PET standardized uptake and CT Hounsfield values are used to create a mask containing only BAT. CA and TN MRI scans are also acquired on the same subject and registered to the PET-CT scans in order to establish quantitative MRI properties within the automatically defined BAT mask. An advantage of this approach is that the segmentation is completely automated and is based on widely accepted methods for identification of activated BAT (PET-CT). The quantitative MRI properties of BAT established using this protocol can serve as the basis for an MRI-only BAT examination that avoids the radiation associated with PET-CT.

The method presented here uses 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) and fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI), each scanned following 2 hr exposure to thermoneutral (24 &#176;C) and cold conditions (17 &#176;C) in order to map brown adipose tissue (BAT) in adult human subjects.

Dépôts de tissus humains adipeux brun segmentés automatiquement par tomographie par émission de positons / informatisée et la résonance magnétique images enregistrées

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Encapsulation thermogénique préadipocytes pour la transplantation dans dépôts de tissu adipeux

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

Évaluation de la fonction microvasculaire tissu adipeux humain en utilisant la vidéomicroscopie

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short bulbar or posterior urethral strictures, urethroplasty by excision and primary anastomosis (EPA) is recommended. As EPA only requires the excision of the narrowed segment and the surrounding spongiofibrosis, a full-thickness transection of the corpus spongiosum, as performed in the traditional transecting EPA (tEPA), is usually unnecessary. Jordan et al. introduced the idea of a vessel-sparing approach in 2007, aiming to reduce surgical trauma, especially to the dual arterial blood supply of the urethra, and, thus, potentially reducing the risk of postoperative erectile dysfunction or glans ischemia. This approach could also be beneficial for subsequent urethral interventions such as redo urethroplasty using a free graft, in which a well-vascularized graft bed is imperative. Nevertheless, these potential benefits are only assumptions as prospective studies comparing the functional outcome of both techniques with validated questionnaires are currently lacking. Moreover, vessel-sparing EPA (vsEPA) should at least be able to provide similar surgical outcomes as tEPA. The aim of this paper is to give an elaborate, step-by-step overview of how to manage patients with isolated short bulbar or posterior urethral strictures with vsEPA. The main objective of this manuscript is to outline the surgical technique and to report the representative surgical outcome. A total of 117 patients were managed according to the described protocol. The analysis was performed on the entire patient cohort and on the bulbar (n = 91) and posterior (n = 26) vsEPA group separately. Success rates were 93.4% and 88.5% for the bulbar and posterior vsEPA, respectively. To conclude, vsEPA, as outlined in the protocol, provides excellent success rates with low complication rates for isolated short bulbar and posterior urethral strictures.

Here, we present an elaborate and efficient protocol to treat isolated short bulbar or posterior urethral strictures with vessel-sparing excision and primary anastomosis.

Navire-épargnant l’Excision et l’anastomose primaire

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or excision. Many of these nodules are identified and excised via minimally invasive thoracic surgery; however, subcentimeter and subsolid nodules are frequently difficult to identify intra-operatively. This can be mitigated by the use of electromagnetic transthoracic needle localization. This protocol delineates the step-by-step process of electromagnetic localization from the pre-operative period to the postoperative period and is an adaptation of the electromagnetically guided percutaneous biopsy previously described by Arias et al. Pre-operative steps include obtaining a same day CT followed by the generation of a three-dimensional virtual map of the lung. From this map, the target lesion(s) and an entry site are chosen. In the operating room, the virtual reconstruction of the lung is then calibrated with the patient and the electromagnetic navigation platform. The patient is then sedated, intubated, and placed in the lateral decubitus position. Using a sterile technique and visualization from multiple views, the needle is inserted into the chest wall at the prechosen skin entry site and driven down to the target lesion. Dye is then injected into the lesion and, then, continuously during needle withdrawal, creating a tract for visualization intra-operatively. This method has many potential benefits when compared to the CT-guided localization, including a decreased radiation exposure and decreased time between the dye injection and the surgery. Dye diffusion from the pathway occurs over time, thereby limiting intra-operative nodule identification. By decreasing the time to surgery, there is a decrease in wait time for the patient, and less time for dye diffusion to occur, resulting in an improvement in nodule localization. When compared to electromagnetic bronchoscopy, airway architecture is no longer a limitation as the target nodule is accessed via a transparenchymal approach. Details of this procedure are described in a step-by-step fashion.

Presented here is a protocol for lung nodule localization using dye marking via electromagnetically navigated transthoracic needle access. The technique described here can be accomplished in the peri-operative period to optimize nodule localization and to successful resection when performing minimally invasive thoracic surgery.

Navigation électromagnétique Localisation des nodules transthoraciques pour la chirurgie thoracique mini-invasive

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

Modèle d'appendicectomie de Murine de cancer colorectal associé de colite chronique par localisation précise du patch caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for islet transplantation in rodent models. However, the tight kidney capsule limits the transplantation of sufficient islets in large animals and humans. The inguinal subcutaneous white adipose tissue (ISWAT), a new subcutaneous space, was found to be a potentially valuable site for islet transplantation. This site has better blood supply than other subcutaneous spaces. Moreover, the ISWAT accommodates a larger islet mass than the kidney capsule, and transplantation into it is simple. This manuscript describes the procedure of mouse islet isolation and transplantation in the ISWAT site of syngeneic diabetic mouse recipients. Using this protocol, murine pancreatic islets were isolated by standard collagenase digestion and a basement membrane matrix hydrogel was used for fixing the purified islets in the ISWAT site. The blood glucose levels of the recipient mice were monitored for more than 100 days. Islet grafts were retrieved at day 100 after transplantation for histological analysis. The protocol for islet transplantation in the ISWAT site described in this manuscript is simple and effective.

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

In this protocol, a method of murine islet isolation and transplantation into the inguinal subcutaneous white adipose tissue is described. Isolated syngeneic murine islets are transplanted into a murine recipient using a basement membrane hydrogel. The blood glucose level of the recipients is monitored, and histology analysis of the islet grafts is performed.

Modèle de transplantation inguinal Subcutaneous De tissu adipeux blanc (ISWAT) des îlots de Murine

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...

Approche arthroscopique double postéromédiale pour l’excision du kyste du LCP

Arthroscopic Excision of Posterior Cruciate Ligament Cysts Using a Double Posteromedial Approach

Cruciate ligament cysts of the knee are a rare condition. Posterior cruciate ligament cysts of the knee are less common than anterior cruciate ligament cysts. In patients with asymptomatic isolated cruciate ligament cysts of the knee, conservative treatment is recommended. Symptomatic cruciate ligament cysts of the knee are mostly manifested as knee hyperflexion pain, straightening pain, knee discomfort after standing for a long time or walking for a long time, etc., which seriously affects the quality of life, surgical treatment can be performed. The surgical treatments can be divided into ultrasound-guided cyst puncture and fluid extraction procedure and arthroscopic cystectomy. Cysts are mostly lobulated with a multi-layer cyst wall, cyst fluid extraction does not remove the cyst wall completely but simply extracts cyst fluid, leading to a high recurrence rate. Arthroscopic surgery can completely remove the cyst wall with little trauma, a low recurrence rate, and fast postoperative recovery, so arthroscopic resection is the most common and preferred method of treatment. Since posterior cruciate ligament cysts mostly occur posterior to the ligament, we remove the cyst wall by adding a double posteromedial approach to the knee joint, and the cyst wall is removed under direct vision, which is simple to operate, the cyst wall is completely cleared, the trauma is small, the postoperative recovery is fast, and there is no recurrence. Here, 8 posterior cruciate ligament cysts were removed with complete postoperative symptom relief, no surgical complications, and no recurrence at 1-year follow-up.

Pleins feux sur l’auteur : Approche double postéromédiale pour le traitement des kystes du ligament croisé postérieur

We present a surgical approach to treat posterior cruciate ligament cysts by an arthroscopic double posteromedial approach.

Excision arthroscopique des kystes du ligament croisé postérieur par une double approche postéromédiale

Cruciate ligament cysts of the knee are a rare condition. Posterior cruciate ligament cysts of the knee are less common than anterior cruciate ligament ...