Ce travail a été financé en partie par DK089016 et L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) et P30-DK52574 (pour le Core Washington University digestif recherche sur les maladies). ACI a un Howard Hughes Medical Institute médicale Fellow formation à la recherche.

1. L&#39;induction du cancer colite associée <ol><li> Mettez de côté des cages de sexe et appariés par l&#39;âge 6-8 souris semaines d&#39;âge à être utilisées pour les groupes expérimentaux et de contrôle. Les souris peuvent être étiquetées individuellement avec des marques ou des clips d&#39;oreille queue. </li><li> Au jour 0, le poids de base d&#39;enregistrement et d&#39;injecter par voie intrapéritonéale chaque souris (IP) de 10 mg / kg de solution OMA de travail (1 mg / ml dans une solution saline isotonique, dilué de 10 mg / ml de solution mère dans dH2O conservés à -20 ° C) . Basé sur l&#39;expérience, cette dose peut être ajustée entre 7-14 mg / kg et / ou répétée au début de l&#39;expérience. </li></ol> Attention: AOM est un agent génotoxique volatile et doivent être manipulés avec soin selon les fiches de sécurité. Les dilutions doivent être préparées dans une hotte chimique, maintenue sur glace, et jetés en suivant des protocoles spécifiques institution. <ol start="3"><li> Faire de 2,5% (2,5 g/100 ml) DSS dans l&#39;eau distillée et passer à travers un f 0,22 um acétate de celluloseiltre par le vide. Cette dose peut être ajustée entre 1 à 3,5% selon la souche de souris et de l&#39;environnement. Une fois préparée, la solution de DSS peuvent être conservés au réfrigérateur jusqu&#39;à 1 semaine. </li><li> Au jour 7, la solution de DSS offre à des souris que leur eau potable. Environ 250 ml / cage sera nécessaire chaque fois DSS nouveau est prévu pour un maximum de 5 souris / cage, mais ce ne sont que des estimations et peuvent varier selon le type de bouteilles d&#39;eau utilisées dans votre animalerie. </li><li> Pour assurer un approvisionnement continu du DSS pendant sept jours, la solution de DSS doit être remplacé dans des bouteilles propres trois fois (tous les 2-3 jours) au cours de cette période. Certains chercheurs de mesurer la quantité de DSS consommés avant de remplacer avec la nouvelle solution en tant que mesure de l&#39;exposition. </li><li> Au jour 14, passez cages dos à l&#39;eau potable standard pour deux semaines. </li><li> Répétez les étapes (1,4) - (1,6) aux jours 28 et 49 pour fournir un deuxième et troisième cycle du MAS. Un SSD «cycle» se compose d&#39;une semaine de DSS dans l&#39;eau potablesuivies de 2 semaines d&#39;exercice régulier (autoclave) de l&#39;eau. </li></ol> 2. Colite évaluation clinique et la progression tumorale <ol><li> Les souris doivent être pesés / a observé 2-3 fois par semaine. La perte de poids pour cent par rapport au niveau de référence est utilisé comme mesure indirecte de la gravité colite. Des évaluations régulières de saignement rectal, diarrhée ou prolapsus peut être faite en fonction des objectifs expérimentaux et déclarés conformément aux systèmes de notation différents. 9, 10 </li><li> Une perte de poids de jusqu&#39;à 10% avec 2-3 jours de la diarrhée et des saignements rectaux on peut s&#39;attendre dans la semaine qui suit un cycle complet de DSS (observation quotidienne peut être utile au cours de cette immédiat après-DSS période). </li></ol> Il est possible que certaines souris ne peut pas la récupérer; souris perdent plus de 20% de leur poids sont moins susceptibles de survivre et peut exiger l&#39;euthanasie précoce. Une injection IP unique de 0,5 à 1,0 ml de solution saline dans ces souris peut être une mesure utile de soutien en vue de corriger flui<html> le volume d perdus à cause de la diarrhée. 3. Endoscopie murin (facultatif) <ol><li> Endoscopie la suite de la deuxième ou troisième cycle de DSS peut être effectuée pour confirmer la croissance tumorale in vivo avant le sacrifice. Comme l&#39;AOM / DSS modèle est assez fiable dans la production de tumeurs, cette étape n&#39;est généralement pas nécessaire. Seuls quelques souris doivent évaluée à l&#39;aide de cette méthode, car elle a le potentiel de perturber tumeurs de la souris 11. </li><li> Anesthésier la souris avec la sédation par inhalation ou par injection. </li><li> Après la souris est anesthésié, fixez la souris sur un bord plat avec du ruban adhésif à la queue et la poitrine. </li><li> Avancer l&#39;endoscope murin dans le rectum de la souris doucement à l&#39;aide du sérum physiologique pour gonfler et irriguer pour améliorer la vision intraluminal et supprimer les contenus fécaux. (Notez que l&#39;endoscopie peut également être effectuée à l&#39;aide d&#39;insufflation d&#39;air comme une alternative à la solution saline et cette technique peut offrir une visualisation améliorée de la tumeur. 12) </li></ol>e &quot;&gt; 4. Souris Sacrifice et récolte Colon <ol><li> Le jour 70, chaque souris AOM / DSS traité devrait héberger de multiples tumeurs du côlon et être prêt pour l&#39;évaluation. Cette date peut être reportée semaines à plusieurs mois si les tumeurs plus volumineuses sont souhaitées. (Il faut noter que les souris avec un prolapsus rectal sévère devrez peut-être être euthanasiés tôt pour éviter une gêne excessive pour les animaux comme pour les comités de protection des animaux.) </li><li> Avant l&#39;autopsie, individuellement euthanasier les souris avec luxation cervicale et l&#39;isoflurane (ou autre méthode approuvée institutionnellement). Poids final et d&#39;autres mesures peuvent être faites en ce moment. </li><li> Posez la souris avec sa face ventrale exposée sur une planche à découper. Couvrir l&#39;abdomen avec de l&#39;éthanol à 70% pour prévenir les poils de contaminer le contenu abdominal lors de l&#39;extraction du côlon. </li><li> Utilisez une pince pour saisir la ligne médiane de l&#39;abdomen et faire une petite incision pour exposer le péritoine. </li><li> Étendre cette incision de chaque côté de l&#39;abdomen le long de la margi côtièren. </li><li> Utiliser des ciseaux pour couper à travers le bassin de sorte que les deux points peuvent être récoltés vers le bas à la jonction anorectale. Ceci est important car une blessure colite DSS est le plus grand au niveau du rectum distal et, en conséquence, cette région est la plus grande du développement tumoral. </li><li> D&#39;autres tissus tels que les ganglions lymphatiques mésentériques peuvent également être récoltés à cette époque. </li></ol> 5. Préparation du Colon pour l&#39;analyse macroscopique <ol><li> En utilisant une aiguille 18G gavage attachée à une seringue de 5 ml, rincer le côlon avec de la glace-froid tampon phosphate salin (PBS) de telle sorte que le fluide sort dans le sens physiologique. Si les tissus du côlon sera utilisé pour l&#39;ARN ou de protéines à base de l&#39;analyse, il peut être conservé au froid en utilisant des plateaux de travail pré-réfrigérés. </li><li> Ouvrez le côlon rougeur longitudinalement le long de son mésentère et de la peinture sur le plateau froid. Les tumeurs sont plus facilement visualisées lorsque le colon est placé sur une surface sombre. Alternativement, 1% de colorant bleu Alcian peut être appliqué à mettre en lumière tumors. Évaluer le nombre et la taille de la tumeur avec une règle ou un pied à coulisse numérique. </li><li> Petites sections de tissu normal adjacent de la tumeur et peut être excisé à ce point pour une analyse ultérieure par l&#39;ARN, les protéines, ou immunohistochimie (IHC) les méthodes, laissant une partie du côlon restant pour l&#39;évaluation histologique. </li></ol> La photographie numérique des échantillons bruts du côlon immédiatement après l&#39;étape 5.2 peut être utile pour une analyse précise de la charge tumorale, surtout si une partie importante des colons sont excisées pour d&#39;autres formes d&#39;analyse tel que décrit ci-dessus. La charge tumorale (%) peut être calculé comme zone tumorale / région du côlon totale utilisant des logiciels libres tels que ImageJ. 6. Préparation du Colon pour l&#39;évaluation histologique <ol><li> Appliquer formol à 10% au côlon restant sur le plateau froid via une seringue ou d&#39;un doigt. Permettant de fixer le tissu pendant au moins 30 secondes de cette manière faciliter le transfert dans le bassin de fixation. Assurez-vous de formol résiduel wiped off avant de peindre un colon ouverture du nouveau sur le même plateau. </li><li> Transfert colons dans un bassin rempli de formol à 10% et de cerner les bords. </li><li> Après 3 h de fixation, de transférer deux points à 70% d&#39;éthanol. Colons peuvent être conservés dans l&#39;éthanol à 70% indéfiniment. </li><li> Trois sections longitudinales du côlon (proximal, moyen, distal / rectum) peuvent être stabilisés dans de la gélose à 2% et soumis pour inclusion dans la paraffine. Assurer que le côlon proximal et distal du colon / rectum sont orientés d&#39;une manière uniforme pour chaque souris. </li><li> Dysplasie dommages crypte, et l&#39;inflammation peut être décrite et évaluée par une personne expérimentée selon des protocoles précédemment publiés. 10, 13-15 Les souris peuvent être sacrifiés avant 70 jours si l&#39;expérimentateur est intéressé par la détection précoce des événements dysplasiques. </li></ol> 7. Les résultats représentatifs Le modèle AOM / DSS décrit ici permet au chercheur de générer de manière fiable les tumeurs du côlon chez la souris.La croissance tumorale dans ce modèle est directement influencée par le processus inflammatoire associée. Gravité colite doivent être surveillés cliniquement par suite de la perte de poids et la présence de diarrhée / selles sanglantes (Figure 2). Ces signes de la maladie ont tendance à commencer le 5 e jour du cycle DSS et pendant quatre jours ou plus après DSS est retiré. Rarement, les souris avec une charge importante tumeur rectale peuvent développer un prolapsus rectal. Après la diarrhée DSS deuxième ou troisième cycle peut devenir persistante. Typiquement tumeurs sont présents et identifiables par coloscopie murin avant le troisième cycle de DSS (figure 3). Plus de temps et un troisième des résultats DSS dans les grandes tumeurs au moment de la récolte (figure 4). Utilisez de l&#39;application topique Alcian bleuissement peut être utilisé pour mettre en évidence des tumeurs (figure 5). Des photographies de tumeurs du côlon aidera à générer des mesures de tumeurs qui peuvent être utilisés pour comparer quantitativement la production de la tumeur, et la tailleentre les groupes expérimentaux (figure 6). Fixes et embarqués paraffine spécimens du côlon peut alors être évalué pour l&#39;histologie ou à l&#39;utilisation de la coloration immunohistochimique (figure 7 et 8). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Schéma de l&#39;OMA et de l&#39;administration DSS. AOM (10 mg / kg) est injecté au jour 0. Au début de la deuxième semaine (jour 7), la solution de DSS 2,5% est administré à des souris dans leur eau potable. Sept jours de DSS est suivie de deux semaines de l&#39;eau en autoclave. Deux autres cycles de DSS sont administrés avant le sacrifice. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Poids de la souris Figure 2. Par rapport au niveau de référence au cours de l&#39;OMA et de l&#39;administration DSS. Notez que dans la semaine suivant chaque cycle DSS, souris los<html> % e 5-10 de leur poids corporel. La perte de poids dans cette expérience est un marqueur de substitution de la gravité colite. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3. Vue de tumeurs dans le côlon distal par murin endoscopie au jour 50 de l&#39;AOM / DSS traitement. Notez les masses polypoïdes multiples obstruant la lumière du côlon distal (b, c) par rapport à la normale du côlon (a). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig4.jpg" alt="Figure 4" /> Figure 4. Longitudinalement ouvert côlon de souris illustrant l&#39;aspect macroscopique des tumeurs. Notez la charge tumorale élevée dans la partie distale du côlon / rectum (à gauche en haut), et la texture caractéristique ondulé du côlon proximal (image de droite supérieure) avec la croissance des tumeurs peu. Une vue de près de la partie distale du côlon montre de nombreuses tumeurs de différentes tailles (ci-dessous). ove_content &quot;fo: keep-together.within pages =&quot; always &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig5.jpg" alt="Figure 5" /> Les tumeurs Figure 5. Mis en évidence par l&#39;application de Alcian bleuissement. Noter comment le colorant souligne la texture normale du côlon, ainsi que les bords de chaque tumeur individuelle. Une telle coloration peut être utile dans la mesure précise des zones tumorales par règle ou mesure numérique. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig6.jpg" alt="Figure 6" /> Figure 6. Répartition représentative du nombre moyen de tumeurs par souris traitées avec l&#39;AOM / DSS. Noter que la majorité des tumeurs sont situées dans le côlon distal et sont &lt;2 mm. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig7.jpg" alt="Figure 8" /> Figure 7. Inclus en paraffine des coupes longitudinales du côlon à cassette (ci-dessus) d&#39;uned sur la diapositive après coloration H &amp; E (ci-dessous). Notez que Alcian résiduelle bleuissement n&#39;interfère pas avec H &amp; E coloration. Une grosse tumeur est encerclé sur l&#39;image de la diapositive (encerclée). Les appellations «distal», «moyen» et «proximal» résultent de la coupe la totalité du côlon par tiers entre le caecum et l&#39;anus. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig8.jpg" alt="Figure 8" /> Figure 8. Histologie Représentant d&#39;une tumeur résultant de l&#39;AOM / DSS administration dans le côlon distal. H &amp; E, BrdU, et β-caténine lames colorées à 50X (panneau supérieur) et 400X (panneau inférieur), respectivement démontrer les changements dysplasiques similaires à adénocarcinomes du côlon humain.

<ol>
	<li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study.">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li><li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+colon+cancer.">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li><li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+inflammation+and+cancer.">Intestinal inflammation and cancer.</a> Gastroenterology. 140, 1807-1816 (2011).</li><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplasia+and+carcinoma+development+in+a+repeated+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+model.">Dysplasia and carcinoma development in a repeated dextran sulfate sodium-induced colitis model.</a> J. Gastroenterol. Hepatol. 17, 1078-1083 (2002).</li><li>Kanneganti, M., Mino-Kenudson, M., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+colitis-associated+carcinogenesis.">Animal models of colitis-associated carcinogenesis.</a> J. Biomed. Biotechnol. 342637, (2011).</li><li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression.">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat. Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li><li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inflammation-related+mouse+colon+carcinogenesis+model+induced+by+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate.">A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate.</a> Cancer Sci. 94, 965-973 (2003).</li><li>De Robertis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AOM/DSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis:+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies.">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J. Carcinog. 10, 9 (2011).</li><li>Wirtz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li><li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis.">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab Invest. 69, 238-249 (1993).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Wirtz, S., Nikolaev, A., Kiesslich, R., Lehr, H. A., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy.">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li><li>Shaker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epimorphin+deletion+protects+mice+from+inflammation-induced+colon+carcinogenesis+and+alters+stem+cell+niche+myofibroblast+secretion.">Epimorphin deletion protects mice from inflammation-induced colon carcinogenesis and alters stem cell niche myofibroblast secretion.</a> J. Clin. Invest. 120, 2081-2093 (2010).</li><li>Boivin, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+mouse+models+of+intestinal+cancer:+consensus+report+and+recommendations.">Pathology of mouse models of intestinal cancer: consensus report and recommendations.</a> Gastroenterology. 124, 762-777 (2003).</li><li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplasia+and+cancer+in+the+dextran+sulfate+sodium+mouse+colitis+model.+Relevance+to+colitis-associated+neoplasia+in+the+human:+a+study+of+histopathology,+B-catenin+and+p53+expression+and+the+role+of+inflammation.">Dysplasia and cancer in the dextran sulfate sodium mouse colitis model. Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation.</a> Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).</li><li>Yoshida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forkhead+box+M1+transcription+factor+contributes+to+the+development+and+growth+of+mouse+colorectal+cancer.">The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).</li><li>Suzuki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+the+susceptibility+to+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate-induced+colon+carcinogenesis+in+mice.">Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice.</a> Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).</li><li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, 544-551 (1998).</li><li>Nambiar, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+analysis+of+azoxymethane+induced+colon+tumors+in+inbred+mice+commonly+used+as+transgenic/knockout+progenitors.">Preliminary analysis of azoxymethane induced colon tumors in inbred mice commonly used as transgenic/knockout progenitors.</a> Int. J. Oncol. 22, 145-150 (2003).</li><li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+carcinogenesis:+Review+of+human+and+experimental+animal+studies.">Colorectal carcinogenesis: Review of human and experimental animal studies.</a> J Carcinog. 8, (2009).</li><li>Ciorba, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IDO-1+by+immunostimulatory+DNA+limits+severity+of+experimental+colitis.">Induction of IDO-1 by immunostimulatory DNA limits severity of experimental colitis.</a> J. Immunol. 184, 3907-3916 (2010).</li><li>Kerr, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification:+A+poly-A+purification+solution.">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: A poly-A purification solution.</a> Inflamm. Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li><li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=is+required+for+resection-induced+changes+in+apoptosis,+proliferation,+and+members+of+the+extrinsic+cell+death+pathways.">is required for resection-induced changes in apoptosis, proliferation, and members of the extrinsic cell death pathways.</a> Gastroenterology. 126, 220-230 (2004).</li></ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Le traitement des souris avec l&#39;OMA et le DSS rapidement et efficacement des modèles humaine colite associée au cancer. Hypothèses concernant les facteurs héréditaires contribuent à la colite cancers associés peut être facilement étudiée sur des souris génétiquement modifiées. 13, 16 variante, l&#39;effet des cibles pharmacologiques dans la colite associée à un cancer peut être étudiée en utilisant des souris sauvages. Bien que ce modèle est très apprécié...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Les souris C57BL/6J </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxyméthane (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100MG </td><td> Solution mère: diluée à 10 mg / ml dans de l&#39;eau distillée pour être conservés à -20 ° C, de 0,5 à 1 ml d&#39;aliquotes. Solution de travail: Diluer stock à 1 mg / ml dans isotonique (0,9%) une solution saline </td></tr><tr><td> Sodium Sulfate de Dextran (DSS) </td><td> Conseil TdB </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 kDa préparations provenant d&#39;autres sources sont acceptables; Le même sort doit être utilisé pour une expérience unique) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewsystème miniendoscopic </td><td> Karl Storz </td><td> Multiple </td><td> Voir Becker et al. Pour une explication détaillée de l&#39;équipement et l&#39;installation 11. </td></tr><tr><td> PPT rapide FilterMax 500 ml Bouteille-filtre, 0,22 um PSE </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Tout filtre type de tissus culture est acceptable </td></tr><tr><td> Alcool éthylique 200 Proof / ASC USP </td><td> Pharmaco-AAPER (ou autre) </td><td> 11ACS200 </td><td> Diluer à 70% dans de l&#39;eau distillée </td></tr><tr><td> Isoflurane, USP </td><td> Alimentation Butler santé animale </td><td> 4029405 </td><td> Placez la souris dans un bocal de verre avec de la gaze ou un chiffon trempé dans de petites anesthésie </td></tr><tr><td> 18G aiguille droite Gavage </td><td> Braintree scientifique </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphate Buffered Saline (PBS) </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Diluer jusqu&#39;à 1X (0,01 M) dans de l&#39;eau distillée </td></tr><tr><td> Plateau froid (Tissue Tek II Cold Plate) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> Conserver à -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ Software </td><td> NIH (téléchargement gratuit) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Le formaldéhyde (37%) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> Diluer à 10% dans du PBS </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Réchaud utiliser pour créer une solution à 2% dans de l&#39;eau distillée </td></tr><tr><td> Pince à pansements oculaires Miltex </td><td> MedPlus Inc </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux oculaires Miltex </td><td> MedPlus Inc </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; Points courbes éviter d&#39;endommager lors de l&#39;ouverture du côlon. </td></tr><tr><td> Bleu Alcian 8GX (poudre) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> Ajouter 1 g de poudre pour 100 ml d&#39;acide acétique à 3% (3 ml d&#39;acide acétique glacial + 97 ml d&#39;eau distillée) </td></tr><tr><td> Tuberculine de 1 ml seringue avec joint x 26 G 3/8 po aiguille de biseau intradermique </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> Pour l&#39;injection d&#39;AOM </td></tr></tbody></table>

modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)

Les personnes atteintes de la maladie inflammatoire de l&#39;intestin (MICI) comme la maladie de Crohn (MC) ou de rectocolite hémorragique (RCH) sont à risque accru de développer un cancer colorectal (CCR) sur les individus en bonne santé. Ce risque est proportionnel à la durée et l&#39;étendue de la maladie, avec une incidence cumulée atteint 30% chez les personnes ayant de longue date UC avec atteinte colique généralisée. 1 dysplasie colique au cours des MICI et de la colite associée cancer (CAC) sont censés se développer en raison des cycles répétés de lésions des cellules épithéliales et la réparation alors que ces cellules sont baignées dans un milieu de cytokine inflammatoire chronique. 2 Tout cancers spontanés et de la colite associée à partager la qualité des adénocarcinomes étant, la séquence des événements moléculaires qui sous-tendent l&#39;on croit être différent. 3 Ce distinction affirme la nécessité pour les modèles animaux spécifiques du CAC. Plusieurs modèles de souris existent actuellement pour l&#39;étude de la CAC. Dextran sulfate sodium (DSS), un agent avec des effets toxiques directs sur l&#39;épithélium du côlon, peut être administré dans l&#39;eau potable à des souris dans des cycles multiples pour créer un état inflammatoire chronique. Avec une durée suffisante, certains de ces souris seront développent des tumeurs. 4 Le développement de la tumeur est accélérée dans ce modèle s&#39;il est administré dans un cadre pro-cancérigènes. Ceux-ci incluent des souris porteuses de mutations génétiques dans les voies de la tumorigenèse (APC, p53, Msh2), ainsi que des souris prétraitées avec des agents génotoxiques (azoxyméthane [OMA], le 1,2-diméthylhydrazine [DMH]) 5. La combinaison de la DSS avec AOM en tant que modèle de la colite associée cancer a gagné en popularité pour sa reproductibilité, la puissance, des prix bas, et la facilité d&#39;utilisation. Même si elles ont un mécanisme commun, AOM a été trouvé pour être plus puissant et stable en solution que DMH. Alors que le développement de tumeurs dans d&#39;autres modèles nécessite généralement plusieurs mois, les souris injectées avec AOM et ensuite traité avec DSS développer des tumeurs adéquates dans uns peu que 7-10 semaines. 6, 7 Enfin, l&#39;OMA et le DSS peut être administré à des souris de n&#39;importe quel fond génétique (knock out, transgéniques, etc) sans croisement d&#39;une souche oncogène spécifique. Ici, nous démontrons un protocole pour l&#39;inflammation axée sur la tumorigenèse du côlon chez des souris en utilisant une seule injection d&#39;AOM suivie de trois cycles de sept jours de DSS sur une période de 10 semaines. Ce modèle induit des tumeurs avec des modifications histologiques et moléculaires ressemblant étroitement à celles qui se produisent chez l&#39;homme CAC et fournit un modèle très précieux pour l&#39;étude de l&#39;oncogenèse et la chimioprévention dans cette maladie 8.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS at JoVE.com

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Nous démontrons un protocole dans lequel l&#39;administration de l&#39;agent génotoxique azoxyméthane (AOM), suivie de trois cycles de sodium pro-inflammatoire du sulfate de dextran (DSS) rapidement et génère constamment des tumeurs du côlon chez des souris présentant des similitudes morphologiques et moléculaires à celles observées dans la colite humaine associée à un cancer.

Modélisation colite cancer associé avec azoxyméthane (OMA) et de sodium Sulfate de Dextran (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

modeling-colitis-associated-cancer-with-azoxymethane-aom-dextran

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

46.5K vues.  Washington University School of Medicine. Nous démontrons un protocole dans lequel l'administration de l'agent génotoxique azoxyméthane (AOM), suivie de trois cycles de sodium pro-inflammatoire du sulfate de dextran (DSS) rapidement et génère constamment des tumeurs du côlon chez des souris présentant des similitudes morphologiques et moléculaires à celles observées dans la colite humaine associée à un cancer.

Vidéo: Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Course de modélisation chez la souris - Moyen-occlusion artérielle cérébrale avec le modèle filamentaire

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Recherche

Médecine

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy tissue is the root cause of disease and death. For other cancers (e.g. breast, lung, etc.), it is the process of metastasis, in which tumor cells move from a primary tumor mass, colonize distal sites and ultimately contribute to organ failure, that eventually leads to morbidity and mortality 3. It has been estimated that invasion and metastasis are responsible for 90&#37; of cancer deaths 4. As a result, there has been intense interest in identifying the molecular processes and critical protein mediators of invasion and metastasis for the purposes of improving diagnosis and treatment 5.
A challenge for cancer scientists is to develop invasion assays that sufficiently resemble the in vivo situation to enable accurate disease modeling 6. Two-dimensional cell motility assays are only informative about one aspect of invasion and do not take into account extracellular matrix (ECM) protein remodeling which is also a critical element. Recently, research has refined our understanding of tumor cell invasion and revealed that individual cells may move by elongated or rounded modes 7. In addition, there has been greater appreciation of the contribution of collective invasion, in which cells invade in strands, sheets and clusters, particularly in highly differentiated tumors that maintain epithelial characteristics, to the spread of cancer 8.
We present a refined method 9 for examining the contributions of candidate proteins to collective invasion 10. In particular, by engineering separate pools of cells to express different fluorescent proteins, it is possible to molecularly dissect the activities and proteins required in leading cells versus those required in following cells. The use of RNAi provides the molecular tool to experimentally disassemble the processes involved in individual cell invasion as well as in different positions of collective invasion. In this procedure, mixtures of fluorescently-labeled cells are plated on the bottom of a Transwell insert previously filled with Matrigel ECM protein, then allowed to invade "upwards" through the filter and into the Matrigel. Reconstruction of z-series image stacks, obtained by confocal imaging, into three-dimensional representations allows for visualization of collectively invading strands and analysis of the representation of fluorescently-labeled cells in leading versus following positions.

Models of tumor cell invasion into three-dimensional extracellular matrix better reflect the in vivo situation than two-dimensional motility assays. Using matrix invasion assays combined with confocal imaging of fluorescently-labeled cells, detailed information on invasion modes and the distinct contributions of leading versus following cells can be obtained.

Modélisation et Imagerie en 3 dimensions l&#39;invasion des cellules collectives

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical treatments and improved platinum-based chemotherapies, there has been little improvement in EOC survival rates for more than four decades 1,2. Whilst stage I tumors have 5-year survival rates &gt;85%, survival rates for stage III/IV disease are &lt;40%. Thus, the high rates of mortality for EOC could be significantly decreased if tumors were detected at earlier, more treatable, stages 3-5. At present, the molecular genetic and biological basis of early stage disease development is poorly understood. More specifically, little is known about the role of the microenvironment during tumor initiation; but known risk factors for EOCs (e.g. age and parity) suggest that the microenvironment plays a key role in the early genesis of EOCs. We therefore developed three-dimensional heterotypic models of both the normal ovary and of early stage ovarian cancers. For the normal ovary, we co-cultured normal ovarian surface epithelial (IOSE) and normal stromal fibroblast (INOF)&nbsp;cells, immortalized by retrovrial transduction of the catalytic subunit of human telomerase holoenzyme (hTERT) to extend the lifespan of these cells in culture. To model the earliest stages of ovarian epithelial cell transformation, overexpression of the CMYC oncogene in IOSE cells, again co-cultured with INOF cells. These heterotypic models were used to investigate the effects of aging and senescence on the transformation and invasion of epithelial cells. Here we describe the methodological steps in development of these three-dimensional model; these methodologies aren't specific to the development of normal ovary and ovarian cancer tissues, and could be used to study other tissue types where stromal and epithelial cell interactions are a fundamental aspect of the tissue maintenance and disease development.

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We describe methodologies for establishing in vitro heterotypic three-dimensional models comprising ovarian fibroblasts and normal ovarian surface or ovarian cancer epithelial cells. We discuss the use of these models to study stromal-epithelial interactions that occur during ovarian cancer development.

Hétérotypique tridimensionnelle<em&gt; In Vitro</em&gt; Modélisation des interactions stroma-épithéliales lors de l&#39;initiation et la progression du cancer des ovaires

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

Décollement de la rétine modèle chez les rongeurs par injection sous-rétinienne de hyaluronate de sodium

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully recapitulate early- and late-stage metastatic disease progression. Typical tumor implantation models utilize ectopic or orthotopic primary tumor implantation, but few include systemic spontaneous metastatic disease that mimics the clinical setting. This protocol describes the key steps to develop RCC disease progression stages similar to patients. First, it uses a highly metastatic mouse tumor cell line in a syngeneic model to show orthotopic tumor cell implantation. Methods include superficial and internal implantation into the sub-capsular space with cells combined with matrigel to prevent leakage and early spread. Next it describes the procedures for excision of tumor-bearing kidney (nephrectomy), with critical pre- and post- surgical mouse care. Finally, it outlines the steps necessary to monitor and assess micro-and macro-metastatic disease progression, including bioluminescent imaging as well provides a detailed visual necropsy guide to score systemic disease distribution. The goal of this protocol description is to facilitate the widespread use of clinically relevant metastatic RCC models to improve the predictive value of future therapeutic testing.&#160;

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Models of spontaneous metastatic renal cell carcinoma (RCC) disease progression can be used for evaluating treatments in a clinically relevant setting. This protocol demonstrates different procedures for orthotopic kidney tumor cell implantation, proper nephrectomy, and finally outlines a necropsy guide for visual and bioluminescent scoring of metastatic burden and localization.

Modélisation spontanée carcinome rénal métastatique (MRCC) chez des souris après néphrectomie

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Travailler avec les tissus humains pour la recherche translationnelle sur le cancer

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best advance translational objectives and uncover new therapeutic strategies for brain injury associated with preterm birth, preclinical models of EoP must include similar mechanisms of prenatal global injury observed in humans and involve multiple components of the maternal-placental-fetal system. Ideally, models should produce a similar spectrum of functional deficits in the mature animal and recapitulate multiple aspects of the pathophysiology. To mimic human systemic placental perfusion defects, placental underperfusion and/or chorioamnionitis associated with pathogen-induced inflammation in early preterm birth, we developed a model of prenatal transient systemic hypoxia-ischemia (TSHI) combined with intra-amniotic lipopolysaccharide (LPS). In pregnant Sprague Dawley rats, TSHI via uterine artery occlusion on embryonic day 18 (E18) induces a graded placental underperfusion defect associated with increasing CNS damage in the fetus. When combined with intra-amniotic LPS injections, placental inflammation is increased and CNS damage is compounded with associated white matter, gait and imaging abnormalities. Prenatal TSHI and TSHI+LPS prenatal insults meet several of the criteria of an EoP model including recapitulating the intrauterine insult, causing loss of neurons, oligodendrocytes and axons, loss of subplate, and functional deficits in adult animals that mimic those observed in children born extremely preterm. Moreover, this model allows for the dissection of inflammation induced by divergent injury types.

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

Modélisation encéphalopathie de prématurité Utilisation prénatale hypoxie ischémie avec un lipopolysaccharide intra-amniotique chez le rat

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. Instead, ovarian cancer cells exfoliated from the primary tumor are carried by peritoneal fluid to metastatic sites within the peritoneal cavity. These sites, most notably the abdominal peritoneum and omentum, are organs covered by a mesothelium-lined surface. To investigate the processes of ovarian cancer dissemination, we assembled a complex three-dimensional culture system that reconstructs the lining of the peritoneal cavity in vitro. Primary human fibroblasts and mesothelial cells were isolated from human omentum. The fibroblasts were then mixed with extracellular matrix and covered with a layer of the primary human mesothelial cells to mimic the peritoneal and omental surfaces encountered by metastasizing ovarian cancer cells. The resulting organotypic model is, as shown, used to examine the early steps of ovarian cancer dissemination, including cancer cell adhesion, invasion, and proliferation. This model has been used in a number of studies to investigate the role of the microenvironment (cellular and acellular) in early ovarian cancer dissemination. It has also been successfully adapted to high throughput screening and used to identify and test inhibitors of ovarian cancer metastasis.

Here, we present a protocol to construct a three-dimensional in vitro model of the lining of the peritoneal cavity, composed of primary human mesothelial cells and fibroblasts layered with extracellular matrix, as a tool to investigate ovarian cancer cell adhesion, invasion, and proliferation.

Modélisation des étapes précoces de cancer de l&#39;ovaire Diffusion dans une culture organotypique de la cavité péritonéale humain

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and progress in this site. The model presented in the current report utilizes human primary bone marrow stromal cells and osteoblasts as two representative cell types from the marrow niche that influence tumor cell phenotype. The in vitro co-culture conditions described for human leukemic cells with these primary niche components support the generation of a chemoresistant subpopulation of tumor cells that can be efficiently recovered from culture for analysis by diverse techniques. A strict feeding schedule to prevent nutrient fluxes followed by gel type 10 cross-linked dextran (G10) particles recovery of the population of tumor cells that have migrated beneath the adherent bone marrow stromal cells (BMSC) or osteoblasts (OB) generating a "phase dim" (PD) population of tumor cells, provides a consistent source of purified therapy resistant leukemic cells. This clinically relevant population of tumor cells can be evaluated by standard methods to investigate apoptotic, metabolic, and cell cycle regulatory pathways as well as providing a more rigorous target in which to test novel therapeutic strategies prior to pre-clinical investigations targeted at minimal residual disease.

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

The current report summarizes a protocol that can be utilized to model the influence of the bone marrow microenvironment niche on leukemic cells with emphasis placed on enrichment of the most chemoresistant subpopulation.

Modélisation chimiothérapie leucémie résistant<em&gt; In Vitro</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...

Modeling and Simulations of Olfactory Drug Delivery with Passive and Active Controls of Nasally Inhaled Pharmaceutical Aerosols

There are many advantages of direct nose-to-brain drug delivery in the treatment of neurological disorders. However, its application is limited by the extremely low delivery efficiency (&#60; 1%) to the olfactory mucosa that directly connects the brain. It is crucial to develop novel techniques to deliver neurological medications more effectively to the olfactory region. The objective of this study is to develop a numerical platform to simulate and improve intranasal olfactory drug delivery. A coupled image-CFD method was presented that synthetized the image-based model development, quality meshing, fluid simulation, and magnetic particle tracking. With this method, performances of three intranasal delivery protocols were numerically assessed and compared. Influences of breathing maneuvers, magnet layout, magnetic field strength, drug release position, and particle size on the olfactory dosage were also numerically studied.
From the simulations, we found that clinically significant olfactory dosage (up to 45%) were feasible using the combination of magnet layout and selective drug release. A 64 -fold higher delivery of dosage was predicted in the case with magnetophoretic guidance compared to the case without it. However, precise guidance of nasally inhaled aerosols to the olfactory region remains challenging due to the unstable nature of magnetophoresis, as well as the high sensitivity of olfactory dosage to patient-, device-, and particle-related factors.

This manuscript reviews the modeling and simulations of different protocols to deliver medications to the olfactory region in image-based nasal airway models. Multiple software modules are used to develop the anatomically accurate nose model, generate computational mesh, simulate nasal airflows, and predict particle deposition at the olfactory region.

Modélisation et simulations de Olfactive Drug Delivery avec les contrôles passifs et actifs de inhalés par voie nasale pharmaceutiques Aérosols

There are many advantages of direct nose-to-brain drug delivery in the treatment of neurological disorders. However, its application is limited by the ...