Cette étude utilise un modèle animal établi pour rechercher la récupération et les stades des séquelles de l’ischémie cérébrale. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est stable, fiable et relativement simple. Commencez par placer un rat anesthésié sur une table de fixation chirurgicale.
Tout au long de la chirurgie, maintenir la température corporelle du rat à 37 degrés Celsius dans un thermostat pour petits animaux. Connectez la bouche au masque de la machine d’anesthésie et confirmez l’anesthésie profonde par manque de tension d’extrémité, réflexes cornéens et douleur. Fixez les membres du rat à la table d’opération à l’aide de bandages en papier.
À l’aide d’un rasoir électrique, retirer le manteau cervical et stériliser le cou avec 75 % d’alcool. Utilisez des ciseaux ophtalmiques pour couper de deux à trois centimètres le long de la forme longitudinale centrale du cou. Et puis avec des forceps ophtalmiques, séparez le muscle sous-cutané.
Utilisez rétracteur maison pour exposer pleinement le champ de vision. Il faut prendre soin de présenter une technique aseptique appropriée pour toutes les interventions chirurgicales de survie. La technique illustrée plus tard dans la vidéo doit être pratiquée tout au long de la procédure.
Utilisez les micro forceps pour isoler l’artère carotide commune, l’artère carotide externe et l’artère carotide interne. Travailler au microscope, utiliser 8-0 sutures pour ligate l’artère carotide commune avec le noeud dur, artère carotide externe loin de l’extrémité de coeur avec le noeud dur, artère carotide interne avec le noeud lâche et puis pour aligner l’artère carotide externe près de l’extrémité de coeur. À l’aide de micro ciseaux, couper une petite ouverture dans l’artère carotide externe et insérer délicatement un boulon de fil.
Ligate la suture de l’artère carotide externe qui est mince et lâche noeud et couper l’artère carotide externe. Desserrez le nœud lâche de l’artère carotide interne et continuez à insérer le boulon de fil au début de l’artère cérébrale moyenne marquée de la suture et coupez le boulon de fil exposé. Après le temps ischémique est atteint après deux à trois heures, fixer la fracture de l’artère carotide externe à l’aide de micro forceps et retirer doucement le boulon de fil avec un autre micro forceps.
Après avoir complètement retiré l’extrémité avant du boulon de fil de l’artère carotide interne, ligate l’artère carotide externe qui a été bordée de 8-0 suture, puis retirer le boulon de fil complètement. Après avoir desserré l’artère carotide commune, tamponnez environ 50 000 unités de poudre de sodium à la pénicilline à la surface de la plaie pour prévenir l’infection. Utilisez quatre sutures pour suturer les muscles et la peau sous-cutanés.
Après avoir remis le rat à la cage, utilisez une seringue d’un millilitre pour donner environ 0,2 millilitres d’eau au rat par voie orale pour prévenir la déshydratation postopératoire. Choisissez les animaux en fonction du score le plus long pour les études de coloration TTC ou de moteur sensoriel. Après avoir incubé le cerveau isolé pour la coloration TTC à moins 20 degrés Celsius de 30 minutes, placez-le dans un moule pré-refroidi de tranche de cerveau de rat.
À l’aide d’une lame pré-refroidie, couper le cerveau en six sections consécutives de deux millimètres d’épaisseur. Tacher les sections avec 2% de TTC dans une plaque de culture de six puits et incuber pendant 30 à 60 minutes à 37 degrés Celsius tout en secouant. Toutes les 10 minutes, retournez les sections jusqu’à ce que l’ischémie cérébrale et les zones non affectées soient visiblement blanches et rouges.
Tapissez les tranches de cerveau verticalement sur le carton noir afin de l’arrière à l’avant du cerveau à l’aide d’une règle pour s’assurer que la longueur totale de chaque ligne est la même et prendre des photos. Importez la photo et sélectionnez les tranches de cerveau. Sélectionnez le premier plan noir et tapez Alt Delete pour remplir la couleur d’arrière-plan, puis contrôlez D pour désélectionner.
Enfin, enregistrez l’image sur le bureau. Pour analyser le volume infarctus, ouvrez d’abord le logiciel et importez la photo. Pour modifier les défauts, ajustez la luminosité avec l’outil d’amélioration du contraste de sorte que l’arrière-plan soit noir.
Dans le filtre, utilisez l’outil médian pour supprimer les faits saillants. Pour calculer la zone normale gauche du cerveau, sélectionnez la couleur à l’aide de la segmentation et ajustez la valeur de H, S et moi pour séparer les tranches cérébrales du fond noir. Retour à compter la taille et cliquez sur compter.
Cliquez sur les objets divisés en modifier pour séparer le cerveau de la ligne médiane qui distinguera automatiquement les zones cérébrales gauche et droite. Pour calculer la bonne zone cérébrale infarctuse, importez l’image, ajustez l’arrière-plan et supprimez les faits saillants comme cela a été fait précédemment. Sélectionnez la taille de comptage et cliquez sur dessiner l’outil d’objets de fusion dans modifier.
Sélectionnez manuellement la zone ischémique et cliquez sur le nombre pour calculer la zone ischémique. Pour calculer la bonne zone saine du cerveau, importez d’abord l’image, ajustez l’arrière-plan et supprimez les faits saillants comme cela a été fait précédemment. Sélectionnez la couleur à l’aide de la segmentation et ajustez la valeur de H, S et moi pour séparer les tranches saines du cerveau du fond noir.
Retournez pour compter la taille et cliquez sur compter pour calculer cette zone. Cliquez sur les objets divisés en modifier pour séparer le cerveau de la ligne médiane qui distinguera automatiquement les zones cérébrales gauche et droite. Prenez les rats choisis pour des études sensorielles de moteur et pour l’essai bilatéral d’assymétrie et enveloppez le ruban de papier sur la partie saphenous de chaque griffe avant trois fois utilisant la pression égale.
Pour chaque rat, enregistrez avec la caméra le nombre de fois que chaque griffe avant entre en contact et retire la bande dans les cinq minutes, y compris les temps de patte non affectés et affectés. Répétez l’emballage et l’enregistrement après 30 minutes, puis calculez les valeurs. Pour l’essai de marche de grille, placez le rat au centre d’une plate-forme élevée de surface de grille avec des ouvertures de 2,5 centimètres carrés.
Poussez légèrement les hanches du rat pour l’encourager à traverser la surface. À l’aide de la caméra, enregistrez le nombre de défauts de pied commis par les membres affectés à droite et à gauche et le nombre total d’étapes en une minute avec la caméra. Pour l’essai de tige de rotor, installez l’appareil rotatif de fatigue de barre de rat à une vitesse de 13 RPM sur une période de cinq minutes utilisant le logiciel de support.
Démarrez le programme informatique et placez le rat sur les anneaux de la tige du rotor en même temps. Terminez l’essai si le rat tombe de l’anneau ou après cinq minutes et enregistrez le temps de rotation. Laisser reposer le rat pendant 30 minutes, puis répéter le test deux fois de plus et choisir la valeur maximale comme dernier temps rotatif.
Pour l’essai de corde de levage, placez l’instrument de corde de levage sur un bureau. Faites saisir la corde par le rat avec ses membres antérieurs et laissez-la pendre. Enregistrez le temps de pendaison et calculez les scores.
Quand les dommages ischémiques de cerveau induits par l’occlusion et la reperfusion cérébrales moyennes d’artère ont été étudiés, le boulon de fil de poids de 300 grammes 3040 et le temps infarctus cérébral de trois heures se sont avérés être les plus appropriés avec le plus grand infarctus cérébral, le score le plus long, et le plus grand rapport de succès de modèle. Ceci a été sensiblement amélioré comparé au traitement conventionnel du poids de 275 grammes, du boulon de fil de 2636 et du temps infarctus de cerveau de deux heures. Pour étudier l’état de rétablissement de l’ischémie cérébrale, la coloration de TTC a été exécutée et elle a indiqué le volume infarctus et rétrécissant à 23.4%le premier jour après occlusion et reperfusion d’artère cérébrale moyenne, 19.6%le 35ème jour, 16.1%le 60ème et 15.7% le 90ème.
Après une journée d’occlusion et de reperfusion de l’artère cérébrale moyenne, le biais sensoriel du moteur dans le test bilatéral d’assymétrie, les temps d’erreur de marche de grille dans l’essai de marche de grille et le score de corde de levage dans l’essai de corde de levage sont tous augmentés tandis que le temps de tige de rotor dans l’essai de tige de rotor a diminué indiquant l’importance de ces essais en étudiant l’ischémie aiguë de cerveau. Seulement le biais sensoriel de moteur a maintenu de grands désordres fonctionnels avec une manière temps-dépendante après 35, 60 et 90 jours d’occlusion et de reperfusion cérébrales moyennes d’artère. Pour l’essai de marche de grille, il y avait des différences significatives des temps d’erreur de marche de grille pendant 35 et 60 jours.
Ces résultats ont indiqué que ces deux tests pourraient être appropriés pour tester la récupération chez les rats. Afin d’assurer le succès, l’action doit être douce et l’opération doit être régulière. D’autres tests comportementaux tels que la détection de la démarche peuvent également convenir à ce modèle.
Le développement de ce modèle pourrait ouvrir la voie aux chercheurs pour explorer l’ischémie cérébrale aux stades de la récupération et des séquelles.
