Les auteurs tiennent à remercier ADIR (Aide à Domicile aux Insuffisants Respiratoires) et la Fondation de l&#39;Avenir pour leur soutien financier et à M. Fanie Barnabé-Heider pour éditer le manuscrit.

Une. Des cultures primaires de la muqueuse olfactive et olfactive Ampoules <ol><li> Avant la dissection <ol><li> Faire milieu, pour 50 ml, en ajoutant 44 ml d&#39;sans calcium Dulbecco Modified Eagle / F12 de milieu de Ham (DMEM/F12) additionné de 5 ml de sérum bovin fœtal (FBS) et 1 ml de pénicilline / streptomycine. </li><li> Manteau de flacons de 75 cm2 avec du poly-L-lysine (50 ng / ml, 1,5 ug / cm 2), 1 heure à température ambiante. </li><li> Rincer les flacons avec du PBS 1x. </li><li> Conserver les flacons enrobés dans le réfrigérateur jusqu&#39;à 1 semaine. </li></ol></li><li> Dissection <ol><li> Toute méthode d&#39;euthanasie doit être approuvée à l&#39;avance par les soins des animaux et l&#39;utilisation du comité de l&#39;institution et réalisée par un personnel qualifié. </li><li> Choisissez rats consanguins comme les rats Fischer. </li><li> Après le rat a été confirmé avoir conclu une anesthésie profonde avec du pentobarbital de sodium ou d&#39;autres formes injectables de l&#39;anesthésie comme la kétamine / xylazine, décapiter lui et rEDéplacez la peau. </li><li> Ouvrir la boîte crânienne de la partie antérieure à la partie postérieure. </li><li> Retirez la prise de OB soin d&#39;éviter les méninges. </li><li> Dans le même rat, ouvrir la cavité nasale sagittaly. </li><li> Supprimer le OM prenant soin d&#39;éviter la muqueuse respiratoire. Notez que l&#39;épithélium OM peut être facilement identifié par sa couleur jaunâtre. </li><li> Protocoles plus détaillés sur la dissection de l&#39;OM peuvent être trouver dans une précédente <a href="https://www.jove.com/video/2762/isolating-nasal-olfactory-stem-cells-from-rodents-or-humans">J. Vis. Exp</a> . publication 13. </li></ol></li><li> Culture <ol><li> Placer OB en sel tamponné la solution de Hank (HBSS) contenant 0,1% de trypsine pendant 45 min à 37 ° C. </li><li> Placer OM dans du HBSS contenant 0,05% de collagénase A pendant 45 min à 37 ° C. </li><li> Arrêtez digestion enzymatique par addition de 2 ml de milieu chaud. </li><li> Laver les cellules avec le milieu et les centrifuger à 300 g pendant 3 min. </li><li> Échantillons de triturer 2ml de milieu à l&#39;aide d&#39;une pipette P1000 jusqu&#39;à une suspension cellulaire homogène. </li><li> Plaquer les cellules dans les flacons pré-revêtues (5-10 x 10 6 cellules / flacon) avec 25 ml de milieu chaud. </li><li> Incuber les cellules et à la culture à 37 ° C avec 5% de CO 2. </li><li> Changer la moitié du milieu tous les 2 jours. </li><li> Après 6-8 jours in vitro, consultez la proportion de cellules p75 positifs sur de petits échantillons de cellules, supposé être OEC chez les rongeurs, par cytométrie de flux ou par immunocytochimie. Pour ces analyses, d&#39;autres marqueurs peuvent être étudiés tels que la GFAP et S100β. </li></ol></li><li> La cytométrie en flux analyse <ol><li> Recueillir les cellules comme décrit dans (section 2.2 ci-dessous) &quot;transplantation cellulaire&quot;. </li><li> Les incuber avec l&#39;anticorps primaire p75 (1:100) pendant 15 min à 4 ° C. </li><li> Laver les cellules avec 2 ml de PBS-EDTA et les centrifuger à 300 g pendant 3 min. </li><li> Incuber les cellules avec un anticorps secondaire conjugué à PE anti-souris pendant 15min à 4 ° C dans l&#39;obscurité (1:200). </li><li> Laver les cellules avec 2 ml de PBS-EDTA et les centrifuger à 300 g pendant 3 min. </li><li> Remettre en suspension les cellules dans 500 ul de PBS-EDTA. </li><li> Analyser 10-30 x 10 3 cellules avec cytomètre en flux. </li></ol></li><li> analyse de Immunocytochemistry <ol><li> Plaquer les cellules dans des plaques 6 puits prérevêtues pendant 48 heures comme décrit dans (section 1.1.2 ci-dessous) «culture». </li><li> Laver les cellules avec du PBS. </li><li> Fixer les cellules avec PFA 4% pendant 15 min à température ambiante. </li><li> Laver les cellules avec du PBS. </li><li> Incuber les cellules avec du PBS / Triton X100 (0,1%) pendant 15 min à température ambiante. </li><li> Laver les cellules avec du PBS. </li><li> Incuber les cellules avec des anticorps primaires (1:200): p75, S100β GFAP et pendant une nuit à 4 ° C. </li><li> Laver les cellules avec du PBS. </li><li> Incuber les cellules avec les anticorps secondaires (1:500) pendant 1 heure à température ambiante dans l&#39;obscurité. </li><li> Laver les cellules avec du PBS. </li><li> Incuber les cellules avec Hoechst 10 min à RT dans l&#39;obscurité. </li><li> Laver les cellules avec du PBS. </li><li> Analyser les cellules en utilisant un microscope à fluorescence. </li></ol></li><li> cellules d&#39;étiquetage de la GFP <ol><li> Cinq jours avant la transplantation, infecter OB et OM cultures pendant la nuit avec un vecteur lentiviral hébergement GFP améliorée (de multiplicité d&#39;infection: 20). </li><li> Avant l&#39;arrivée de la transplantation sur de petits échantillons du taux de cellules GFP-positives par cytométrie de flux comme décrit précédemment dans (section 1.1) &quot;culture&quot;. </li></ol></li></ol> 2. Chirurgie et Transplantation <ol><li> Nerf récurrent anastomose <ol><li> Toutes les expériences sur les animaux doivent être approuvées à l&#39;avance par les soins des animaux et l&#39;utilisation du comité de l&#39;institution et effectuées par du personnel qualifié. </li><li> Avant la chirurgie autoclave tous les instruments et maintenir la stérilité pendant les interventions chirurgicales. </li><li> Anesthésier rat par injection intrapéritonéale de chlorhydrate de kétamine (12,5 mg / kg) et du chlorhydrate de chlorpromazine (0,625 mg / kg). Évaluer l&#39;adéquation de l&#39;anesthésie par pincement de l&#39;orteil avant la chirurgie. </li><li> Placez le rat en décubitus dorsal. </li><li> Effectuer une incision verticale moyenne de 2 cm du col cutanée avec un scalpel. </li><li> Effectuer une incision verticale des muscles sous-hyoïdiens suivant la ligne blanche médiane. </li><li> Exposer larynx à l&#39;aide enrouleur autostatic entre les muscles sous-hyoïdiens. </li><li> Exposer le nerf récurrent. </li><li> Sous contrôle microscopique, couper le nerf pleinement avec microciseaux au niveau de l&#39;anneau trachéal septième. </li><li> Effectuer anastomose en utilisant un point de suture 11.0 sous contrôle microscopique. Cette opération conduit à une dénervation du moteur spécifique du larynx. </li></ol></li><li> Transplantation cellulaire <ol><li> Juste avant la transplantation, éliminer les cellules des plats à base de 0,05% de trypsine EDTA pendant 5 min à 37 ° C. </li><li> Arrêtez digestion enzymatique par addition de 2 ml de milieu chaud. </li><li> Centrifuger à 300 g pendant 3 min. </li><li&gt; Sous un microscope compter les cellules en utilisant un hématimètre et ajuster la concentration cellulaire selon le protocole spécifique. Dans ce modèle, les concentrations désirées sont entre 1,2 à 6 x 10 6 cellules dans 30 ul de DMEM/F12. </li><li> Faire la préparation cellulaire avec 1:02 mélange (30 et 60 pi de cette expérience) de l DMEM/F12-Matrige en tube de 1,5 ml avant la greffe et le placer sur la glace. Pour éviter les effets non spécifiques, utilisez le facteur de croissance réduite Matrigel. </li><li> Juste avant la transplantation maintenir le tube dans votre main pendant quelques secondes pour réchauffer le mélange Matrigel moyen. </li><li> Déposer le mélange sur le site d&#39;anastomose aide d&#39;une pipette et attendre jusqu&#39;à ce que le mélange s&#39;auto-assemble sur le nerf lésé. </li><li> Fermez les muscles et la peau avec une suture 4.0. </li><li> Maison des rats individuellement et garder sous une lampe chauffante pendant 24 heures. </li></ol></li></ol> 3. Évaluation <ol><li> Laryngoscopie <ol><li> Anesthésier les rats par intraperitoneal injection de chlorhydrate de kétamine (12,5 mg / kg) et du chlorhydrate de chlorpromazine (0,625 mg / kg). Confirmez rats sont anesthésiés avec une pincée de pieds avant de procéder avec le protocole. </li><li> Placez le rat en décubitus dorsal. </li><li> Insérez un 30 ° vidéolaryngoscope ajustés pour fournir la meilleure vue du larynx. Déterminer des repères anatomiques de reproduire le même point de vue pour chaque enregistrement. </li><li> Enregistrer les mouvements des cordes vocales à l&#39;aide du vidéolaryngoscope (5-10 séquences / animal). Pour chaque animal, sélectionner trois séquences d&#39;adduction maximale successive et l&#39;enlèvement maximal. </li><li> Analyser la fonction du larynx en utilisant un logiciel d&#39;analyse d&#39;image. Déterminer le mouvement angulaire absolue en mesurant la différence entre le mouvement d&#39;abduction et d&#39;adduction maximale maximale des cordes vocales. Déterminer le score dynamique en mesurant l&#39;amplitude du mouvement. Déterminer score fonctionnel en mesurant la syncinésie et mouvements paradoxaux. </li></ol></li><li> Électromyographie (EMG) <ol><li&gt; Placez une électrode sur les muscles ischio-jambiers de la rat pour l&#39;isolation électrique. </li><li> Exposer larynx et la trachée en ouvrant la peau et les muscles comme décrit précédemment dans &quot;nerf anastomose récurrente» (section 2.1). </li><li> Exposer le cartilage cricothyroïdienne. </li><li> Ouvrez le cartilage cricothyroïdienne pour exposer la cricoarytenoid postérieure (ACP) de muscles en utilisant microciseaux. </li><li> Introduire une aiguille électrode monopolaire (38 x 0,45 mm) dans le muscle de l&#39;APC. </li><li> Enregistrer l&#39;activité musculaire électrique du muscle PCA en utilisant un système d&#39;acquisition lors de la ventilation spontanée. </li><li> Analyser l&#39;activité musculaire en termes de richesse et la synchronisation avec la respiration. Pour analyser EMG, attribuer une note qualitative de 0-3 selon l&#39;échelle suivante: 0: traçage unrhymed, sans augmentation pendant l&#39;inspiration, 1: traçage rimé avec inspiratoire augmenter, mais pauvre traçage (Neurogen), 2: rimée traçage avec une activité plus riche, 3: rimée traçage, très riche, constituant un imotif de nterférences noc, semblable à une activité intentionnelle maximale. </li><li> Exposer le nerf vague pour mesurer la durée de latence et le potentiel. Le nerf vague est choisi comme site de stimulation car NLR peut être endommagé lors de la stimulation en raison de sa petite taille. </li><li> Stimuler le nerf vague avec une électrode. </li><li> Enregistrer des signaux électriques dans le muscle de l&#39;APC. Mesurer la latence et la durée du potentiel. Si possible d&#39;utiliser un module d&#39;acquisition pour enregistrer l&#39;activité musculaire, la latence et la durée du potentiel d&#39;un tel système Powerlab. </li></ol></li><li> Histologie <ol><li> Euthanasier l&#39;animal en utilisant une overdose de pentobarbital. </li><li> Retirez le moignon distal du nerf récurrent sous contrôle microscopique. La partie distale du RLN est définie comme étant la partie entre anastomose et du larynx. A noter qu&#39;il est possible de trouver sur le site d&#39;anastomose plusieurs semaines après la chirurgie parce que la suture est une suture à 11,0 non résorbable. </li><li> Placer la partie distale de RLN en glutaraldéhyde à 2% avec 0,1 M de phosphate(PH = 7,3) pendant 2 h à 4 ° C. </li><li> Orienter soigneusement les échantillons pour réaliser des coupes coronales. </li><li> Laver les échantillons dans un tampon phosphate. </li><li> Couper en segments plus petits (3-4 mm de longueur) et le suffixe pendant 60 min à température ambiante dans 1% en tampon cacodylate OsO 4 et déshydraté avec de l&#39;éthanol. </li><li> Orienter les échantillons dans des moules silicones et incorporé dans les résines consistant en POLYBED 812, DDSA et MNA, auquel on a ajouté 2% de l&#39;accélérateur BDMA. </li><li> Faire sections transversales semi-fines (1 um d&#39;épaisseur) en utilisant un système Ultramicrotomie Pyramitome. </li><li> Colorer avec 0,1% de bleu de toluidine dans le tétraborate de sodium à 1% pour 75 sec à 70 ° C. </li><li> Analyser les échantillons RLN avec un système d&#39;analyse de comptage. Compter le nombre de fibres et de mesurer les profils des fibres nerveuses myélinisées par la détermination de la limite extérieure et intérieure de la gaine de myéline. </li></ol></li><li> Transplantation <ol><li> Préparer les cellules pour la transplantation et transplanter les cellules comme décrit précédemmentdans la «transplantation cellulaire&quot; (section 2.2). </li><li> Analyse </li><li> Euthanasier l&#39;animal en utilisant une overdose de pentobarbital. A noter que la fixation des animaux peut être réalisée en utilisant une injection intracardiaque de PFA à 4%. </li><li> Retirez environ 2 cm de NLR. Utilisez parties proximale et distale du nerf récurrent. </li><li> Fixer échantillon de NLR dans l&#39;azote liquide. </li><li> Conserver les échantillons à -80 ° C. </li><li> Couper les échantillons à l&#39;aide longitudinalement cryostat (10-20 um d&#39;épaisseur). </li><li> Analyser des échantillons sous microscope à fluorescence pour détecter les cellules GFP-positives. A noter que l&#39;anticorps anti-GFP peut être utilisée pour augmenter l&#39;émission de fluorescence et d&#39;effectuer costainings. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Barraud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+olfactory+ensheathing+glia.">Neural crest origin of olfactory ensheathing glia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+gene+expression+profiling+of+olfactory+ensheathing+cells+from+olfactory+bulb+and+olfactory+mucosa.">Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa.</a> Glia. 58, 1570-1580 (1002).</li><li>Honore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+genetic+profiling+of+subpopulations+of+olfactory+ensheathing+cells+from+the+olfactory+bulb.">Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb.</a> Glia. 60, 404-413 (2012).</li><li>Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+glia:+their+contribution+to+primary+olfactory+nervous+system+regeneration+and+their+regenerative+potential+following+transplantation+into+the+injured+spinal+cord.">Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.</a> Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+olfactory+ensheathing+cells+express+nerve+growth+factor,+brain-derived+neurotrophic+factor,+glia+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+their+receptors.">Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).</li><li>Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+nodal+formation+of+regenerated+peripheral+nerve+fibers+following+transplantation+of+acutely+prepared+olfactory+ensheathing+cells.">Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells.</a> Brain Res. 1125, 1-8 (2006).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+promotes+axonal+regeneration+and+functional+recovery+of+peripheral+nerve+lesion+in+rats.">Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats.</a> Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).</li><li>Guntinas-Lichius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+stimulates+the+collateral+sprouting+from+axotomized+adult+rat+facial+motoneurons.">Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons.</a> Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).</li><li>Makoukji, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+enhances+remyelination+of+peripheral+nerves.">Lithium enhances remyelination of peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+mucosa+and+bulb+origin+enhances+functional+recovery+after+peripheral+nerve+lesion.">Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion.</a> PloS one. 6, 22816 (2011).</li><li>Paviot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+laryngeal+motor+nerve+repair+is+greater+with+bulbar+than+with+mucosal+olfactory+ensheathing+cells.">Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells.</a> Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).</li><li>Girard, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+nasal+olfactory+stem+cells+from+rodents+or+humans.">Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+purification+for+establishing+primary+cultures+of+ensheathing+cells+from+the+adult+olfactory+bulb.">New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb.</a> Glia. 34, 81-87 (2001).</li><li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose.">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li><li>Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Although+olfactory+ensheathing+cells+have+remarkable+potential+to+sustain+nerve+regeneration,+they+cannot+be+applied+to+a+severe+vagus+nerve+section/resection+model.">Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model.</a> Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Les techniques présentées ici font OECs un modèle utile pour étudier les transplantations cellulaires dans les modèles de lésion nerveuse périphérique. Le protocole de culture de cellules est relativement simple et peut être facilement effectuée. D&#39;autre part, les interventions chirurgicales, en particulier l&#39;article / anastomose du nerf récurrent, exigent de l&#39;expérience et doivent être effectuées par du personnel qualifié. Les procédures décrites dans ce protoc...

Le système olfactif principal est composé de deux parties distinctes, la muqueuse olfactive (OM) dans le système nerveux périphérique et le bulbe olfactif (OB) dans le système nerveux central. Le système olfactif primaire est caractérisée par la capacité des neurones olfactifs primaires (PON) afin de s&#39;auto-renouveler tout au long de la vie chez les espèces de mammifères. Cette capacité est rendue possible en raison de la présence de cellules souches neurales dans l&#39;OM. Croissance PON et la repousse de l&#39;OM à OB est facilitée par les cellules gliales spécialisées appelées cellules olfactives engainantes (OECO). OEC sont des cellules de la crête neurale qui créent un micro-environnement favorable pour la neurogenèse du PON de l&#39;OM à OB 1. Ainsi, OEC peut être trouvée dans l&#39;OM et dans l&#39;OB constituant différentes sous-populations de cellules 2,3. Les différentes propriétés de l&#39;OECO ont principaux scientifiques de les utiliser pour des transplantations cellulaires dans plusieurs paradigmes de lésions du système nerveux 4. En effet, l&#39;OECO facteurs de croissance des produits, de réduire les effrayer gliale, prrepousse axonale omote, et peut librement mêler aux astrocytes 5,6. Cependant, la grande majorité de ces études sont basées sur les lésions de la moelle épinière (SCI); quelques-uns d&#39;entre eux ont utilisé OEC après une lésion nerveuse périphérique (PNI) 7,8. Bien que le système nerveux périphérique a une grande capacité à se régénérer après une lésion nerveuse, remplissez les sections induire aberrante axonale repousse. En effet, après transections complets du visage ou les nerfs récurrents (NLR) des axones mal acheminées provoquent des co-contractions musculaires appelées syncinésie. Par conséquent, il est primordial de proposer un modèle de PNI pour quantifier non seulement repousse axonale, mais aussi d&#39;évaluer l&#39;efficacité des contractions musculaires. Dans la littérature le modèle le plus commun décrit est basé sur une lésion du nerf facial 9,10. Dans ce modèle, les évaluations fonctionnelles sont basés sur la récupération des mouvements moustaches 10. Il est cependant compliqué à démontrer l&#39;efficacité de la movNTS et de discriminer les co-contractions musculaires phénomènes. Nous vous proposons ici un modèle basé sur une lésion du NLR. Ce modèle permet l&#39;évaluation de la repousse et non seulement les mouvements des cordes vocales axonale mais également l&#39;efficacité et la fonctionnalité de ces mouvements après des transplantations cellulaires 11,12. Ce protocole prévoit une procédure étape par étape à la culture et à la transplantation OEC de l&#39;OM et OB dans un modèle de section NLR / anastomose et à évaluer les animaux après la chirurgie.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">E3521T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>E3387M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicilin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1152-8876</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3467Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3513P</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.03256.0100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DDSA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00563-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MNA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00886-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BDMA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00141-100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">POLYBED 812</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>08791-500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE anti-mouse&#160;</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>550589</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel GFR</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>356231</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10103586001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti P75</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB 365</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">11.0 Wire</td>
			<td>Ethicon&#160;</td>
			<td>FG 2881</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Toluidine Blue&#160;</td>
			<td>RAL DIAGNOSTICS</td>
			<td>361590-0025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Sigma 2-16PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td>Faster</td>
			<td style="width:197px;">BH-EN 2003 S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>FACSCalibur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Videolaryngoscope</td>
			<td>Karl Storz Endoskope</td>
			<td>Telecam SL NLSC 20212120</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>Powerlab system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyramitome Ultramicrotomy System&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Leica</td>
			<td>Ultracut S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image analysis system</td>
			<td>Explora Nova</td>
			<td>Mercator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury

<html> Cellules olfactives engainantes (OECO) sont des cellules de la crête neurale qui permettent la croissance et la repousse des neurones olfactifs primaires. En effet, le système olfactif principal est caractérisée par son aptitude à donner naissance à de nouveaux neurones, même chez les animaux adultes. Cette aptitude particulière est due en partie à la présence de OECs qui crée un micro-environnement favorable pour la neurogenèse. Cette propriété de COE a été utilisé pour la transplantation cellulaire comme dans les modèles de lésion de la moelle épinière. Bien que le système nerveux périphérique a une plus grande capacité à se régénérer après une lésion nerveuse que le système nerveux central, des sections complètes induire misrouting pendant repousse axonale en particulier après le visage de la section du nerf laryngé. Plus précisément, plein sectionnement du nerf laryngé récurrent (NLR) induit repousse axonale aberrante résultant en syncinésie des cordes vocales. Dans ce modèle spécifique, nous avons montré que la transplantation COE augmente efficacement axonale repousse. ve_content &quot;&gt; OEC sont constituées de plusieurs sous-populations présentes à la fois dans la muqueuse olfactive (OM-OEC) et les bulbes olfactifs (OB-OECO). Nous présentons ici un modèle de transplantation cellulaire basé sur l&#39;utilisation de ces différentes sous-populations de COE dans un modèle de lésion du NLR. L&#39;utilisation de ce paradigme, des cultures primaires de OB-OEC et OM-OEC ont été transplantés dans Matrigel après l&#39;article et l&#39;anastomose du nerf récurrent. Deux mois après la chirurgie, nous avons évalué les animaux transplantés par des analyses complémentaires sur la base de videolaryngoscopy, électromyographie (EMG) , et des études histologiques. d&#39;abord, videolaryngoscopy nous a permis d&#39;évaluer les fonctions du larynx, en particulier des co-contractions musculaires phénomènes. Ensuite, EMG analyse richesse démontrée et la synchronisation des activités musculaires. Enfin, des études histologiques sur la base de toluidine coloration au bleu de permis de quantifier le nombre et le profil des fibres myélinisées. Tous ensemble, nous décrivons ici comment isoler, de la culture, identifier et transplantation OEC de l&#39;OM et OB après NLR section-anastomose et la façon d&#39;évaluer et d&#39;analyser l&#39;efficacité de ces cellules transplantées sur les fonctions de repousse axonale et du larynx.

Illustrations avec contrôle et (section / anastomosés) animaux réinnervé ont été choisis comme les résultats peuvent varier en fonction des transplantations cellulaires effectuées (OM, OB ou OM + OB). La culture cellulaire Les cellules adhèrent rapidement à la surface de matière plastique et sont devenus distincts en andains parallèles de cellules qui sont de forme allongée ou conique, triangulaire, multipolaire, ou en forme de fuseau (figures 1A e...

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Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Cellules olfactives engainantes (OECO) sont des cellules de la crête neurale qui permettent la croissance des neurones olfactifs primaires. Cette propriété spécifique peut être utilisé pour la transplantation cellulaire. Nous présentons ici un modèle de transplantation cellulaire basé sur l&#39;utilisation de la COE dans un modèle de lésion du nerf laryngé.

La transplantation de cellules olfactives engainantes à évaluer la récupération fonctionnelle après des nerfs périphériques blessures

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.7K vues.  University of Rouen.  Cellules olfactives engainantes (OECO) sont des cellules de la crête neurale qui permettent la croissance des neurones olfactifs primaires. Cette propriété spécifique peut être utilisé pour la transplantation cellulaire. Nous présentons ici un modèle de transplantation cellulaire basé sur l'utilisation de la COE dans un modèle de lésion du nerf laryngé. 

Vidéo: Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible vision loss. Examples of such diseases in human include traumatic optic neuropathy and optic nerve degeneration in glaucoma. It is characterized by typical changes in the optic nerve head, progressive optic nerve degeneration, and loss of retinal ganglion cells, if uncontrolled, leading to vision loss and blindness.
The optic nerve crush (ONC) injury mouse model is an important experimental disease model for traumatic optic neuropathy, glaucoma, etc. In this model, the crush injury to the optic nerve leads to gradual retinal ganglion cells apoptosis. This disease model can be used to study the general processes and mechanisms of neuronal death and survival, which is essential for the development of therapeutic measures. In addition, pharmacological and molecular approaches can be used in this model to identify and test potential therapeutic reagents to treat different types of optic neuropathy.
Here, we provide a step by step demonstration of (I) Baseline retrograde labeling of retinal ganglion cells (RGCs) at day 1, (II) Optic nerve crush injury at day 4, (III) Harvest the retinae and analyze RGC survival at day 11, and (IV) Representative result.

This protocol shows how to retrogradely label retinal ganglion cells, and how to subsequently make an optic nerve crush injury in order to analyze retinal ganglion cell survival and apoptosis. It is an experimental disease model for different types of optic neuropathy, including glaucoma.

Un modèle Optic Nerve Crush blessures murins pour étudier la rétine de survie des cellules ganglionnaires

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Recherche

Neurosciences

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the study of nerve regeneration and myelination. The glial cells of the peripheral nervous system, Schwann cells (SC), are key facilitators of these processes; it is therefore crucial that the interactions of these cellular components are studied together. Direct contact between DRG neurons and glial cells provides additional stimuli sensed by specific membrane receptors, further improving the neuronal response. SC release growth factors and proteins in the culture medium, which enhance neuron survival and stimulate neurite sprouting and extension. However, SC require long proliferation time to be used for tissue engineering applications and the sacrifice of an healthy nerve for their sourcing. Adipose-derived stem cells (ASC) differentiated into SC phenotype are a valid alternative to SC for the set-up of a co-culture model with DRG neurons to study nerve regeneration. The present work presents a detailed and reproducible step-by-step protocol to harvest both DRG neurons and ASC from adult rats; to differentiate ASC towards a SC phenotype; and combines the two cell types in a direct co-culture system to investigate the interplay between neurons and SC in the peripheral nervous system. This tool has great potential in the optimization of tissue-engineered constructs for peripheral nerve repair.

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) are structures containing the sensory neurons of the peripheral nervous system. When dissociated, they can be co-cultured with SC-like adipose-derived stem cells (ASC), providing a valuable model to study in vitro nerve regeneration and myelination, mimicking the in vivo environment at the injury site.

Les ganglions rachidiens neurones et les cellules souches différenciées dérivées de tissu adipeux: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-culture modèle pour étudier la régénération des nerfs périphériques

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as accessibility to numerous imaging approaches, electrophysiological techniques and behavioral assays. The Xenopus tadpole olfactory system is particularly well suited to investigate the function of synapses established during normal development or reformed after injury. Here, we describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae. We outline a combination of in vivo measurements of presynaptic calcium responses in glomeruli of the olfactory bulb with olfactory-guided behavior assays. Methods can be combined with the transection of olfactory nerves to study the rewiring of synaptic connectivity. Experiments are presented using both wild-type and genetically modified animals expressing GFP reporters in central nervous system cells. Application of the approaches described to genetically modified tadpoles can be useful for unraveling the molecular bases that define vertebrate behavior.

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system in vivo. We describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae in normal rearing conditions or after injury.

Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

Un modèle préclinique pour évaluer le rétablissement du cerveau après un AVC aigu chez les rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

Analyse cinématique 3D pour l’évaluation fonctionnelle dans le modèle de rat de la blessure d’écrasement de nerf sciatique

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and motor phenotypes involved in different patterns of neurotrophic factor gene expression and other biological processes, affecting nerve regeneration. The present study has established a protocol to obtain highly purified rat sensory and motor SCs and fibroblasts more rapidly. The ventral root (motor nerve) and the dorsal root (sensory nerve) of neonatal rats (7-days-old) were dissociated and the cells were cultured for 4-5 days, followed by isolation of sensory and motor fibroblasts and SCs by combining differential digestion and differential adherence methods sequentially. The results of immunocytochemistry and flow cytometry analyses showed that the purity of the sensory and motor SCs and fibroblasts were &#62;90%. This protocol can be used to obtain a large number of sensory and motor fibroblasts/SCs more rapidly, contributing to the exploration of sensory and motor nerve regeneration.

Here, we present a method to purify fibroblasts and Schwann cells from sensory and motor nerves in vitro.

Purification des fibroblastes et des cellules de Schwann des nerfs sensoriels et moteurs in vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Livraison intra-artérielle de cellules souches neuronales au cerveau du rat et de la souris : application à l’ischémie cérébrale

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Automated Gait Analysis to Assess Functional Recovery in Rodents with Peripheral Nerve or Spinal Cord Contusion Injury

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and a lot of comparative data has been published in the literature. This includes a multitude of assessment methods to study functional recovery following nerve injury and repair. Besides evaluation of nerve regeneration by means of histology, electrophysiology, and other in vivo and in vitro assessment techniques, functional recovery is the most important criterion to determine the degree of neural regeneration. Automated gait analysis allows recording of a vast quantity of gait-related parameters such as Paw Print Area and Paw Swing Speed as well as measures of inter-limb coordination. Additionally, the method provides digital data of the rats&#8217; paws after neuronal damage and during nerve regeneration, adding to our understanding of how peripheral and central nervous injuries affect their locomotor behavior. Besides the predominantly used sciatic nerve injury model, other models of peripheral nerve injury such as the femoral nerve can be studied by means of this method. In addition to injuries of the peripheral nervous systems, lesions of the central nervous system, e.g., spinal cord contusion can be evaluated. Valid and reproducible data assessment is strongly dependent on meticulous adjustment of the hard- and software settings prior to data acquisition. Additionally, proper training of the experimental animals is of crucial importance. This work aims to illustrate the use of computerized automated gait analysis to assess functional recovery in different animal models of peripheral nerve injury as well as spinal cord contusion injury. It also emphasizes the method&#8217;s limitations, e.g., evaluation of nerve regeneration in rats with sciatic nerve neurotmesis due to limited functional recovery. Therefore, this protocol is thought to help researchers interested in peripheral and central nervous injuries to assess functional recovery in rodent models.

Automated gait analysis is a feasible tool to evaluate functional recovery in rodent models of peripheral nerve injury and spinal cord contusion injury. While it requires only one setup to assess locomotor function in various experimental models, meticulous hard- and soft-ware adjustment and training of the animals is highly important.

Analyse automatisée de la démarche pour évaluer la récupération fonctionnelle chez les rongeurs ayant des lésions périphériques du nerf ou de la contusion de la moelle épinière

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and ...

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory bulb. Throughout adult life, they are key for axonal growing of newly generated olfactory neurons, from the lamina propria to the ONL. Due to their pro-regenerative properties, these cells have been used to foster axonal regeneration in spinal cord or optic nerve injury models.
We present an in vitro model to assay and measure OEG neuroregenerative capacity after neural injury. In this model, reversibly immortalized human OEG (ihOEG) is cultured as a monolayer, retinas are extracted from adult rats and retinal ganglion neurons (RGN) are cocultured onto the OEG monolayer. After 96 h, axonal and somatodendritic markers in RGNs are analyzed by immunofluorescence and the number of RGNs with axon and the mean axonal length/neuron are quantified.
This protocol has the advantage over other in vitro assays that rely on embryonic or postnatal neurons, that it evaluates OEG neuroregenerative properties in adult tissue. Also, it is not only useful for assessing the neuroregenerative potential of ihOEG but can be extended to different sources of OEG or other glial cells.

We present an in vitro model to assess olfactory ensheathing glia (OEG) neuroregenerative capacity, after neural injury. It is based on a coculture of axotomized adult retinal ganglion neurons (RGN) on OEG monolayers and subsequent study of axonal regeneration, by analyzing RGN axonal and somatodendritic markers.

Coculture de neurones rétiniens axotomisés de ganglion de rat avec glia ensheathing olfactif, comme modèle in vitro de régénération axonale adulte

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask gait analysis consisted of a single walking task (Task 0), a simple motor dual-task (water-holding, Task 1), and a complex motor dual-task (crossing obstacles, Task 2). The task of crossing obstacles was considered to be equivalent to the combination of a simple walking task and a complex motor task as it involved more nervous system, skeletal movement, and cognitive resources. To eliminate heterogeneity in the results of the gait analysis of the stroke patients, the dual-task gait cost values were calculated for various kinematic parameters. The major differences were observed in the proximal joint angles, especially in the angles of the trunk, pelvis, and hip joints, which were significantly larger in the dual motor tasks than in the single walking task. This research protocol aims to provide a basis for the clinical diagnosis of gait function and an in-depth study of motor control in stroke patients with motor control deficits through the analyses of dual-motor walking tasks.

This paper presents a protocol specifically for dual motor task gait analysis in stroke patients with motor control deficits.

Double tâche motrice pour l’analyse et l’évaluation de la marche chez les patients post-AVC

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...