Ce protocole fournit une blessure précise et chirurgicalement contrôlée pour induire une transection complète de moelle épinière chez les souris avec une reproductibilité élevée et des taux de survie très élevés. L’utilisation d’une perceuse fine pour les lésions osseuses minimise les dommages aux tissus environnants, ce qui permet de modéliser les blessures et les réponses au traitement avec plus de précision. Pour effectuer une laminectomie, après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de pédale dans une souris femelle C57 noire 6 de huit à dix semaines anesthésiée, rasez la fourrure arrière pour exposer la zone chirurgicale au-dessus de la colonne vertébrale dorsale et stérilisez la zone rasée avec des cotons-tiges stériles trempés dans du liquide antiseptique à l’iode povidone et un esprit chirurgical.
À l’aide d’un scalpel, faire une incision verticale à mi-ligne au niveau vertébral T10 et utiliser des forceps droits pour soulever la peau du fascia sous-jacent pour faciliter le placement du rétracteur. Pour exposer les épines du T9 à travers les vertèbres T11, utilisez le bord contondant du scalpel pour faire une petite incision médiane dans le tissu sous-cutané et le fascia sous-jacent et utiliser des forceps fins non tranchants pour émousser la dissect et refléter le fascia. Pour exposer la laminée, utilisez la pointe émoussée du scalpel pour fendre le tronc dorsal et les muscles paraspinous le long des épines du T9 à travers les vertèbres T11 et utilisez les forceps émoussés fine pointe pour émousser disséquer les muscles en couches pour exposer la laminée des vertèbres.
Utilisez les mêmes forceps pour faire de petites poches autour des processus transversaux de la vertèbre T10 et accrocher les dents des forceps incurvés sous les processus transversaux dans les poches créées pour stabiliser le corps vertébral T10. Rincez soigneusement la laminae T10 avec de la solution saline chaude et utilisez des cotons-tiges pour essuyer doucement la surface osseuse propre, en prenant soin qu’aucun attachement musculaire ou ligamentaire ne reste le long de la surface bilatérale. Pour briser le laminae bilatéralement, utilisez un diamètre de 0,55 millimètre, sept millimètres de longueur de perceuse bit pointe pour tracer une trajectoire verticale de l’espace intervertébral T9/T10 à l’espace intervertébral T10/T11 le long des deux laminae T10 avec la foreuse au large.
Lorsque le chemin a été tracé, allumez la foreuse et faites lentement et soigneusement une tranchée verticale sur le lamina droit de la vertèbre T10, en utilisant les forceps incurvés pour maintenir la vertèbre stable. Après avoir répété le processus sur le côté gauche du lamina, irriguer le tissu avec salin chaud pour laver tous les fragments d’os restants. Maintenir une bonne adhérence sur la colonne vertébrale d’une main est essentiel pour cette étape.
Il est également important de devenir à l’aise et confiant avec l’utilisation de la perceuse. Ensuite, utilisez les forceps à pointe fine inclinée pour saisir le processus épineux et enlever tout le segment dorsal de la laminée séparée par le forage bilatéral. Ensuite, irriguer et écouvillonner au besoin pour permettre une visualisation claire de la moelle épinière dans la fenêtre laminectomie.
Pour induire les lésions de la moelle épinière dans la moelle épinière exposée, utilisez une lame étroite et ronde tranchante pour trancher la corde au centre de la fenêtre de laminectomie, en prenant soin de balayer les cavités latérales de la colonne vertébrale pour induire une lésion complète de transection. Pour confirmer l’exhaustivité de la blessure par transection, utilisez les forceps d’extrémité fine émoussés pour enlever les connexions restantes au site de transection. Une fois que l’hémostase a été atteinte au site de transection, relâchez l’adhérence du forcep incurvé sur la vertèbre T10 et rassemblez les bords des muscles disséqués le long de la ligne médiane pour obtenir une bonne apposition.
En utilisant 5/0 polyglactine 910 sutures absorbables, suture des muscles en couches, en s’assurant que la courbure naturelle de la colonne vertébrale ne provoque aucune tension à la ligne de suture ou d’ouvrir les sutures. Ensuite, utilisez 5/0 sutures de soie non absorbables pour fermer le tissu sous-cutané et la peau, en prenant soin qu’il n’y a pas de saignement, caillots, ou des débris restant sous la peau avant la fermeture. Pour évaluer si cette méthode pour induire des lésions de la moelle épinière de type transection chez la souris est reproductible et cohérente, la moelle épinière blessée peut être analysée par immunohistochimie et des tests comportementaux peuvent être effectués sur les souris.
L’immuno-étiquetage contre le marqueur d’astrocyte, protéine acide fibrillaire gliale, facilite la démarcation de la limite de la moelle épinière intacte. Dans cette section longitudinale, le site de blessure situé peut être visualisé entre les souches du cordon comme prévu. Un défaut de taille uniforme peut être induit au site de transection avec une distance minimale moyenne de 550,4, plus ou moins 17,3 micromètres.
Les données comportementales déployant l’échelle de souris Basso d’un essai en plein champ montrent que les souris blessées ne présentent aucun mouvement de membre postérieur après la blessure. Ainsi, le protocole produit une blessure complète et fiable de type transection qui se traduit par une perte complète de la fonction en dessous du niveau de blessure qui ne conduit pas à l’inversion spontanée de la paralysie. Prenez soin de percer en ligne droite avec une main stable, car il peut être très difficile de réparer la fenêtre laminectomie une fois qu’elle a été forée de façon incorrecte.
Après l’induction des lésions médullaires, diverses options de traitement peuvent être appliquées, y compris l’administration de médicaments et la transplantation cellulaire pour identifier les thérapies potentielles qui améliorent le rétablissement des lésions médullaires.
