Le protocole décrit une méthode pour générer un modèle murin orthotopique du cancer du pancréas en utilisant un système qui combine l’injection de cellules et l’évaluation de la greffe et du développement des tumeurs. Cette technique a une grande reproductibilité, est peu invasive, permet de surmonter de nombreux inconvénients causés par l’intervention chirurgicale et respecte les principes des 3R. L’injection échoguidée pourrait être utilisée pour d’autres modèles orthotopiques, tels que les injections dans l’arbre biliaire ou les modèles de cancer du sein.
L’utilisation d’une telle technique pourrait être couplée à l’utilisation de petites molécules. Commencez à préparer une souris femelle athymique Nude-Foxn-1nu âgée de 8 semaines pour une injection guidée par ultrasons en administrant du tramadol par voie intrapéritonéale à une dose de 5 milligrammes par kilogramme à l’aide d’une seringue à tuberculine avec une aiguille de calibre 27. Ensuite, allumez l’imageur et sélectionnez Souris, Petite, Abdominale » dans le menu de l’application du panneau du transducteur.
Assurez-vous que la fenêtre d’imagerie Mode B, ou Mode luminosité, s’affiche et que le système est prêt à acquérir des données en mode B. Accédez à la Banque d’études pour sélectionner Nouvelle étude » et tapez le nom et les informations de l’étude, telles que la date de l’étude. Ensuite, remplissez toutes les informations nécessaires dans le nom de la série, comme la souche animale, l’ID, la date de naissance.
Une fois les informations saisies, appuyez sur Terminé pour préparer le programme à l’imagerie en mode B. Placez la souris anesthésiée sur son flanc droit sur la table de manipulation chauffée à 37 degrés Celsius avec son museau dans un cône nasal et appliquez une goutte de pommade vétérinaire sur les yeux de la souris. Ensuite, utilisez une gaze adhésive pour coller la main droite, le pied droit et la queue de la souris sur les électrodes de la plate-forme animale.
Le rythme respiratoire et l’électrocardiogramme de la souris sont enregistrés à travers les électrodes. Avant d’injecter à la souris des cellules PANC1, désinfectez la peau de la souris avec de l’éthanol à 70% et maintenez la peau du flanc gauche étirée à l’aide de gaze adhésive. Utilisez une seringue de 20 millilitres sans l’aiguille pour appliquer le gel à ultrasons sur l’abdomen et le flanc gauche de la souris.
À l’aide du bouton de contrôle de la hauteur du transducteur à ultrasons, abaissez le transducteur pour toucher le flanc gauche de la souris et placez le transducteur transversalement sur le corps de l’animal. Ensuite, déplacez le transducteur pour visualiser le pancréas sur l’écran du transducteur à l’aide de l’imagerie en mode B. Préparez une seringue Hamilton de 50 microlitres, contenant 10 millions de cellules PANC1 en suspension dans 20 microlitres de PBS avec une aiguille désinfectée de calibre 28 de 30 millimètres et placez la seringue sur le support approprié.
À l’aide du micromanipulateur porteur, abaissez la seringue sur la peau de la souris, avec le biseau de l’aiguille vers le haut et dans le même plan que le transducteur à ultrasons, formant un angle de 45 degrés avec le transducteur. Perforez la peau avec le micromanipulateur et insérez l’aiguille de la seringue dans le pancréas tout en observant l’image échographique affichée pour suivre la trajectoire. Une fois l’aiguille insérée dans le pancréas, injectez un bolus de 20 microlitres contenant les cellules en appliquant une pression constante sur le piston de la seringue.
La procédure d’injection correcte peut être vérifiée par la présence d’une petite bulle dans le pancréas et l’écoulement du liquide hypoéchogénique. Après 5 à 10 secondes de l’injection, rétractez l’aiguille. Ensuite, retirez le transducteur à ultrasons et nettoyez le gel du flanc.
Lorsque cela est fait, placez la souris seule dans une nouvelle cage sous observation jusqu’à ce qu’elle ait repris suffisamment conscience pour maintenir une position couchée sternale. L’image représentative montre la présence d’une masse tumorale dans la queue du pancréas après injection cellulaire écho-guidée, confirmant la reproductibilité du protocole. Le volume tumoral des tumeurs pancréatiques orthotopiques dérivées des cellules PANC1 a été évalué par imagerie échographique une fois par semaine, à partir du jour 8 après l’injection cellulaire.
À la fin de l’expérience, le jour 43, des images échographiques des masses tumorales ont été acquises. Lors de l’examen de nécropsie, la masse tumorale, une petite partie d’un pancréas, d’une rate, d’un estomac et d’un foie sains ont été observés. De plus, les masses tumorales ont été explantées pour l’analyse histologique.
Il est important de positionner la souris sur son côté droit sur la table, et la peau doit être correctement étirée pour éviter le risque que les cellules ne débordent du pancréas. Les applications futures du modèle de cancer du pancréas obtenu par l’injection guidée par ultrasons comprennent les études visant à développer des traitements thérapeutiques appropriés ou des combinaisons de traitements.
