Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine du cancer sur la façon dont le microenvironnement soutient la croissance tumorale ou si un médicament spécifique peut effectivement inhiber la progression du cancer du sein. Les principaux avantages de la technique d’induction tumorale sont qu’aucune chirurgie n’est nécessaire et c’est une manière moins invasive d’établir le cancer du sein in situ. En utilisant cette technique, les cellules tumorales se développent dans le coussin adipeux mammaire, dans l’environnement tissulaire approprié, imitant la progression du cancer du sein humain plus étroitement que l’injection sous-cutanée ou la xénogreffe aux cellules de souris.
Ke-Xin Cao, notre technicien, et moi-même, aiderons Gan-Lin Zhang à démontrer cette procédure. La veille de l’opération, retenez manuellement la souris destinataire et tournez le côté ventre animal jusqu’à la fourrure pour qu’elle soit rasée autour des quatrièmes mamelons. Essuyer la fourrure avec une fine couche de crème depilatory.
Utilisez de l’eau distillée pour enlever la crème après 30 à 60 secondes et séchez la souris avec des serviettes en papier souple. Le jour de l’opération, diluer la suspension cellulaire du cancer du sein murine à deux fois dix à la cinquième cellule par millilitre de concentration de PBS, dans un tube stérile de microcentrifugeuse sur la glace. Avant chaque injection, chargez une seringue d’un millilitre munie d’une aiguille de 45 x 16, avec 50 microlitres de cellules par souris.
Et confirmer un manque de réponse au pincement des pieds chez chaque animal sous sedated. Appliquer de la pommade sur les yeux de l’animal et utiliser des pinces à épiler pour tenter la peau autour du quatrième mamelon de la première souris, pour créer un tunnel pour la seringue à suivre. Tenez la seringue avec le biseau orienté vers le haut et entrez sous-cutanéement dans la peau à cinq à 10 millimètres du mamelon, en suivant le tunnel jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille atteigne presque le mamelon.
À l’aide d’une pince à épiler pour tenter la peau autour du premier mamelon crée un tunnel pour la seringue à suivre. L’aiguille doit être entrée entre les pointes de la pince à épiler et doit se soulever au lieu de déprimer dans le tissu. Déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans la garniture mammaire de graisse jusqu’à ce que le biseau soit sous le mamelon, et relâchez la tente de peau pour permettre une injection lente des cellules cancéreuses.
Lors de l’insertion, déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans la garniture de graisse mammaire jusqu’à ce que le biseau soit sous le mamelon. Et vous sentirez la résistance pour assurer la livraison des cellules à l’endroit correct. Lorsque toutes les cellules ont été injectées, tournez légèrement l’aiguille sur le côté et rétractez la seringue lentement.
Utilisez un coton-tige pour appliquer une pression sur la plaie de l’aiguille pendant 10 à 20 secondes, pour faire en sorte qu’il n’y ait pas d’infiltration de liquide. Le mamelon injecté doit apparaître comme une sphère transparente, blanche, plate, avec le mamelon au centre. Pour établir le volume de tumeur, retenez le côté ventre de souris vers le haut et utilisez un étrier pour mesurer la longueur et la largeur de tumeur.
Pour capturer la bioluminescence tumorale, 10 minutes avant l’imagerie injecter 150 milligrammes par kilogramme de D-luciferin dans l’arrière du cou de la souris. Et capturer des images de bioluminescence de la tumeur primaire et des métastases sous les paramètres appropriés d’imagerie de bioluminescence. Au moment expérimental approprié, utilisez des ciseaux pour récolter la tumeur de la peau.
Et appliquer les solutions analgésiques sur le site chirurgical pour soulager la douleur postopératoire. Ensuite, fermez la peau avec des sutures chirurgicales selon les protocoles standard. Permettre à l’animal de récupérer sous une lampe chauffante avec surveillance jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement.
Utilisez un scalpel pour couper la tumeur primaire en deux morceaux égaux. Stockez la moitié du tissu dans 4% de paraformaldéhyde pour la coloration et l’immunohistochimie ultérieures d’hématoxyline et d’éosine. Congeler l’autre moitié dans de l’azote liquide pour l’isolement des ballonnements occidentaux ou des ARN.
Au point de terminaison expérimental approprié, récolter les poumons selon les protocoles de dissection standard et laver l’organe dans PBS. Puis fixer les poumons dans 4% paraformaldéhyde pour vérifier la métastase par hématoxyline et coloration de l’éosine. La croissance primaire de tumeur peut être mesurée par le volume de tumeur et la bioluminescence vivante de cellules de tumeur, comme démontré.
Des métastases ne sont pas observées pendant les étapes tôt de l’inoculation car aucune tumeur secondaire n’a été établie, ou les signaux bioluminescents forts de la tumeur primaire obstruent la détection de petits foyers métastatiques avec des signaux faibles. Après résection, le signal de bioluminescence des foyers métastatiques des organes éloignés peut être détecté et analysé. L’analyse de la morphologie des sections primaires de tumeur de sein et de poumon par l’hématoxyline et la coloration d’éosine indique l’angiogenèse accrue dans les animaux inoculés de cellules de tumeur comme démontré par la coloration de marqueur de microvessel anti-CD31.
Lorsque vous essayez cette procédure, il est important de se rappeler de s’assurer que la pointe de l’aiguille est au bon endroit avant de livrer les cellules tumorales. Après cette procédure, atomiseurs, comme l’échographie animale, peuvent être effectués pour répondre à des questions supplémentaires sur la supplémentation de la vessie de la tumeur primaire in vivo. Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans le domaine de la tumorigène et le développement de médicaments dans l’exploration des facteurs clés et des voies impliquées dans tumorigenesis et les mécanismes de médicament anticancéreuse dans les modèles animaux murins.
N’oubliez pas que le travail avec l’isoflurane ou une autre anesthésie au gaz peut être extrêmement difficile à doser et que des précautions telles que l’utilisation d’un masque en carbone activé, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.
