Formulation et caractérisation d’un système de transport de dopamine à base d’exosomes

Les exosomes peuvent réagir aux vésicules sécrétées par une cellule d’une taille comprise entre 14 et 200 nanomètres, et se séparer de la cargaison intracellulaire et de la communication, qui se trouve dans le plus petit sous-groupe de vésicules extracellulaires. Les exosomes, qui se forment à la suite de la différenciation de l’endosome, proviennent de la membrane cellulaire. Les cellules souches peuvent être isolées à partir de différentes sources telles que la moelle osseuse ou les tissus adipeux.

mais les cellules souches séchées des tissus adultes ont un potentiel immunogène plus élevé Inconvénients de la taille des exosomes, on dit qu’ils jouent un rôle important dans la maladie du système nerveux central car ils peuvent passer à travers la barrière hémato-encéphalique. Pour commencer, lavez les cellules souches mésenchymateuses de gelée de Wharton ensemencées avec cinq millilitres de PBS. Ajoutez ensuite cinq millilitres de solution d’EDTA de trypsine avant de placer le flacon dans un incubateur.

Après incubation, prélever les cellules et centrifuger à 1 500 g pendant cinq minutes. Retirez ensuite le surnageant et ajoutez un millilitre de DMEM-F12 contenant 10% FBS dans le tube. Laver les cellules cultivées avec du PBS.

Après le lavage, ajoutez le milieu DMEM-F12 sans sérum aux cellules et placez-le dans l’incubateur. Pour isoler les exosomes, prélever le milieu sans sérum et centrifuger à 300 G à quatre degrés Celsius pendant 10 minutes. Transférez le surnageant dans un autre tube et traitez-le par centrifugation en série à des vitesses plus élevées.

Après la centrifugation finale, retirez lentement le surnageant et dissolvez la pastille dans un millilitre de PBS. Mélanger par vortex et procéder à l’ultracentrifugation à 110 000 G pendant 70 minutes à quatre degrés Celsius. Ajouter trois millilitres de PBS à la suspension d’exosomes prélevée précédemment par ultracentrifugation et stériliser la suspension diluée par filtration à l’aide d’un filtre de 0,22 micron.

Transférez ensuite 500 microlitres de la suspension d’exosomes stérilisée dans un autre tube. Ensuite, séquentiellement, ajoutez 500 microlitres de solution de dopamine à 0,5 milligramme par millilitre et de saponine dans la suspension stérilisée. Après l’incubation, ultracentrifuger la suspension.

L’échantillon peut être utilisé pour l’analyse NTA et DLS afin de caractériser les exosomes chargés en dopamine ou stocké à moins 20 degrés Celsius jusqu’à une utilisation ultérieure. Dans l’analyse NTA, la taille moyenne des exosomes dérivés de la gelée de Wharton a été déterminée à 98 nanomètres et les exosomes chargés en dopamine à 110 nanomètres. Les nombres de nanoparticules révélés par les analyses NTA et DLS étaient cohérents entre eux.

Le potentiel zêta des exosomes dérivés de la gelée de Wharton a été mesuré à moins 15,7 et les exosomes chargés en dopamine à moins 17,6 millivolts. L’analyse HPLC des exosomes chargés en dopamine a détecté le pic de dopamine à 6,45 minutes. Le profil de libération cumulatif du médicament a révélé que 74,8 % de la dopamine encapsulée a été libérée par les exosomes au cours des huit premières heures.

La cytotoxicité des exosomes libres et chargés en dopamine sur les fibroblastes a été étudiée. Bien que les exosomes chargés en dopamine n’aient pas démontré d’effets cytotoxiques, la saponine a diminué la viabilité des fibroblastes. Le test MTT a montré une viabilité cellulaire accrue lorsque les fibroblastes ont été traités avec les exosomes chargés en dopamine.

La signification statistique des résultats a été évaluée en effectuant une anova à un facteur. De plus, les effets cytotoxiques de différentes concentrations d’exosomes libres ont été étudiés sur les fibroblastes. La viabilité des fibroblastes était plus élevée avec des exosomes libres à la concentration de 25 microlitres par millilitre.

Il est très important pour le système nerveux central que la taille des patients joue un rôle dans des processus tels que la plasticité, la réponse neurologique, la communication latérale et la neurogenèse dans le cerveau. De plus, grâce à la surface des exosomes, il a été observé qu’ils peuvent interagir avec le médicament de la cellule cible et l’activité délivrée pendant le médicament est un achèvement. Pour la première fois dans le cadre de l’étude, nous avons mis au point une nouvelle formulation de médicament en encapsulant de la dopamine dans des exosomes dérivés de cellules souches.

Il a suggéré que cette formulation sera très prometteuse pour le traitement de la maladie de Parkinson.