Notre placement de la coiffe vasculaire permet un flux sanguin laminaire et nous utilisons un brassard plus grand pour l’artère pulmonaire du donneur afin d’assurer un retour sanguin suffisant aux receveurs. Ces modifications utilisées dans ce protocole diminuent la probabilité de flux sanguin turbulent et de formation de thrombus et entraînent une amélioration des taux de survie. Cette méthode fournit des informations précieuses pour étudier les réponses immunitaires après la transplantation, telles que les lésions de reperfusion ischémique et le rejet de greffe.
De plus, notre technique permet une surveillance post-transplantation ou une retransplantation plus facile. Le Dr Wen Jun Li, un microchirurgien expert de notre laboratoire qui a développé cette technique, fera la démonstration de cette procédure. Préparez la zone chirurgicale en rasant les cheveux de la poitrine et de l’abdomen à l’aide d’un rasoir électrique.
Administrer 100 unités d’héparine par voie intraveineuse dans la veine pénienne pour les hommes ou la veine jugulaire externe pour les hommes et les femmes. Placez les souris en décubitus dorsal avec les membres antérieurs au-dessus de la tête. Fixez les membres antérieurs et postérieurs avec du ruban chirurgical et désinfectez la peau avec 0,75% d’iode et 70% d’éthanol.
Effectuer une incision pour la laparosternotomie médiane de l’ombilic à l’angle sternal, suivie d’une thoracotomie bilatérale le long de chaque marge costale. Pliez la paroi thoracique antérieure sur le cou pour une exposition complète du médiastin. Extrayez le thymus et exposez la veine cave inférieure intrathoracique.
Pour la perfusion rétrograde, injecter 1,5 millilitre de solution saline de quatre degrés Celsius dans la veine cave inférieure intrathoracique avec l’aiguille orientée vers le greffon. Ligate la veine cave supérieure en utilisant un 8-0 suture de soie et diviser distalement. Répétez la perfusion rétrograde en injectant 1,5 millilitre de solution saline de quatre degrés Celsius par la veine cave inférieure.
Liguer la veine cave inférieure en utilisant un 8-0 suture de soie et diviser distalement. Disséquer l’arc aortique et le tronc de l’artère pulmonaire pour le prélèvement du greffon et transecter les deux distalement. Litruez les veines pulmonaires sur la surface postérieure du cœur à l’aide d’une suture de soie 6-0 et divisez distalement.
Effectuer la préparation de la greffe en retirant le cœur du donneur de la cavité thoracique. Placez le cœur excisé dans un récipient en plastique rempli de solution saline héparinée à quatre degrés Celsius pendant une à deux minutes. Transférer le greffon sur une fiole en plastique stérile remplie de glace pour la mise en place du brassard.
Placez un brassard d’angiocathéter de calibre 20 d’un millimètre de long sur l’artère pulmonaire pour la brassard du donneur. À l’aide d’une pince fine, repliez doucement les bords de l’artère sur le brassard. Fixez le récipient plié au brassard à l’aide d’une attache en nylon 10-0.
Conservez le cœur du donneur dans une solution saline héparinée ou une autre solution de conservation à quatre degrés Celsius. Préparez la zone chirurgicale en rasant les cheveux de la région cervicale à l’aide d’un rasoir électrique. Appliquez une pommade ophtalmique stérile non médicamenteuse sur les yeux pour prévenir le dessèchement de la cornée.
Placez l’animal en décubitus dorsal, les membres antérieurs adjacents au corps et la tête légèrement tournée vers la gauche. Fixez les membres antérieurs et postérieurs avec du ruban chirurgical. Désinfectez la peau avec 0,75% d’iode et 70% d’éthanol.
Après avoir pratiqué une incision cervicale médiane de la mandibule inférieure au sternum, transectez le muscle sternocléidomastoïdien droit. Extrayez le lobe droit de la glande inframandibulaire pour créer de l’espace pour l’implantation du greffon. Attachez un nœud glissant sur la veine jugulaire externe proximale à l’aide d’une suture en soie 6-0.
Liguer la veine jugulaire externe distale et les branches adjacentes à l’aide d’un 8-0 suture de soie. Suture sous la veine et couvrir de gaze. Faites une incision transversale à travers la paroi antérieure de la veine jugulaire externe.
Placez une suture en nylon 10-0 à travers le bord de la veine jugulaire externe proximale et le tissu sous-jacent pour sécuriser la veine pendant l’insertion du brassard. Liguer l’artère carotide commune droite distale à l’aide d’un 8-0 suture de soie juste inférieure à la bifurcation carotidienne. Attachez un nœud glissant sur l’artère carotide commune proximale à l’aide d’une suture de soie 6-0.
Transecter l’artère distalement entre les sutures. Ensuite, placez un brassard d’angiocathéter de calibre 24 de 0,6 millilitre de long sur l’artère carotide commune droite du receveur. À l’aide d’une pince fine, repliez doucement les bords de l’artère sur le brassard.
Fixez le récipient plié au brassard à l’aide d’une attache en nylon 10-0. Placez le cœur du donneur au-dessus de la région cervicale droite. Verser une solution saline froide sur la greffe cardiaque toutes les quelques minutes pendant l’implantation.
Placez une suture en nylon 10-0 à travers le bord de l’aorte donneuse et à travers une morsure superficielle du tissu sous-jacent pour fixer la greffe en place. Rincer l’aorte donneuse avec 0,5 millilitre de solution saline héparinée à 0,9%. Insérez le brassard de l’artère carotide commune du receveur dans l’aorte du donneur.
Sécurisez l’anastomose avec un 8-0 Cravate en soie. Retirez la suture d’ancrage aortique. Désaérez la veine jugulaire externe en rinçant la veine jugulaire externe du receveur avec 0,5 millilitre de solution saline héparinée à 0,9%.
Effectuer une anastomose de l’artère pulmonaire en insérant la coiffe de l’artère pulmonaire donneuse dans la veine jugulaire externe du receveur et sécuriser avec un 8-0 Cravate en soie. Retirez la suture d’ancrage de la veine jugulaire externe et transectez la paroi postérieure restante de la veine jugulaire externe pour libérer le greffon du tissu sous-jacent. Assurez-vous que la greffe est correctement orientée sans pliage ou torsion de l’anastomose.
Relâchez les nœuds glissants sur la veine jugulaire externe du receveur, suivis de l’artère carotide commune pour initier la reperfusion du greffon cardiaque. La technique démontrée dans ce protocole a montré un taux de survie d’environ 97% Cela pourrait potentiellement être attribué au brassard de calibre 20 plus grand placé sur l’artère pulmonaire du donneur pour assurer un retour suffisant du flux sanguin vers le receveur. De plus, l’alignement du flux sanguin avec le placement du brassard dans la technique actuelle minimise le risque de thrombose et de turbulence anastomotique.
La durée moyenne de l’opération du receveur était d’environ 37 minutes avec une durée moyenne d’ischémie froide de 20 minutes. Pour les études de survie, les greffes cardiaques ont été évaluées quotidiennement par visualisation directe et palpation numérique du rythme cardiaque. L’imagerie intravitale à deux photons a été réalisée tôt après la transplantation pour évaluer le trafic des leucocytes.
Il est important de vérifier que le greffon est correctement positionné et orienté avant la fermeture de la peau pour éviter la torsion. Cette méthode peut être utilisée dans les modèles de retransplantation pour identifier les cellules immunitaires résidentes dans les greffons transplantés qui médient les réponses allo-immunes.
