Nous présentons un modèle chirurgical fiable et reproductible de transplantation hétérotopique de membres postérieurs chez le rat. Cette technique est idéale pour les études à court terme sur la préservation ou le rejet immunitaire dans le VCA. La description étape par étape permettra aux stagiaires de maîtriser rapidement la chirurgie.
Pour commencer, faites une incision circonférentielle sur la peau au-dessus de la cheville au tiers distal de la jambe. Squelettiser et cautériser l’artère saphène et la branche terminale de l’artère poplitée à l’aide de pinces bipolaires. Cautériser et couper les muscles gastrocnémiens, soléaires, tibialis antérieurs et biceps fémoraux jusqu’à ce que l’os tibial soit exposé.
Faites une incision de 2,5 centimètres au pli inguinal droit et disséquez le coussinet de graisse inguinale. Utilisez un rétracteur à hameçon pour saisir le ligament inguinal. Tenez le coussinet adipeux inguinal de façon distue avec une pince à pince et rétractez le coussinet adipeux pour exposer les vaisseaux fémoraux.
Disséquez les vaisseaux fémoraux, individualisez les branches de Murphy et ligatez avec des attaches en nylon 8/0. Hépariniser le rat donneur en injectant l’héparine dans la veine dorsale du pénis à l’aide d’une aiguille de calibre 27,5. Complétez l’incision cutanée autour de la hanche.
Utilisez la pince bipolaire pour cautériser les muscles fémoraux du biceps et du fessier superficiel, puis cautériser et couper le nerf sciatique à mi-longueur du fémur. Exposez le fémur par voie proximale au niveau de la crête fémorale postérieure et ligaturez les vaisseaux fémoraux avec des attaches en nylon au niveau du ligament inguinal. Effectuez une artériotomie sur l’artère fémorale juste en dessous de la ligature et dilatez pour insérer l’angiocathéter de calibre 24.
Cautériser et couper le muscle restant sous le pédicule pour exposer la face antérieure du fémur. Utilisez le coupe-os pour couper le tibia par voie proximale et couper le fémur aussi distentairement que possible. Rincer le membre postérieur partiel avec deux millilitres de solution saline d’héparine pour obtenir un écoulement veineux clair.
Placez le membre postérieur sur la glace dans une gaze stérile jusqu’au transfert microvasculaire. Disséquez le coussinet adipeux inguinal et inclinez le coussinet adipeux inguinal distalement pour exposer les vaisseaux fémoraux. Utilisez un crochet pour rétracter le ligament inguinal et une pince de serrage pour maintenir le coussinet de graisse inguinale de manière distue.
Disséquez les vaisseaux fémoraux, individualisez les branches de Murphy et ligatez avec des attaches en nylon comme démontré. Ligaturez les deux vaisseaux au-dessus des vaisseaux épigastriques à l’aide de liens en nylon. Placez les pinces de l’approximateur par voie proximale, dilatez la lentille du vaisseau et rincez avec une solution saline à l’héparine.
Faites une incision sur le flanc gauche au-dessus de la hanche et créez une poche sous-cutanée avec un tunnel sous-cutané jusqu’au pli inguinal. Placez la partie proximale du membre partiel et le coussinet adipeux inguinal à travers le tunnel sous-cutané pour le transfert microvasculaire. Effectuer les anastomoses veineuses et artérielles à l’aide de sutures en nylon.
Retirez les deux pinces d’approximation et observez la revascularisation du membre. Effectuer un test de traite sur les deux vaisseaux pour évaluer la perméabilité de chaque anastomose. Faites une incision cutanée longitudinale sur le côté médial du membre transplanté et insérez le greffon.
Retirez l’excès de peau de la greffe et fermez la plaie avec des sutures séparées et une suture courante à l’aide de sutures résorbables 4/0. Suturer ensemble les coussinets graisseux inguinaux du membre transplanté et du receveur à l’aide de deux sutures résorbables séparées et fermer le pli inguinal après le dernier examen de l’anastomose microvasculaire. L’évolution du modèle hétérotopique des membres postérieurs a été suivie jusqu’à la fin de l’étude.
La repousse des cheveux a été observée au cours de la première semaine postopératoire et la rétraction cutanée est apparue après deux semaines. L’échec de l’allotransplantation composite vascularisée peut survenir au cours de la première semaine postopératoire en raison d’une thrombose microvasculaire. La thrombose veineuse était la cause d’une euthanasie précoce dans 20% des cas, qui se sont tous produits avant le cinquième jour postopératoire.
La peau apparaissait bleue et devenait plus foncée chaque jour. L’automutilation est une préoccupation sérieuse dans les greffes absurdes et survient souvent entre le deuxième et le septième jour postopératoire. S’ils sont limités à moins d’un tiers de la surface du greffon et ne concernent que la peau, le débridement chirurgical et la suture à l’aide de sutures non résorbables peuvent être discutés avec le vétérinaire du personnel.
La prévention de l’automutilation repose sur l’utilisation d’un collier électronique cousu au cou jusqu’au septième jour postopératoire et le nettoyage du sang ou de la croûte sur les plaies chirurgicales de l’animal. L’autophagie sévère de plusieurs couches du greffon conduit à l’euthanasie de l’animal. Les kystes cutanés sont apparus après le 14e jour postopératoire, parfois avec un centre nécrotique cutané avant la fistule.
Il est essentiel de s’assurer que le placement du greffon n’empêchera pas l’animal d’être ambulatoire et que le pédicule n’est pas plié ou serré pendant l’encart du greffon. Notre équipe a effectué des études de préservation dans les membres obtenus avant la transplantation. Les effets de différentes durées d’entreposage frigorifique statique ont été évalués ainsi que différents protocoles de perfusion des membres.
