Ce travail a été soutenu par le Fonds de recherche de l’Université de Liaocheng (318012028) et la Fondation des sciences naturelles de la province du Shandong (ZR2020MC034).

1. Conditions de croissance des plantes et culture d’A. rhizogenes 
<ol><li>Semer NOTE: Des semences de soja sauvage ont été récoltées dans le comté de Yanggu, Liaocheng, Chine; des graines de S. americanum et de la variété locale de citrouille Yinsu ont été achetées sur un marché.<ol><li>Récoltez des graines de soja sauvage, de S. americanum et de la variété locale de citrouille, semez-les dans de la vermiculite à une profondeur de 1 cm et arrosez-les soigneusement. Plantez 20 graines dans des boîtes en plastique de 8 cm x 11 cm x 9 cm. Cultivez les plantes dans une chambre de croissance à 24 ± 2 °C avec un cycle de lumière de 16 h / 8 heures d’obscurité à environ 70% d’humidité relative. REMARQUE : Les couches de graines de soja sauvage doivent être brisées avant le semis. Si la question de recherche porte sur les interactions entre les plantes et les microorganismes, les graines, la vermiculite, les boîtes en plastique et l’eau doivent être stérilisées avant utilisation.</li>
		<li>Activation et culture de A. rhizogenes K599 NOTE: La souche A. rhizogenes K599 avait un vecteur binaire pRed13052 portant un gène rapporteur fluorescent rouge DsRed2.
		<ol><li>Retirer la souche K599 d’A. rhizogenes d’un congélateur à -80 °C et activer la bactérie sur un milieu LB solide (avec 50 mg/L de kanamycine et 50 mg/L de streptomycine) à 28 °C pendant 48 h.</li>
			<li>Prélever un seul clone de la souche K599 et le cultiver dans 1 mL de milieu LB liquide contenant des antibiotiques pendant 12 h.</li>
			<li>Répartir uniformément 500 μL de la suspension bactérienne sur un milieu LB solide contenant des antibiotiques, suivi d’une incubation à 28 °C pendant 24 h.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. Méthode de transformation des racines velues médiée par A. rhizogenes en une étape
<ol><li>Incision de l’hypocotyle<ol><li>Après 7 jours (définissez le semis des graines comme le jour 0), les cotylédons de semis viennent de se déplier (Figure 1A), utilisez un scalpel stérilisé et pointu pour couper environ 0,5 à 1 cm de l’hypocotyle (Figure 1B). Jetez la racine primaire et une partie de l’hypocotyle partiel. REMARQUE: Utilisez le scalpel avec précaution.</li>
	</ol></li>
	<li>Inoculation K599<ol><li>Enduire l’incision hypocotyle de la bactérie K599 (figure 1C).</li>
		<li>Plantez les semis dans de la vermiculite humide (figure 1D).</li>
		<li>Infecter 30 plantes de chaque espèce par transformation racinaire velue médiée par A. rhizogenes. Arrosez chaque plante avec 5 mL de suspension bactérienne K599 remise en suspension (DO600 = 0,5-0,6) dans un milieu basique Gamborg B-5 d’un quart de concentration (0,25x) (figure 1E).</li>
		<li>Couvrir les pots d’un sac en plastique hautement transparent (figure 1F) et les placer dans une chambre de croissance.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Production de racines velues
<ol><li>Cultivez les plantes pendant ~ 12 jours après l’inoculation, de nouvelles racines velues seront induites et générées au site d’incision. Après 15 jours, la longueur des racines velues atteint généralement 2 à 5 cm (Figure 2).</li>
	<li>Pour déterminer si les racines velues produites sont transgéniques, examiner l’expression des gènes rapporteurs dépendant du vecteur transformé dans K599.<ol><li>Détecter l’expression du gène rapporteur DsRed2 à l’aide d’un système d’imagerie par chimiluminescence avec lumière d’excitation verte à 540 nm et émission à 600 nm (Figure 2B, Figure 2D et Figure 2F).</li>
	</ol></li>
</ol>

Méthode de transformation de racines poilues en une étape pour faire progresser la biologie liée aux racines

<ol>
	<li>Chilton, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+rhizogenes+inserts+T-DNA+into+the+genome+of+the+host+plant+root+cells.">Agrobacterium rhizogenes inserts T-DNA into the genome of the host plant root cells.</a> Nature. 295, 432-434 (1982).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fast,+simple,+high+efficient+and+one-step+generation+of+composite+cucumber+plants+with+transgenic+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation.">A fast, simple, high efficient and one-step generation of composite cucumber plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC). 141, 207-216 (2020).</li><li>Du, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeted+mutagenesis+in+soybean+by+TALENs+and+CRISPR/Cas9.">Efficient targeted mutagenesis in soybean by TALENs and CRISPR/Cas9.</a> Journal of Biotechnology. 217, 90-97 (2016).</li><li>Nguyen, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+hairy+root+system+for+validation+of+plant+transformation+vector+and+CRISPR/Cas+construct+activities+in+cucumber+(Cucumis+sativus+L.).">An efficient hairy root system for validation of plant transformation vector and CRISPR/Cas construct activities in cucumber (Cucumis sativus L.).</a> Frontiers in Plant Science. 12, 770062 (2022).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AtGCS+promoter-driven+clustered+regularly+interspaced+short+palindromic+repeats/Cas9+highly+efficiently+generates+homozygous/biallelic+mutations+in+the+transformed+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation.">AtGCS promoter-driven clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 highly efficiently generates homozygous/biallelic mutations in the transformed roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> Frontiers in Plant Science. 13, 952428 (2022).</li><li>Irigoyen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+hairy+roots+enable+high+throughput+identification+of+antimicrobials+against+Candidatus+Liberibacter+spp.">Plant hairy roots enable high throughput identification of antimicrobials against Candidatus Liberibacter spp.</a> Nature Communications. 11 (1), 5802 (2020).</li><li>Plasencia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eucalyptus+hairy+roots,+a+fast,+efficient+and+versatile+tool+to+explore+function+and+expression+of+genes+involved+in+wood+formation.">Eucalyptus hairy roots, a fast, efficient and versatile tool to explore function and expression of genes involved in wood formation.</a> Plant Biotechnology Journal. 14 (6), 1381-1393 (2016).</li><li>Gutierrez-Valdes, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hairy+root+cultures-a+versatile+tool+with+multiple+applications.">Hairy root cultures-a versatile tool with multiple applications.</a> Frontiers in Plant Science. 11, 33 (2020).</li><li>Stougaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+rhizogenes+as+a+vector+for+transforming+higher+plants.+Application+in+Lotus+corniculatus+transformation.">Agrobacterium rhizogenes as a vector for transforming higher plants. Application in Lotus corniculatus transformation.</a> Methods in Molecular Biology. 49, 49-61 (1995).</li><li>Kereszt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation+of+soybean+to+study+root+biology.">Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of soybean to study root biology.</a> Nature Protocols. 2 (4), 948-952 (2007).</li><li>Ho-Pl&#225;garo, T., Huertas, R., Tamayo-Navarrete, M. I., Ocampo, J. A., Garc&#237;a-Garrido, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation+of+tomato+suitable+for+the+study+of+arbuscular+mycorrhizal+symbiosis.">An improved method for Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of tomato suitable for the study of arbuscular mycorrhizal symbiosis.</a> Plant Methods. 14, 34 (2018).</li><li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+phosphatidylserine+synthase+IbPSS1+affords+cellular+Na++homeostasis+and+salt+tolerance+by+activating+plasma+membrane+Na+/H++antiport+activity+in+sweet+potato+roots.">Overexpression of phosphatidylserine synthase IbPSS1 affords cellular Na+ homeostasis and salt tolerance by activating plasma membrane Na+/H+ antiport activity in sweet potato roots.</a> Horticulture Research. 7, 131 (2020).</li><li>Boisson-Dernier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+rhizogenes-transformed+roots+of+Medicago+truncatula+for+the+study+of+nitrogen-fixing+and+endomycorrhizal+symbiotic+associations.">Agrobacterium rhizogenes-transformed roots of Medicago truncatula for the study of nitrogen-fixing and endomycorrhizal symbiotic associations.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions: MPMI. 14 (6), 695-700 (2001).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+generation+of+composite+soybean+plants+with+transgenic+roots+by+Agrobacterium+rhizogenes-mediated+transformation.">One-step generation of composite soybean plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation.</a> BMC Plant Biology. 20 (1), 208 (2020).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthocyanin,+a+novel+and+user-friendly+reporter+for+convenient,+non-destructive,+low+cost,+directly+visual+selection+of+transgenic+hairy+roots+in+the+study+of+rhizobia-legume+symbiosis.">Anthocyanin, a novel and user-friendly reporter for convenient, non-destructive, low cost, directly visual selection of transgenic hairy roots in the study of rhizobia-legume symbiosis.</a> Plant Methods. 16, 94 (2020).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+AtMYB75+as+a+reporter+gene+in+the+study+of+symbiosis+between+tomato+and+Funneliformis+mosseae.">Application of AtMYB75 as a reporter gene in the study of symbiosis between tomato and Funneliformis mosseae.</a> Mycorrhiza. 33 (3), 181-185 (2023).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+set+of+novel+binary+expression+vectors+for+plant+gene+function+analysis+and+genetic+transformation.">Development of a set of novel binary expression vectors for plant gene function analysis and genetic transformation.</a> Frontiers in Plant Science. 13, 1104905 (2023).</li><li>Li, Q. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phytochrome+B+inhibits+darkness-induced+hypocotyl+adventitious+root+formation+by+stabilizing+IAA14+and+suppressing+ARF7+and+ARF19.">Phytochrome B inhibits darkness-induced hypocotyl adventitious root formation by stabilizing IAA14 and suppressing ARF7 and ARF19.</a> The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology. 105 (6), 1689-1702 (2021).</li></ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer.

La méthode à racine velue médiée par A. rhizogenes en une étape est une méthode plus simple et plus efficace pour produire des plantes composites que la méthode d’injection d’hypocotyle. La méthode ARM en une étape améliore considérablement l’efficacité de la transformation des racines velues, raccourcit le temps de production des racines velues, augmente le nombre de racines velues et réduit la quantité de travail impliquée. Le protocole de transformation amélioré est optimal pour les ét...

Agrobacterium rhizogenes est une bactérie du sol à Gram négatif de la famille des Rhizobiaceae. A. rhizogenes peut infecter presque tous les dicotylédones, quelques monocotylédones et les gymnospermes individuels par des plaies, produisant des racines velues chez les plantes infectées. La bactérie porte le plasmide Ri (inducteur racinaire), et l’ADN-T du plasmide Ri porte le gène de synthèse opine et les gènes rol (gènes du locus racinaire). Après que l’ADN-T du plasmide Ri pénètre dans une cellule végétale et est intégré dans un chromosome hôte, l’expression des gènes rol induit la production de racines velues1. Un vecteur d’expression binaire végétale portant un gène cible est transformé en A. rhizogenes, et l’A. rhizogenes transformé est utilisé pour infecter une plante. Les racines transgéniques peuvent être induites dans les plantes infectées, produisant des plantes composites contenant des racines transgéniques et des tiges et bourgeons non transgéniques. Généralement, une plante composite peut être obtenue dans les 14-20 jours. La transformation racinaire poilue médiée par A. rhizogenes n’est généralement pas limitée par le génotype chez les plantes dicotylédones2. Les racines velues produites par les plantes infectées par A. rhizogenes se caractérisent par un taux de croissance rapide, un héritage stable et une utilisation facile. La transformation racinaire velue médiée par A. rhizogenes est actuellement largement utilisée pour étudier la biologie liée aux racines. En outre, la transformation des racines velues peut également être utilisée pour valider et optimiser l’efficacité de l’édition de la cible du système CRISPR / Cas9 3,4,5 et de la localisation subcellulaire des protéines. Par conséquent, la transformation des racines velues est un outil important dans la recherche sur la fonction des gènes des plantes, l’ingénierie métabolique et les interactions entre les racines et les microorganismes de la rhizosphère 6,7,8.
Les plantes composites contenant des racines transgéniques obtenues par transformation de racines velues ont été largement produites chez les plantes dicotylédones, en particulier dans les légumineuses. La méthode traditionnelle d’injection de l’hypocotyle avec A. rhizogenes a été utilisée pour produire Lotus corniculatus9, soja 10, tomate11, patates douces12 et de nombreuses autres plantes 5,8. La méthode d’injection d’hypocotyle est inefficace et est susceptible de causer la mort de plantes hypocotyles jeunes ou minuscules. Par conséquent, la méthode a été améliorée en coupant les racines embryonnaires, en recouvrant l’incision des plantules d’A. rhizogenes, puis en plaçant l’hypocotyle sur un milieu de culture stérile pour la culture enracinaire13. Cependant, ces étapes sont effectuées dans un environnement stérile et les étapes de l’opération sont relativement lourdes. En particulier, les plantes composites résultantes doivent être transplantées, ce qui augmente la quantité de travail. Dans des travaux antérieurs, une transformation racinaire velue en une étape médiée par A. rhizogenes (ARM) a été établie dans le concombre, le soja, Lotus japonicus, Medicago truncatula et la tomate 2,14,15,16,17. La racine primaire et l’hypocotyle partiel ont été enlevés, le site d’incision de l’hypocotyle restant a été recouvert d’A. rhizogenes transformé, et le semis a ensuite été planté dans de la vermiculite humide stérile. Après 12 jours de culture, des racines poilues ont été produites sur le site d’incision. La méthode ARM en une étape est très efficace et nécessite moins de temps pour produire des racines velues. Le repiquage après la formation de racines poilues n’est pas non plus nécessaire. Parce que la contamination microbienne peut être évitée sans transplantation, la méthode ARM en une étape peut être particulièrement utile pour étudier les interactions entre les plantes et les micro-organismes, telles que la fixation symbiotique de l’azote entre les légumineuses et Rhizobia, et les symbioses entre les plantes et les champignons mycorhiziens arbusculaires. Dans cet article, un protocole détaillé de transformation des racines velues médiée par A. rhizogenes en une étape est fourni avec des exemples de plantes composites produites dans le soja sauvage, Solanum americanum et la citrouille. Avec le protocole, les chercheurs peuvent effectuer en douceur la transformation ARM en une étape.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>kanamycin</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>A506636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB medium</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>B540113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic box</td>
			<td>LiaoSu</td>
			<td></td>
			<td>8 cm x 11 cm x 9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pumpkin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>local variety Yinsu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>A610494&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tanon-5200Multi machine</td>
			<td>Tanon Co., Ltd., China</td>
			<td>5200Multi</td>
			<td>chemiluminescence imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tomato</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>local variety Zhongshu4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wild soybean</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>collected in Yanggu County, Liaocheng, China</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an efficient and reproducible method for producing composite plants by agrobacterium rhizogenes-based hairy root transformation

La production de plantes composites avec des racines transgéniques et des tiges et bourgeons non transgéniques en utilisant la transformation racinaire poilue médiée par Agrobacterium rhizogenes est un outil puissant pour étudier la biologie liée aux racines. La transformation des racines velues est établie dans une large gamme de dicotylédons et chez plusieurs espèces de monocotylédones et est presque indépendante du génotype. La méthode traditionnelle d’injection d’hypocotyle avec A. rhizogenes pour obtenir des plantes composites est inefficace, longue, laborieuse et provoque fréquemment la mort de plantes hypocotyles tendres et minuscules. Une transformation très efficace des racines velues en une étape médiée par A. rhizogenes a été établie précédemment, ce qui élimine le besoin de transplantation après la production de racines velues. Dans cette étude, un hypocotyle partiel et une racine primaire ont été enlevés, le site d’incision de l’hypocotyle a été recouvert d’A. rhizogenes, puis les hypocotyles ont été plantés dans de la vermiculite stérile. Après 12 jours de culture, l’incision de l’hypocotyle s’est élargie et de nouvelles racines velues ont été induites. Cet article fournit le protocole détaillé d’une méthode de transformation en une étape médiée par A. rhizogenes, dont l’efficacité a été démontrée par la production de plantes composites de soja sauvage, de Solanum americanum et de citrouille.

Agrobacterium rhizogenes is a gram-negative soil bacterium from the family Rhizobiaceae. A. rhizogenes can infect almost all dicotyledons, a few monocotyledons, and individual gymnosperms through wounds, producing hairy roots in infected plants. The bacterium carries the Ri (root-inducing) plasmid, and the T-DNA of the Ri plasmid carries the opine synthesis gene and rol genes (root locus genes). After the T-DNA of the Ri plasmid enters a plant cell and is integrated into a host chromosome, the expression of the rol genes induces production of hairy roots1. A plant binary expression vector carrying a target gene is transformed into A. rhizogenes, and the transformed A. rhizogenes is used to infect a plant. Transgenic roots can be induced in infected plants, producing composite plants containing transgenic roots and nontransgenic stems and buds. Generally, a composite plant can be obtained within 14-20 days. A. rhizogenes-mediated hairy root transformation is generally not limited by genotype in dicotyledonous plants2. The hairy roots produced by A. rhizogenes-infected plants are characterized by a fast growth rate, stable inheritance, and easy operation. Hairy root transformation mediated by A. rhizogenes is currently widely used to study root-related biology. Furthermore, the transformation of hairy roots can also be used to validate and optimize the target-editing efficiency of the CRISPR/Cas9 system3,4,5 and protein subcellular localization. Therefore, hairy root transformation is an important tool in research on plant gene function, metabolic engineering, and interactions between roots and rhizosphere microorganisms6,7,8.
Composite plants containing transgenic roots obtained through hairy root transformation have been widely produced in dicotyledonous plants, especially in legumes. The traditional method of injecting the hypocotyl with A. rhizogenes has been used to produce composite Lotus corniculatus9, soybeans10, tomato11, sweet potatoes12,&#160;and many other plants5,8. The hypocotyl-injection method is inefficient and is likely to cause the death of young or tiny hypocotyl plants. Therefore, the method was improved by cutting off the embryonic roots, coating the seedling incision with A. rhizogenes, and then placing the hypocotyl on sterile culture medium for rooting cultivation13. However, those steps are performed in a sterile environment, and the operation steps are relatively cumbersome. In particular, the resulting composite plants need to be transplanted, which increases the amount of work. In previous work, one-step A. rhizogenes-mediated (ARM) hairy root transformation was established in cucumber, soybean, Lotus japonicus, Medicago truncatula,&#160;and tomato2,14,15,16,17. The primary root and partial hypocotyl were removed, the incision site of the remaining hypocotyl was coated with transformed A. rhizogenes, and the seedling was then planted into moist sterile vermiculite. After 12 days of cultivation, hairy roots were produced at the incision site. The one-step ARM method is highly efficient and requires less time to produce hairy roots. Transplanting after forming hairy roots is also not necessary. Because microbial contamination can be avoided without transplantation, the one-step ARM method can be particularly useful when studying interactions between plants and microorganisms, such as symbiotic nitrogen fixation between leguminous plants and Rhizobia, and symbioses between plants and arbuscular mycorrhizal fungi. In this paper, a detailed one-step A. rhizogenes-mediated&#160;hairy root transformation protocol is provided with examples of composite plants produced in wild soybean, Solanum americanum, and pumpkin. With the protocol, researchers can smoothly perform the one-step ARM transformation.

Pleins feux sur l’auteur : Rationalisation de la production de plantes composites grâce à la transformation des racines poilues médiée par Agrobacterium rhizogenes 

Procédé efficace et reproductible de production de plantes composites par transformation racinaire velue basée sur Agrobacterium rhizogenes

Our team focuses on Agrobacterium rhizogenes-based hairy root transformation. Hairy root transformation is crucial in studying plant gene function, metabolic engineering, and interactions between roots and Rhizosphere microorganisms. This article provides a one-step transformation method, mediated by Agrobacterium rhizogenes.Hairy root transformation is established in various dicotyledons and monocotyledons species, and is almost independent with the genotype. The one-step method mediated by Agrobacterium rhizogenes for inducing hairy roots is simpler and more efficient for creating composite plants compared to the hypocotyl injection method. The hypocotyl injection method is inefficient and is likely to cause the death of young or tiny hypocotyl plants.The one-step Agrobacterium rhizogenes-mediated method is highly efficient and requires less time to produce hairy roots. Moreover, there is no need for transplanting past the formation of hairy roots. Alpha-sign regulation genes and beta-sign synthesis genes were used as viral screen markers in hairy root transformation mediated by Agrobacterium rhizogenes.

Transformation très efficace des racines velues en une étape médiée par A. rhizogenes Des racines velues ont été produites au site d’incision de l’hypocotyle 12 jours après l’inoculation avec du K599 modifié. Les racines velues transgéniques ont été déterminées en fonction de l’expression du gène rapporteur contenu dans le vecteur binaire. Des racines transgéniques transformées avec le gène rapporteur DsRed2 du soja sauvage composite, de S. americanum</em...

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Ici, nous fournissons le protocole détaillé d’une méthode de transformation en une étape médiée par Agrobacterium tumefaciens pour produire des plantes composites.

Producing composite plants with transgenic roots and nontransgenic stems and buds using Agrobacterium rhizogenes-mediated hairy root transformation is a ...

Notre équipe se concentre sur la transformation des racines velues basée sur Agrobacterium rhizogenes. La transformation des racines velues est cruciale dans l’étude de la fonction des gènes des plantes, de l’ingénierie métabolique et des interactions entre les racines et les micro-organismes de la rhizosphère. Cet article fournit une méthode de transformation en une étape, médiée par Agrobacterium rhizogenes.La transformation des racines velues est établie chez diverses espèces de dicotylédons et de monocotylédones, et est presque indépendante du génotype. La méthode en une étape médiée par Agrobacterium rhizogenes pour induire des racines velues est plus simple et plus efficace pour créer des plantes composites par rapport à la méthode d’injection d’hypocotyle. La méthode d’injection d’hypocotyle est inefficace et est susceptible de causer la mort de plantes hypocotyles jeunes ou minuscules.La méthode médiée par Agrobacterium rhizogenes en une étape est très efficace et nécessite moins de temps pour produire des racines velues. De plus, il n’est pas nécessaire de transplanter au-delà de la formation de racines velues. Les gènes de régulation des signes alpha et les gènes de synthèse des signes bêta ont été utilisés comme marqueurs de dépistage viral dans la transformation des racines velues médiée par Agrobacterium rhizogenes.

an-efficient-reproducible-method-for-producing-composite-plants

Research

JoVE Journal

Biology

An Efficient and Reproducible Method for Producing Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

1.4K vues.  Liaocheng University. Notre équipe se concentre sur la transformation des racines velues basée sur Agrobacterium rhizogenes. La transformation des racines velues est cruciale dans l’étude de la fonction des gènes des plantes, de l’ingénierie métabolique et des interactions entre les racines et les micro-organismes de la rhizosphère. Cet article fournit une méthode de transformation en une étape, médiée par Agrobacterium rhizogenes.La transformation des racines velues est établie chez diverse...

Vidéo: Pleins feux sur l’auteur : Rationalisation de la production de plantes composites grâce à la transformation des racines poilues médiée par Agrobacterium rhizogenes 

Producing composite plants with transgenic roots and nontransgenic stems and buds using Agrobacterium rhizogenes-mediated hairy root transformation is a powerful tool to study root-related biology. Hairy root transformation is established in a wide range of dicotyledons and in several monocotyledon species and is almost independent of the genotype. The traditional method of hypocotyl injection with A. rhizogenes to obtain composite plants is inefficient, time-consuming, laborious, and frequently causes the death of tender and tiny hypocotyl plants. A highly efficient, one-step hairy root transformation mediated by A. rhizogenes was established previously, which eliminates the need for transplanting after producing hairy roots. In this study, a partial hypocotyl and primary root were removed, the hypocotyl incision site was coated with A. rhizogenes, and&#160;then hypocotyls were planted in sterile vermiculite. After 12 days of cultivation, the hypocotyl incision expanded and new hairy roots were induced. This article provides the detailed protocol of a one-step transformation method mediated by A. rhizogenes, with its effectiveness demonstrated by producing composite plants of wild soybean, Solanum americanum, and pumpkin.

Here, we provide the detailed protocol of a one-step transformation method mediated by Agrobacterium tumefaciens to produce composite plants.

Recherche

Biologie

Production of Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation

Production of Composite Plants by Agrobacterium rhizogenes-Based Hairy Root Transformation  

Begin by collecting seeds of wild soybean, S.Americanum, and the local variety of pumpkin. Sow the seeds in vermiculite at a depth of one centimeter and water them thoroughly. Cultivate them in a growth chamber at approximately 70%relative humidity.Remove the A.rhizogenes strain K599 from the 80 degrees Celsius freezer and activate it on a solid LB medium at 28 degrees Celsius for 48 hours. Then select a single clone of strain K599 and culture it in one milliliter of liquid antibiotic containing LB medium for 12 hours. Spread 500 microliters of the bacterial suspension evenly on a solid antibiotic containing LB medium and incubate at 28 degrees Celsius for 24 hours.After seven days, when seedling cotyledons are unfolded, use a sterilized sharp scalpel to cut approximately 0.5 to one centimeter of the hypocotyl. Discard the primary root and a portion of the hypocotyl. Coat the hypocotyl incision with K599 bacteria.Plant seedlings in moist vermiculite and infect 30 plants of each species using A.rhizogenes-mediated hairy root transformation. Then water the plants with five milliliters of resuspended K599 bacterial suspension in quarter-strength Gamborg B5 basic medium. Cover the pots with a transparent plastic bag and place them in a growth chamber.Grow the plants for approximately 12 days post-inoculation. At this time, new hairy roots should be generated at the incision site, typically reaching lengths of two to five centimeters. Using a CAMI luminescence imaging system with green excitation light at 540 nanometers and emission at 600 nanometers, detect the expression of the reporter gene DsRed2.Roots of composite plants of wild soybean, S.Americanum, and pumpkin under natural and green excitation light are visualized.