Il a été proposé que la maladie de Parkinson se développe et progresse par la propagation de type prion d’agrégats d’alpha-synucléine. Dans l’étude actuelle, nous essayons d’associer l’origine de la pathologie de l’alpha-synucléine dans le bulbe olfactif dans la maladie de Parkinson. Récemment, on a cru que la pathologie de l’alpha-synucléine se propageait de manière prionnée, à partir du bulbe olfactif ou du noyau dorsal de la plus grande synapse.
Bien que l’origine de l’agrégat d’alpha-synucléine dans le bulbe olfactif reste incertaine, des études récentes suggèrent que la propagation peut alterner à partir de la muqueuse olfactive. Nous avons montré que dans une autre administration d’agrégats d’alpha-synucléine dans le modèle murin, induit la pathologie de l’alpha-synucléine dans le bulbe olfactif. Cette méthode simple fournit un autre moyen d’évaluer la propagation de l’alpha synucléine de la muqueuse olfactive au bulbe olfactif sans technique chirurgicale.
L’administration intranasale d’agrégat d’alpha-synucléine est une méthode très simple et directe. Pour commencer, portez des équipements de protection individuelle, tels que des gants jetables, des masques et des gobelets de sécurité. Préparez une solution de fibres d’alpha-synucléine de souris dans du PBS à une concentration de quatre milligrammes par millilitre et enveloppez le tube d’un film transparent pour éviter toute contamination.
Ensuite, remplissez le bain à ultrasons d’un sonicateur avec de l’eau et ajoutez des glaçons pour le refroidir à quatre degrés Celsius. Sonicate 200 microlitres de la solution de fibrilles pour générer des fibrilles préformées d’alpha synucléine pendant cinq minutes. Placez une souris anesthésiée en position couchée sur une serviette en papier, la tête légèrement inclinée vers le bas.
Ensuite, prélevez un microlitre de la solution d’alpha-synucléine de quatre milligrammes par millilitre dans une pipette P10 et placez la pointe de la pipette près du nez de la souris pour former une goutte ronde à l’extrémité de la pointe de la pipette. Maintenant, administrez par voie intranasale la solution à la narine unilatérale. Attendez 30 secondes à une minute pour laisser la souris inhaler naturellement la solution.
Répétez ce processus jusqu’à ce que 20 microlitres d’alpha synucléine soient administrés. Après l’administration d’alpha synucléine, nettoyez le banc avec des détergents commerciaux en cas de contamination par la solution et jetez les gants, puis administrez de l’atipamézole à raison de trois milligrammes par kilogramme par injection intrapéritonéale pour faciliter la récupération. Une fois la récupération complète, remettez la souris dans la cage.
Pour commencer, administrez des fibrilles préformées d’alpha synucléine par voie intranasale aux souris. Après avoir euthanasié la souris, faites une incision de deux centimètres dans le cuir chevelu avec un scalpel. À l’aide de ciseaux, incisez l’os crânien latéralement de la base vers le nez.
Pour obtenir les bulbes olfactifs, retirez complètement l’os crânien recouvrant les bulbes olfactifs, puis, retournez la tête et sectionnez les nerfs cérébraux. Retirez soigneusement le cerveau à l’aide d’une pince, en gardant les bulbes olfactifs intacts. Pour préserver les bulbes, coupez soigneusement les nerfs olfactifs lorsqu’ils se fixent à l’os du crâne.
Placez les échantillons de cerveau dans de l’aldéhyde paraforme à 4 % préparé dans du PBS et conservez-les à quatre degrés Celsius pendant la nuit. La pathologie de l’alpha-synucléine n’a pas été observée dans le bulbe olfactif du côté traité après un mois sur trois, mais des agrégats de P alpha synucléine de type neurite de Lewy ont été observés dans les glomérules du côté traité après six et 12 mois. Ces agrégats étaient absents dans les bulbes du côté témoin.
Le nombre d’agrégats d’alpha-synucléine de type neurite de Lewy a augmenté de manière significative dans les bulbes olfactifs du côté traité sur 12 mois, tandis que le côté témoin avait très peu de tels agrégats.
