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Mosaic Analysis of Gene Function in Postnatal Mouse Brain Development by Using Virus-based Cre Recombination

Normal brain function relies not only on embryonic development when major neuronal pathways are established, but also on postnatal 
development when ...

Keck School of Medicine, University of Southern California

 University of Southern California

&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x6210;&#x5206;&#x652F;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x591A;&#x4E2A;&#x7A81;&#x89E6;&#x76EE;&#x6807;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;&#x8F74;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x6307;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x8F74;&#x7A81;&#x5206;&#x652F;&#x4EE5;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x53D7;&#x5230;&#x4E25;&#x683C;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7BA1;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E00;&#x91CD;&#x8981;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4E0D;&#x592A;&#x597D;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x7684;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5E38;&#x89C1;&#x5206;&#x679D;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7814;&#x7A76;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x91CD;&#x70B9;&#x653E;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x5206;&#x652F;&#x4F1A;&#x53D7;&#x80DE;&#x5916;&#x63D0;&#x793A;&#x53CA;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x53D1;&#x5C55;&#x590D;&#x6742;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x3002;

&#x8F74;&#x7A81;&#x5206;&#x652F;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

During nervous system development, axons generate branches to connect with multiple synaptic targets. As with axon growth and guidance, axon branching is tightly controlled in order to establish functional neural circuits, yet the mechanisms that regulate this important process are less well understood. Here, we review recent advances in the study of several common branching processes in the vertebrate nervous system. By focusing on each step in these processes we illustrate how different types of branching are regulated by extracellular cues and neural activity, and highlight some common principles that underlie the establishment of complex neural circuits in vertebrate development.

Developmental regulation of axon branching in the vertebrate nervous system.

Au cours du d&#xE9;veloppement du syst&#xE8;me nerveux, les axones de g&#xE9;n&#xE9;rer des branches pour se connecter &#xE0; de multiples cibles synaptiques. Comme la croissance des axones et des conseils, axone branchement est &#xE9;troitement contr&#xF4;l&#xE9;e afin d&#x26;#39;&#xE9;tablir les circuits neuronaux fonctionnels, mais les m&#xE9;canismes qui r&#xE9;gulent ce processus important sont moins bien compris. Ici, nous passons en revue les progr&#xE8;s r&#xE9;cents dans l&#x26;#39;&#xE9;tude de plusieurs communes processus de branchement dans le syst&#xE8;me nerveux des vert&#xE9;br&#xE9;s. En se concentrant sur chaque &#xE9;tape de ces processus, nous illustrons comment les diff&#xE9;rents types de branchement sont r&#xE9;glement&#xE9;s par des signaux extracellulaires et l&#x26;#39;activit&#xE9; neurale, et mettre en &#xE9;vidence certains principes communs qui sous-tendent la mise en place des circuits neuronaux complexes dans le d&#xE9;veloppement des vert&#xE9;br&#xE9;s.

La r&#xE9;gulation du d&#xE9;veloppement de l&#x26;#39;Axon branchement dans le syst&#xE8;me nerveux des vert&#xE9;br&#xE9;s

W&auml;hrend der Entwicklung des Nervensystems generieren Axone Zweige mit mehreren synaptischen Zielen verbinden. Wie bei Axon Wachstum und Hilfestellung, Axon Verzweigung ist streng kontrolliert, um funktionale neuronale Schaltkreise zu schaffen, aber die Mechanismen, die diesen wichtigen Prozess zu regulieren sind weniger gut verstanden. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir die j&uuml;ngsten Fortschritte in der Studie von mehreren gemeinsamen verzweigten Prozessen im vertebrate Nervensystem. Durch die Konzentration auf jedem Schritt in diesen Prozessen zeigen wir wie verschiedene Arten von Verzweigungen werden durch extrazellul&auml;re Signale und neurale Aktivit&auml;t reguliert, und markieren Sie einige gemeinsame Grunds&auml;tze, die die Einrichtung von komplexe neuronale Schaltkreise in vertebrate Entwicklung zugrunde liegen.

Entwicklungsbiologie Regulierung der Axon Verzweigungen in das Nervensystem der Wirbeltiere.

Durante lo sviluppo del sistema nervoso, assoni generano rami per connettersi con pi&ugrave; destinazioni sinaptiche. Come con assone crescita e orientamento, assone ramificazione &egrave; strettamente controllato al fine di stabilire i circuiti neurali funzionali, eppure i meccanismi che regolano questo importante processo sono meno ben comprese. Qui, passiamo in rassegna i recenti progressi nello studio dei diversi processi di ramificazione comuni vertebrato del sistema nervoso. Focalizzando l&#39;attenzione su ogni passo in questi processi ci illustrano come i diversi tipi di ramificazione sono regolati da segnali extracellulari e attivit&agrave; neurale ed evidenziare alcuni comuni principi che sottendono la creazione di circuiti neurali complessi in sviluppo vertebrato.

Regolamento sullo sviluppo dell&#39;assone ramificazione del sistema nervoso vertebrati.

&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x679D;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EF8;&#x7D22;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5206;&#x5C90;&#x306F;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x5C90;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5404;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5C90;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x539F;&#x5247;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5206;&#x5C90;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x898F;&#x5236;

&#xC2E0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; axons &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC640; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAE34;&#xBC00; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xCD95; &#xC0AD; &#xBD84;&#xAE30; &#xC544;&#xC9C1; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB35C; &#xC798; &#xC774;&#xD574;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCC99;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xAC01; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xAE30;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418; &#xACE0; &#xCC99;&#xCD94; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD; &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC6D0;&#xCE59;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84;&#xAE30; &#xCC99;&#xCD94; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xADDC;&#xC81C;.

Durante el desarrollo del sistema nervioso, los axones se generan las ramas para conectar con m&#xFA;ltiples objetivos sin&#xE1;pticas. Al igual que con el crecimiento axonal y la orientaci&#xF3;n, la ramificaci&#xF3;n del ax&#xF3;n est&#xE1; estrechamente controlada a fin de establecer los circuitos neuronales funcionales, sin embargo, los mecanismos que regulan este importante proceso se entienden tan bien. En este sentido, revisar los avances recientes en el estudio de varios procesos comunes de ramificaci&#xF3;n en el sistema nervioso de los vertebrados. Al concentrarse en cada paso en estos procesos que ilustran c&#xF3;mo diferentes tipos de ramificaci&#xF3;n est&#xE1;n reguladas por se&#xF1;ales extracelulares y la actividad neuronal, y poner de relieve algunos principios comunes que subyacen a la creaci&#xF3;n de complejos circuitos neuronales en el desarrollo de vertebrados.

Reglamento de Desarrollo de Axon ramificaci&#xF3;n en el sistema nervioso de los vertebrados

&#x80CC;&#x666F;&#xFF1A; &#x8D70;&#x4E0B;&#x5761; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x5E38;&#x7531;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BC4;&#x6838;&#x6807;&#x51C6;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x4F7F;&#x7528;&#x6838;&#x67D3;&#x8272; 7 aminoactinomycin D (7AAD)&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;7AAD&#xFF0C;&#x53EA;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x574F;&#x6B7B;&#x548C;&#x665A;&#x671F;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x65E9;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x5DEE;&#x5AC1;&#x63A5;&#x5728;&#x8110;&#x8840;&#x79FB;&#x690D; (&#x7EBF;) &#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x9AD8;&#x4F30;&#x690D;&#x5165;&#x7EBF;&#x5355;&#x4F4D;&#x5728;&#x7279;&#x5B9A;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6548;&#x80FD;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x4E3A;&#x4E86;&#x68C0;&#x6D4B;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4E8B;&#x4EF6;&#xFF0C;costaining &#x4E0E; 7AAD &#x548C;&#x819C;&#x8054;&#x86CB;&#x767D; V (AnnV) &#x4E0E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3001; &#x6807;&#x51C6;&#x679A;&#x4E3E;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x884C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x7EBF;&#x5355;&#x4F4D;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4E86;&#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x67D3;&#x8272;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x83CC;&#x843D;&#x5F62;&#x6210;&#x5355;&#x4F4D; &#xFF08;CFU&#xFF09; &#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&quot;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x6D41;&#x5F0F;&quot;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9884;&#x6D4B;&#x79FB;&#x690D;&#x6548;&#x529B;&#x7684;&#x51B7;&#x51BB;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x5927;&#x91CF;&#x7684; /cd34 + AnnV + &#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x73B0; 7AAD &#x95E8;&#x63A7;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E2D;&#x3002;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5242;&#x91CF; (/cd34 + AnnV-) &#x4EE5;&#x53CA;&#x5173;&#x8054;&#x4E2D;&#x5C0F;&#x89C4;&#x6A21;&#x7684; CFUs (n = 10&#xFF09; &#x548C;&#x5927;&#x578B;&#x94F6;&#x884C;&#x4E1A;&#x7814;&#x7A76; &#xFF08;n = 107)&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x6837;&#x672C; postthaw &#x65F6;&#x95F4;&#x663E;&#x793A;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x51CB;&#x4EA1; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64; AnnV &#x5206;&#x644A;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x76F8;&#x6BD4;&#x53EA;&#x662F;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x679A;&#x4E3E;&#x7684;&#x83CC;&#x843D;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x66F4;&#x4F73;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; &#x5B9A;&#x4E49;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4EBA;&#x53E3; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x6539;&#x5584;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x83CC;&#x843D;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5F97;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6548;&#x80FD;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7EBF;&#x5355;&#x4F4D;&#x4F9B;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;

&#x7531;&#x819C;&#x8054;&#x86CB;&#x767D; V &#x6807;&#x8BB0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1; /cd34 + &#x6D41;&#x91CF;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x63D0;&#x9AD8;&#x690D;&#x5165;&#x7684;&#x810A;&#x9AD3;&#x8840;&#x6548;&#x80FD;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x3002;

BACKGROUND: Nonviable CD34+ cells are commonly assessed by standard flow cytometry using the nuclear stain 7-aminoactinomycin D (7AAD). 7AAD, however, only detects necrotic and late apoptotic cells, not earlier apoptosis, which engraft poorly in animal models of cord blood (cord) transplantation. The standard method, therefore, may overestimate engraftment potency of cord units under certain conditions. STUDY DESIGN AND METHODS: To detect apoptotic events, costaining with 7AAD and annexin V (AnnV), in parallel with the quantitative, standard enumeration, was used. Cord units were assessed before and after cryopreservation using both staining methods and colony-forming units (CFU) to determine if graft potency can be predicted using a "functional flow cytometry" approach. RESULTS: Significant numbers of CD34+ AnnV+ events were found within the 7AAD-gated population. Nonapoptotic cell dose (CD34+ AnnV-) correlated well with CFUs in both a small-scale (nâ€ƒ=â€ƒ10) and a large-scale banking study (nâ€ƒ=â€ƒ107). Finally, following samples postthaw with time showed increasing numbers of apoptotic CD34+ cells and consequently the AnnV assessed dose was better at predicting the CFU compared with just the standard enumeration. CONCLUSION: Defining the apoptotic population of CD34+ cells improved the prediction of CFU, making this method a rapid test of potency for assessment of cord units for clinical use.

Flow cytometry assessment of apoptotic CD34+ cells by annexin V labeling may improve prediction of cord blood potency for engraftment.

Rappel : Cellules non viables CD34 + sont g&eacute;n&eacute;ralement &eacute;valu&eacute;s par cytom&eacute;trie en flux standard en utilisant le nucl&eacute;aire tacher D 7-aminoactinomycine (7AAD). 7AAD, toutefois, ne d&eacute;tecte cellules en apoptose n&eacute;crotiques et fin, apoptose pas ant&eacute;rieure, qui greffer mal dans des mod&egrave;les animaux de transplantation de sang (cordon) cordon. La m&eacute;thode standard, par cons&eacute;quent, peut-&ecirc;tre surestimer activit&eacute; de greffe de cordon unit&eacute;s sous certaines conditions. CONCEPTION et m&eacute;thodes de l&#39;&eacute;tude : Pour d&eacute;tecter les &eacute;v&eacute;nements apoptotiques, costaining avec 7AAD et l&#39;annexine V (AnnV), en parall&egrave;le avec l&#39;&eacute;num&eacute;ration quantitative, standard, a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;. Unit&eacute;s de cordon ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;es avant et apr&egrave;s cryoconservation en utilisant les m&eacute;thodes de coloration et des unit&eacute;s formant colonie (UFC) pour d&eacute;terminer si activit&eacute; de greffe peut &ecirc;tre pr&eacute;dite en utilisant une approche de &laquo; cytom&eacute;trie fonctionnelle &raquo;. R&Eacute;SULTATS : Un nombre important d&#39;&eacute;v&eacute;nements CD34 + AnnV + ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute; au sein de la population 7AAD-d&eacute;pendants. Bonne corr&eacute;lation avec UFC dans une petite dose de cellules nonapoptotic (CD34 + AnnV-) (n = 10) et une &eacute;tude &agrave; grande &eacute;chelle de services bancaires (n = 107). Enfin, suivant &eacute;chantillons postthaw avec le temps a montr&eacute; un nombre croissant d&#39;apoptotic de cellules CD34 + et par cons&eacute;quent la dose &eacute;valu&eacute;e AnnV &eacute;tait meilleure &agrave; pr&eacute;dire la CFU, compar&eacute;e &agrave; seulement l&#39;&eacute;num&eacute;ration standard. CONCLUSION : D&eacute;finition apoptotiques population de cellules CD34 + am&eacute;lior&eacute; la pr&eacute;diction de l&#39;UFC, rendant cette m&eacute;thode un test rapide de puissance pour l&#39;&eacute;valuation des unit&eacute;s de cordon pour un usage clinique.

&Eacute;valuation de cytom&eacute;trie en flux de cellules apoptotiques CD34 + par l&#39;annexine V &eacute;tiquetage peut am&eacute;liorer la pr&eacute;diction de puissance de sang de cordon pour prise de greffe.

Hintergrund: Nicht lebensf&auml;higes CD34 + Zellen werden h&auml;ufig durch Norm Durchflusszytometrie, die mit der nuklearen bewertet Fleck 7-Aminoactinomycin D (7AAD). 7AAD, erkennt jedoch nur nekrotischen und sp&auml;ten Apoptotic Zellen, nicht fr&uuml;her Apoptosis, die schlecht in Tiermodellen der Schnur (Schnur) Blut Transplantation Raft. Die Standardmethode, kann daher Verteilung Potenz Schnur Einheiten unter bestimmten Bedingungen &uuml;bersch&auml;tzen. STUDIENDESIGN und Methoden: Um Apoptotic Ereignisse zu erkennen, wurde mit 7AAD costaining und annexin V (AnnV), parallel mit der quantitativen, standard-Enumeration verwendet. Schnur-Einheiten wurden beurteilt, vor und nach Kryokonservierung mit F&auml;rbung Methoden und Kolonienbildende Einheiten (KBE) um festzustellen, ob Transplantat Potenz vorausgesagt werden kann, mit einem &quot;funktionale Durchflusszytometrie&quot;-Ansatz. Ergebnisse: CD34 + AnnV + Events in gr&ouml;&szlig;erer Zahl wurden in der 7AAD-Gating Bev&ouml;lkerung gefunden. Nonapoptotic Zelle Dosis (CD34 + AnnV-) korreliert gut mit KBE in eine kleine (n = 10) und einer gro&szlig;en Banken-Studie (n = 107). Schlie&szlig;lich folgende Proben-Postthaw mit der Zeit immer mehr Apoptotic zeigte CD34 + Zellen und folglich die AnnV bewertete Dosis war besser vorhergesagt werden k&ouml;nnen die CFU gegen&uuml;ber der standard-Enumeration. Fazit: Definition der Apoptotic verbessert Bev&ouml;lkerung von CD34 + Zellen die Vorhersage der KBE, machen diese Methode einem Schnelltest der Potenz f&uuml;r Beurteilung der Schnur-Einheiten f&uuml;r den klinischen Einsatz.

Vorhersage der Schnur Blut Potenz f&uuml;r Verteilung kann flie&szlig;en Cytometry Bewertung der Apoptotic CD34 + Zellen von annexin V Kennzeichnung verbessert werden.

SFONDO: Cellule CD34 + non vitali sono comunemente valutate in citometria a flusso standard utilizzando il nucleare macchia D 7-aminoactinomycin (7AAD). 7AAD, tuttavia, rileva solo tardi e necrotiche apoptotic cellule, apoptosi non precedenti, che mal Raft in modelli animali di trapianto di midollo sangue (cavo). Il metodo standard, pertanto, potrebbe sovrastimare potenza attecchimento delle unit&agrave; di cordone sotto determinate condizioni. DISEGNO dello studio e metodi: Per rilevare gli eventi apoptotici, costaining con 7AAD e Annessina V (AnnV), in parallelo con l&#39;enumerazione quantitativa, standard, &egrave; stato utilizzato. Cavo unit&agrave; sono stati valutati prima e dopo la crioconservazione utilizzando sia metodi di colorazione e unit&agrave; formanti colonia (UFC) per determinare se pu&ograve; essere previsto innesto potenza utilizzando un approccio &quot;citometria a flusso funzionale&quot;. RISULTATI: Un numero significativo di CD34 + AnnV + eventi sono stato trovato all&#39;interno della popolazione 7AAD-gated. Nonapoptotic dose di cella (CD34 + AnnV-) correlato bene con CFU in entrambe un su scala ridotta (n = 10) e uno studio su larga scala bancario (n = 107). Infine, seguenti campioni postthaw con il tempo hanno mostrato un numero crescente di apoptotic cellule CD34 + e di conseguenza la dose valutata AnnV era meglio a predire il CFU rispetto al solo l&#39;enumerazione standard. CONCLUSIONE: Definire il apoptotic popolazione di cellule CD34 + migliorato la previsione di CFU, rendendo questo metodo un test rapido di potenza per la valutazione delle unit&agrave; di cordone per uso clinico.

Valutazione di citometria a flusso delle cellule apoptotic CD34 + di annexin V etichettatura possa migliorare la previsione della potenza di sangue del cordone per attecchimento.

&#x80CC;&#x666F;: &#x6DD8;&#x6C70; CD34 + &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x3001;&#x6838;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6A19;&#x6E96;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 7 aminoactinomycin D &#xFF08;7AAD&#xFF09; &#x3092;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;7AAD&#x3001;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x306E;&#x307F;&#x58CA;&#x6B7B;&#x3068;&#x5F8C;&#x671F;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840; (&#x81CD;&#x5E2F;) &#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x63A5;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5358;&#x4F4D;&#x4E00;&#x5B9A;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7740;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x904E;&#x5927;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x65B9;&#x6CD5;: &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;7AAD &#x3068; costaining &#x3068; V (AnnV) &#x3068;&#x4E26;&#x5217;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x5217;&#x6319;&#x306B;&#x30A2;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x4F7F;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5358;&#x4F4D;&#x306F;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x3068;&#x5F8C;&#x306E;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x6CD5;&#x3068;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x5358;&#x4F4D; &#xFF08;CFU&#xFF09;&#x300C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x300D;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x79FB;&#x690D;&#x7247;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;: CD34 + AnnV + &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x756A;&#x53F7;&#x3001;7AAD &#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x5185;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Nonapoptotic &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7DDA;&#x91CF; (cd34 AnnV-) &#x4E21;&#x65B9;&#x5C0F;&#x898F;&#x6A21;&#x3067; CFUs &#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x76F8;&#x95A2; (n = 10) &#x3068;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x9280;&#x884C;&#x7814;&#x7A76; (n = 107&#xFF09;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;cd34 &#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x6570;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x6B21;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB; postthaw &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; AnnV &#x8A55;&#x4FA1;&#x7DDA;&#x91CF;&#x306F;&#x3061;&#x3087;&#x3046;&#x3069;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x5217;&#x6319;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; CFU &#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#xFF1A; &#x5B9A;&#x7FA9;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; CD34 + &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; &#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x81E8;&#x5E8A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B; CFU &#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x6D41;&#x308C; cytometry &#x8A55;&#x4FA1;&#x30A2;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; V &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; cd34 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7740;&#x3092;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x304C;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBC30;&#xACBD;: &#xBBF8;&#xB2EC; CD34 + &#xC138;&#xD3EC; &#xD575;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC900; cytometry&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; 7-aminoactinomycin D (7AAD) &#xC5BC;&#xB8E9;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 7AAD,&#xB9CC; &#xAD34; &#xACE0; &#xB2A6;&#xC740; apoptotic &#xC138;&#xD3EC;, &#xCF54;&#xB4DC; &#xD608;&#xC561; (&#xCF54;&#xB4DC;) &#xC774;&#xC2DD; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; engraft &#xD558;&#xC9C0; &#xC774;&#xC804; apoptosis &#xAC10;&#xC9C0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD45C;&#xC900; &#xBC29;&#xBC95; &#xD2B9;&#xC815; &#xC870;&#xAC74; &#xCF54;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; engraftment &#xD798;&#xACFC; &#xB300; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xBC29;&#xBC95;: apoptotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xAC10;&#xC9C0;, 7aad&#xC640; costaining &#xBC0F; V (AnnV), &#xBCD1;&#xD589; &#xC591;&#xC801;, &#xD45C;&#xC900; &#xC5F4;&#xAC70;&#xD615;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; annexin &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCF54;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xC704; &quot;&#xAE30;&#xB2A5; cytometry&quot; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xC608;&#xCE21;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xD615;&#xC131; &#xB2E8;&#xC704; (CFU)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cryopreservation &#xC804;&#xD6C4; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB410;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;: &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC218;&#xC758; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xAC00; CD34 + AnnV + 7AAD &#xBB38;&#xC774; &#xC778;&#xAD6C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. Nonapoptotic &#xC140; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; (CD34 + AnnV-) &#xBAA8;&#xB450; &#xC18C;&#xADDC;&#xBAA8;&#xC758; Cfus&#xC640; &#xC798; &#xC0C1;&#xAD00; (n = 10)&#xC640; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xAE08;&#xC735; &#xC5F0;&#xAD6C; (n = 107). &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0D8;&#xD50C; postthaw apoptotic&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; CD34 + &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xBA70; &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; AnnV &#xD3C9;&#xAC00; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xADF8;&#xB0E5; &#xD45C;&#xC900; &#xC5F4;&#xAC70;&#xD615;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; CFU &#xC608;&#xCE21;&#xC5D0; &#xB354;&#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860;: &#xC815;&#xC758; apoptotic CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C; CFU, &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294;&#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xCF54;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xC704; &#xC784;&#xC0C1; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xD798;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;.

V &#xB77C;&#xBCA8; annexin &#xC5EC; apoptotic CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD750;&#xB984; cytometry &#xD3C9;&#xAC00; engraftment&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB4DC; &#xD608;&#xC561; &#xD798;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

FONDO: Las c&eacute;lulas CD34 + viables com&uacute;nmente se eval&uacute;an mediante citometr&iacute;a de flujo est&aacute;ndar utilizando la nuclear mancha D 7-aminoactinomycin (7AAD). 7AAD, sin embargo, s&oacute;lo detecta c&eacute;lulas apoptotic necr&oacute;tico y finales, apoptosis no anterior, que engraft mal en modelos animales de trasplante de cable (cable) de la sangre. El m&eacute;todo est&aacute;ndar, por lo tanto, sobrestiman potencia de injerto de m&eacute;dula unidades bajo ciertas condiciones. DISE&Ntilde;O de estudio y m&eacute;todos: Para detectar eventos de apoptosis, el costaining con 7AAD y anexina V (AnnV), paralelamente a la enumeraci&oacute;n cuantitativa, est&aacute;ndar, fue utilizado. Cable unidades fueron evaluadas antes y despu&eacute;s de criopreservaci&oacute;n usando m&eacute;todos de tinci&oacute;n y unidades formadoras de colonias (UFC) para determinar si el injerto potencia puede predecirse utilizando un enfoque de &quot;citometr&iacute;a de flujo funcional&quot;. Resultados: Se encontraron un n&uacute;mero significativo de CD34 + AnnV + eventos dentro de la poblaci&oacute;n 7AAD-bloqueados. Nonapoptotic dosis de c&eacute;lulas (CD34 + AnnV-) correlacionaron bien con UFC en tanto a peque&ntilde;a escala (n = 10) y un estudio a gran escala de la banca (n = 107). Finalmente, postthaw de las muestras siguientes con el tiempo mostraron a un n&uacute;mero creciente de apoptosis c&eacute;lulas CD34 + y en consecuencia la dosis evaluada AnnV era mejor para predecir la UFC en comparaci&oacute;n con s&oacute;lo la enumeraci&oacute;n est&aacute;ndar. CONCLUSI&Oacute;N: Definir la apoptosis poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas CD34 + mejora la predicci&oacute;n de UFC, este m&eacute;todo de hacer una prueba r&aacute;pida de potencia para la evaluaci&oacute;n de unidades de cable para uso cl&iacute;nico.

Evaluaci&oacute;n de citometr&iacute;a de flujo de c&eacute;lulas apopt&oacute;ticas CD34 + por anexina V etiquetado puede mejorar la predicci&oacute;n de potencia de sangre de cord&oacute;n para injerto.

Daniel A. Gibson

Neuroscience Graduate Program

Keck School of Medicine, University of Southern California

Mosaic Analysis of Gene Function in Postnatal Mouse Brain Development by Using Virus-based Cre Recombination