טיהור פלסמיד דנ"א מ מושבות חיידקים באמצעות Miniprep Qiagen Kit

Summary

Abstract

טיהור פלסמיד דנ"א מן החיידק היא טכניקה הליבה של שיבוט מולקולרי. טיהור בקנה מידה קטן (miniprep) מתוך פחות מ 5 מ"ל של תרבית החיידקים הוא דרך מהירה לצורך אימות לשבט או בידוד ה-DNA, ואחריו עוד תגובות אנזימטיות (שרשרת פולימראז התגובה אנזים העיכול הגבלה). הנה, אנחנו וידאו מוקלט הנהלים הכללי של miniprep באמצעות ערכת QIAprep של QIAGEN Miniprep 8, במטרה להציג את הטכניקה היעילה ביותר על כללי למתחילים טכניקות הביולוגיה המולקולרית. ההליך כולו מבוסס על תמוגה אלקליין של תאים E. coli ואחריו ספיחה של ה-DNA על סיליקה בנוכחות מלח גבוהה. הוא מורכב משלושה שלבים: 1) הכנה וניקוי של lysate חיידקי, 2) ספיחה של ה-DNA על הממברנה QIAprep, 3) כביסה elution של DNA פלסמיד. כל הצעדים נעשים ללא שימוש פנול, כלורופורם, CsCl, ברומיד ethidium, ללא משקעים אלכוהול. בדרך כלל לוקח פחות מ 2 שעות כדי לסיים את ההליך כולו.