FSL בונה: שיטה פשוטה שינוי Cell / Virion משטחים עם מגוון רחב של סמנים ביולוגיים מבלי להשפיע ליכולת הקיום שלהם

Summary

פונקציה-Spacer-ליפידים (FSL) בונה לאפשר את תכונות פני השטח של תאים חיים virions להיות שונה ללא אובדן חיוניות. השיטה דורשת מגע פשוט רק פתרון לבנות FSL עם תא / virion ושילוב משטח יציב ספונטנית מתרחשת.

Abstract

היכולת לשנות / לדמיין משטחים ביולוגיים, ולאחר מכן ללמוד את התא שונה / virion במגוון במבחנה בסביבות vivo חיונית להשגת תובנה נוספת לתוך הפונקציה של מולקולות ספציפיות או את הישות כולה. מחקרים של שינוי פני השטח ביולוגיים מוגבלים בדרך כלל הנדסה גנטית של האורגניזם או את הקובץ המצורף קוולנטיים של moieties כימית ^1,2 שטח פני התא. אולם אלה טכניקות מסורתיות לחשוף את התא המגיבים כימיים, או שהם דורשים מניפולציה משמעותי כדי להשיג את התוצאה הרצויה, מה שהופך אותם מסורבל, והם עשויים גם להשפיע על הכדאיות בשוגג / הפונקציונליות של התא שונה. שיטה פשוטה מזיק לשנות את פני השטח של התאים נדרשת.

לאחרונה טכנולוגיה חדשה, טכנולוגיה KODE הציגה מגוון של מבנים הרומן המורכב משלושה מרכיבים: קבוצה ראש פונקציונלי (F), spacer (S) וזנב השומנים (L) ידועים כמו פונקציה ליפידים-Spacer או FSL constructs3. Spacer (S) נבחרה לספק לבנות כלומר מסיסות במים, עדיין יהיה ספונטני ביציבות לשלב קרום.

FSL לבנות moieties תפקודית (F) עד כה כוללים מגוון של saccharides כולל קבוצה הקשורות דם הגורמים, חומצות sialic, סוכרים hyaluronan, fluorophores, ביוטין, radiolabels, וכן מגוון של פפטידים ^3-12. בונה FSL שימשו עוברים, זרע שינוי, דג הזברה, לתאי האפיתל / רירית הרחם, כדוריות דם אדומות, ו virions ליצור בקרות איכות מערכות ולוחות אבחון, לשנות הדבקה תא / אינטראקציה / הפרדה / immobilization, ועל במבחנה vivo הדמיה של תאים / virions ^3-12.

התהליך של שינוי תאים / virions הוא גנרי ופשוט ביותר. ההליך הנפוץ ביותר הוא הדגירה של תאים (בתקשורת חינם שומנים בדם) עם פתרון עבור FSL בונה במשך 1-2 שעות ב 37 ° C ^40-10. במהלך הדגירה FSL המבנים באופן ספונטני לשלב הממברנה, והתהליך הושלם. כביסה היא אופציונלית. תאים שונה על ידי בונה FSL ידועים כמו kodecytes ^6-9, בעוד virions הם kodevirions ^10.

FSL בונה כמו חליטות ישיר kodecytes / kodevirions נעשה שימוש במודלים של בעלי חיים ניסיוניים ^7,8,10. כל kodecytes / kodevirions להופיע כדי לשמור על חיוניות הרגיל שלהם ואת הפונקציונליות תוך השגת את הפונקציה החדשה של מחצית F ^7,8,10,11.

השילוב של dispersibility בתקשורת ביולוגית, התאגדות ספונטנית לתוך קרום התא, וכן רעילות נמוכה נראית לעין, שעושה FSL בונה כלי מחקר חשוב למחקר של תאים virions.

Protocol

פרוטוקול הבאה מתארת ​​את תהליך גנרי הכניסה של בונה FSL (איור 1) לתוך ממברנות ביולוגיות. לשם הפשטות הפרוטוקול רק מתייחסים תאים (kodecytes), אשר בריכוז 100%. עם זאת, התאים המונח להחלפה עם virions (kodevirions) או אורגניזמים או מבנים הסלולר ריכוזם diluent לא חשוב, בתנאי זה תמיד עקבי בין הבדיקות, פקדים ניסויים. עם כדוריות דם אדומות נפח תא ארז הוא בדרך כלל 80%, אך עם virions, עוברים לתאים אחרים הוא בדרך כלל פחות מ -1%. השיטה היא מאוד חזקה יהיה לייצר ממברנות שונה כאשר נעשה שימוש על ידי כל הווריאציות שלה, אבל חידוד יידרש כדי לייעל ולתקנן את מידת השינוי הנדרש עבור יישומים ספציפיים.

1. הכנת FSL בונה

1. כדי להכין את לבנות פתרון FSL המניות מחדש הראשון מוצר יבש FSL (לוח 1) על ידי תוספת של 1.0mL של diluent (או כמפורט להכניס את המוצר) כדי בקבוקון את המוצר. בקצרה sonicate (30 שניות). זה יהיה להכין פתרון 1mg/mL, אשר ניתן aliquoted לתוך 100 מיכלים סטריליים μL ומאוחסנים ב 2-8 מעלות עד שבוע, או להקפיא עד 3 חודשים.
2. כדי להכין עבודה FSL לבנות פתרונות עבור הכניסה, ממש לפני השימוש sonicate קצר (30 שניות) הפתרון המניות homogenize כל micelles. לדלל את לבנות FSL במאגר (רצוי לא המכיל שומנים או חומר הידרופובי מאוד) לריכוז הנדרש או על פני טווח אם תרצה בכך.

הערות:

1. בונה FSL בדרך כלל להכניס לתוך התאים בתקשורת שומנים המכילה אך תחייב בדרך כלל ככל ריכוזים גבוהים יותר 50X FSL עבודה מאשר אם PBS או מדיה שומנים אחרים בחינם.
2. דילולים מגוון עובד יהיה תלוי ביישום, הרגישות שיטת הזיהוי, סוג FSL לבנות, ומידת השינוי הנדרש. בדרך כלל בטווח של דילול יהיה בין 10-500 מיקרוגרם של FSL לכל מ"ל של diluent עבור פחמימות בונה FSL ו 1-100 מיקרוגרם / מ"ל ​​עבור אחרים בונה FSL כגון fluorophores ו ביוטין.
3. אם מכינים diluents הכניסה המכילה מספר FSL לבנות, פשוט להוסיף את המבנים יחד diluent באותו הריכוז הרגיל שלהם עובד. אם אחד לבנות הוא בריכוז גבוה הרבה יותר מאשר אחר, התאמה כלשהי (עליה) ריכוז עשויות להידרש לבנות את פחותה. לחילופין ניתן להוסיף בונה ברצף, רצוי עם הריכוז הגבוה ביותר לבנות הראשונה, ואחריה פחותה.
4. FSL ריכוזי לבנות מעל 1,000 מיקרוגרם / מ"ל ​​יכול להציג את כמויות משמעותיות של שומנים לתוך קרום התא, והוא עשוי לשנות את הצורה של התא או להפוך אותו רגישים יותר תמוגה.
5. FSL לבנות פתרונות עובד צריך להיות מאוחסן ב 2-8 מעלות צלזיוס ומשמש בתוך ימים ספורים.
6. בונה FSL יכול להיות מדולל במים אבל יהיה מופחת יציבות ויש להשתמש בו בתוך שעות ספורות. אם העלון מציין מים diluent הכינון מחדש את המוצר הבקבוקון גם מכילים מלחים (כמפורט להכניס את החבילה).

2. החדרת FSL Construct (ים) לתוך ממברנות

1. ראשית לשטוף את התאים עבור FSL שינוי ללא שומנים מאוגד על ידי צנטריפוגה ושימוש PBS או השומנים התקשורת הסלולרי בחינם כפתרון לשטוף.
2. חבילת תאים או להשעות ב 100 μL של diluent.
3. במקביל להכין שולטת בו באופן אידיאלי צריך להיות שני תאים ללא שינוי (מודגרות עם PBS ולא פתרון FSL) ו / או תאים שונה עם שפיר אבל הקשורות FSL לבנות.
4. הוספת 100 μL של דילול המתאים FSL פתרון (המכיל 1 או יותר בונה FSL) אל התאים דגירה של 1-2 שעות ב 37 ° C. תוצאה דומה ניתן להשיג על ידי הדגירה 6 שעות במהירות של 25 ° C או לילה (18 שעות) בשעה 4 ° C - ערבוב מומלץ כל כמה שעות אם השעיות תא כבד משמשים.
5. שטפי (אופציונלי) פעמיים עם PBS או התקשורת להסיר כל בונה חופשי FSL ולהכין ההשעיה המתאים.

הערות:

1. Diluent בשימוש להשעות את התאים ניתן תרבית תאים התקשורת, PBS, פתרונות אחסון בתא, וכו ', אבל עדיף בלי שומנים (למשל עגל בסרום עוברי) או דטרגנטים (למשל tween).
2. כרכים שונים (מ μL 100) יחסי (מ 1:01 תאים / פתרון FSL) או תנאים דגירה של זמן וטמפרטורה ניתן להשתמש בתנאי ריכוז יחס זהה, ועוצמת הקול משמשים כדי להשיג תוצאות לשחזור.

3. טיפול ויזואליזציה

1. לאחר סיום תהליך השינוי FSL הושלמה kodecytes ניתן לאחסן 4-8 מעלות צלזיוס בתקשורת חינם השומנים או בשימוש.
2. Kodecytes ו kodevirions בדרך כלל מתנהגים כמו תאים / virions ללא שינוי וניתן הנדלאד שנצפו תחת מערכות בדיקה רגילה (מיקרוסקופיה, סרולוגיה, cytometry זרימה, וכו '). הם בדרך כלל אין דרישות מיוחדות למעט הסר ממיסים / חומרי ניקוי / שומנים שעלולים elute המבנים שומנים מן הקרומים.

הערות:

1. בונה יישאר הממברנה של תאים פעילים, כגון תאים אדומים, אם מאוחסן תקשורת חופשית השומנים על החיים של התא. בתאים עם ממברנות פעיל בונה יהיה הפנימו ו ​​מטבוליזם, בשיעור התלוי על פעילות קרום התא.
2. תאים מתים בדרך כלל מכילים רמות גבוהות של בונה FSL; זה יכול לשמש כדי להפריד תאים nonviable מתאי קיימא.
3. אם kodecytes מאוחסנים (או השתמשו in vivo) של שומנים המכילה מדיה / סביבות, כגון לבנות את סרום / פלסמה יהיה לאט elute מן הקרום על פני תקופה של שעות או ימים, תלוי בטמפרטורה ריכוזי השומנים / קומפוזיציות.

4. נציג תוצאות:

1. תוצאות נציג הבאים תלויים לבנות בשימוש (טבלה 1), ריכוז מוכנס שלה את הרגישות והספציפיות יחסית של מערכת זיהוי (ים). באופן כללי כל המבנים FSL יוסיף לתאי אחרי שעה 1 אבל את התנאים האופטימליים יהיה צורך הוקמה עבור כל מצב.
2. בונה FSL ניתן להשתמש בתווית מחוץ מגוון רחב של תאים חיים ^3-9,11,14. בדוגמאות שמוצג באיור 2 עוברים בשלבים שונים ששימשו (כפי שהם תא שביר), אבל בתאים אחרים (איור 3) או virions אפפה (איור 4) יכול גם להיות מתויג. FSL-והעמסת מאפשרת תיוג ישיר של משטחים (איורים 2-4), בעוד FSL, ביוטין ועוד בונה FSL עשוי לדרוש את השימוש של מערכת זיהוי משני (בדרך כלל avidin / נוגדנים / לקטינים) כדי להראות את נוכחותם (איורים 5) .
3. קבוצת דם של סמנים סגוליות אדם או בעלי חיים יכול להיות מצורף תאים, כולל תאים אדומים ^4-9 (איור 6). ככל שכמות FSL לבנות על kodecyte הוא לשליטה לשעתקו ^4-6, kodecytes עבור quantitation נוגדן יכול להתבצע (לוח 2 ואיור 6). המקור האמיתי של תאים לא חשוב, הם יכולים להיות כל מיני, או אפילו מאותו המוצא כמקור נוגדנים, ובכך להבטיח את אנטיגן רק בקנה הוא הציג על ידי FSL ^7,8 (איור 6).

טבלה 2. תגובות סרולוגיות נציג של שלושה שונים FSL-A (תלת) kodecytes תא אדום נבדק נגד דילולים של חד שבטיים אנטי. הפתרון של 50 מיקרומטר FSL-A (תלת) כאשר מודגרות עם נפח שווה של קבוצת תאים O אדום חזק המיוצר בתאים אנטיגן חיובי, אשר יכול להיות מזוהים על ידי דילול 1:512 של חד שבטיים אנטי. 5 - ו 10-לקפל התחתון FSL-A (תלת) פתרונות המיוצר kodecytes עם קבוצת דם פחות ביטוי אנטיגן.

1. איור FSL סקירה לבנות. כמו בונה FSL פרח מורכב משלושה מרכיבים עיקריים. ראש פונקציונלי (F) במקרה של FSL ניתן לבנות מגוון של קבוצות פונקציונליות ביולוגית אחרת, spacer (S) שנועדה לגרום המרווח של F מן הקרום, לשפר dispersibility המים להיות לא תגובתי עם סרום, ואילו שומנים diacyl מאפשר לבנות את באופן ספונטני לשלב משטחים. (אני)-FSL GB3 עם קבוצת דם Gb ₃ (או P ^k) trisaccharide Galα4Galβ4Glcβ epitope. (II) FSL-A (משולש) עם קבוצת דם epitope trisaccharide GalNAcα3 (Fucα2) Galβ. (III)-FSL והעמסת. (IV) FSL-ביוטין עם מחצית ביוטין יחיד F. הקבוצה התפקודית של מבנים I-III הם מצומדות כדי נגזרות adipate מופעל על dioleoylphosphatidylethanolamine (סמים) בעוד spacer של מבנה IV הוא carboxymethylglycine-adipate מבוסס.

איור 2. שכותרתו-FSL והעמסת עוברים Murine. כל התמונות הן של עוברים לחיות תויגו כאשר pellucida zona שלהם (ZP) היה תמים (כלומר, לבנות FSL עברו ZP לתייג את העובר בפנים). תמונות I-IV הם ZP ללא עוברים שוחרר מבית ZP שלהם עם תיוג tyrodes הודעה עם חומצה FSL-והעמסת. מכתים זהים מתרחשת ללא קשר לשאלה אם היו עוברים FSL שונה עם ZP שלמים או ZP חינם. עוברים מסומנים ישירות עם FSL-והעמסת, לפי שעה 2 37 ° C שיטה בסרום בתקשורת תרבות חופשית לתא, שטף ואז לראות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. (אני) ZP חינם שני תאים העובר Murine, מכתים גם מראה קלאסי אינטנסיבי הגוף הקוטב. (II-III) ZP חינם ארבעה תאים לשמונה עוברים תא Murine, הן מכתים צללים מראה של תאים אשר פסקיIDE המטוס מיקרוסקופ של המוקד. (IV) ZP חינם 16 תא Murine העובר. (V) ZP שלמים עוברים Murine הבלסטוציסט (D4-D5) שבו הן את העובר ואת zona מסומנים.

איור 3. FSL-והעמסת ו ¹⁴ דג הזברה. (אני) Microangiography על זחלים 52 (שעות שלאחר ההפריה) דג הזברה hpf מוזרק ישירות לתוך מחזור הדם עם FSL-והעמסת. Vasculature דג הזברה הוא מוכתם. (II)-FSL והעמסת הטרוגניים דג הזברה רקמות הכליה תאים (הוועד המרכזי kodecytes) נוצרו vivo לשעבר אז מיקרו מוזרק לתוך מחזור הדם של דג הזברה 52 hpf הנמען. בתצפיות vivo של הוועד המרכזי kodecytes נעשו 2 שעות הזרקה הודעה על ידי הדמיה של vasculature תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי עם זמן לשגות. מוצג הוא מסגרת וידאו אחת עם תאים איטיים או תנועה גדול (מסומן בחצים כתומים) ותאי זז מהר (תמונות מטושטשות בגלל התנועה - הצביע עם חצים ירוקים). תיוג מאפשר בזמן אמת בהתבוננות vivo של ההתנהגות biodistribution kodecytes הוועד המרכזי. (III) ספיגת שבעל פה של FSL-והעמסת מושגת על ידי טבילה עוברי דג הזברה ב-FSL והעמסת המכיל התקשורת של עד 5 ימים. כביסה הושגה על ידי העברת העוברים לתוך מדיה המכילה לא בונה FSL (לפחות 6 שעות נדרש אך ניתן במשך כמה ימים). (IIIa) בשדה מיקרוסקופיה מוארת של דג הזברה-FSL והעמסת התייחסו המקביל התמונה פלואורסצנציה סמוכים (IIIB). Fluoresence היה ממוקם מעדיפים במעיים. מכתים לא נצפתה עוברים קבוצת הביקורת (IVA ו IVb).

4. באיור-FSL והעמסת תיוג של virions ¹⁰ VSV ו-H1N1. (אני) וירוס stomatitis שלפוחי (VSV) סומן ישירות 37 עם 10 מיקרוגרם / מ"ל ​​FSL-והעמסת עבור 2 שעות ° C, ואחריו תיקון עם paraformaldehyde 4% ולאחר מכן cytometry הזרימה. טיהור לא של kodevirion VSV הודעה FSL תיוג נדרש. (II) cytometry זרימה של תאים האשכים החזירים שנדבקו אדם / פורטו Rico/8/1934 (H1N1) kodevirions שכותרתו באמצעות FSL-והעמסת. תאים נגוע נתפסים הפס השחור תוך שילוב של kodevirion H1N1 עם תוצאות תאים ST בתא ניאון (קו אדום).

איור 5. FSL-ביוטין תאים שכותרתו להדמיה הבאים דרך avidin שכותרתו ^7,8. כל התאים תויגו הראשון h 1 ב 37 ° C-FSL עם ביוטין, שטף הגיב אז עם fluorophore שכותרתו avidin, שטף ורטוב רכוב על מיקרוסקופ פלואורסצנטי. (אני) מלוקט תמונה confocal של הבלסטוציסט עובר Murine. (II) פרוסה confocal המרכזית של העובר מהתמונה הקודמת. (III) חיה ניעתי בזרע אנושי - טשטוש מתרחשת כתוצאה של תנועה שלהם. (IV) קבועה (4% שלאחר הכניסה paraformaldehyde) בזרע אנושי. (V) האדם כדורית אדומה. (VI) קבוע (4% paraformaldehyde טרום הכניסה) RL95 קרצינומה של רירית הרחם האנושי. (VII) מבולבל RL95 תא אנושי קרצינומה של רירית הרחם קו. (VIII) ביוטין RBC kodecytes שנצפתה דגימת דם נלקחה 2 שעות שלאחר עירוי תוך ורידי של kodecytes עם (VIIIa) המייצג שדה שנצפו תחת מיקרוסקופ אור בזמן (VIIIb) הוא אותו שדה שנצפו תחת הקרינה, זיהוי שני kodecytes הנוכחי בתחום של נוף. חישוב היחס בין kodecytes לתאי ללא תווית ניתן להשתמש כאינדיקטור של הישרדות. (ט) חיה אנושית kodecytes ביוטין רירית הרחם דמיינו באמצעות קשירה חרוזים avidinylated.

איור 6. FSL פחמימות להוסיף קבוצת סמנים בדם עבור פרופיל serologic. (I) אדם אדום תא kodecytes גלילי שנוצרו עם ריכוז קבוצה של FSL-גלילי (500 מיקרוגרם / מ"ל) ונבדקו נגד דילולים של נסיוב אדם. תאים אדומים האדם לא להתרחש באופן טבעי עם האנטיגן xenoantigen גלילי. Kodecytes כזה יכול לשמש כדי כמותית של רמות נוגדנים בסרום. בדוגמה זו התורם היה נחוש בדעתו יש titre נגד גלילי של 1:32. (II) על ידי יצירת kodecytes עם רמות ירידה של FSL ("titres אנטיגן"), רמת אנטיגן אופטימלי לאיתור נוגדנים ניתן לקבוע (בדוגמה זו לה ^א). תאים יכולים להיווצר רק לתת תוצאה חיובית כאשר רמת נוגדנים חורגת titre ספציפיים. רמת אנטיגן FSL נדרש לתת תוצאה חיובית תלוי באיכות ורמת נוגדנים שיראו. עבור אנטיגנים פחמימות, פתרון FSL של 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​יהיו בדרך כלל תוצאה של תגובה חיובית חזקה. (III) אדם קבוצה O תאים אדומים שונו יש רמה מסוימת של נמלהigen (סטנדרטית kodecytes), וכן משמש לכמת במדויק reproducibly אנטי בנסיוב האדם. בדוגמה זו נגד titre ב O קבוצה סרום נבדק היא 01:32 ואת kodecytes הוכנו מן התאים האדומים של התורם עצמו. (IV) קבוצת דם A ו-B אנטיגנים בעת ובעונה אחת מוכנס לתוך מדגם קבוצה אחת O תא אדום המשמשים ליצירת kodecytes B _{חלש חלש.} Kodecytes אלה יכולים לשמש למטרות בקרת איכות ABO. תוצאה זו מציגה ניתוח של kodecyte B גיבש במיוחד _{חלש חלש} נבדק נגד ריאגנטים אנטי ואנטי B ונותן צפוי תגובות חלש.

Discussion

תאים שינוי ו virions עם בונה FSL היא טכניקה פשוטה מאוד חזקים ^3-11. כדי לתאר ולהבחין FSL לבנות תאים שונה ו virions מתאי ללא שינוי, הם מכונים kodecytes ו kodevirions בהתאמה ^6-10, אך רק כאשר הקבוצה הציגה תפקודית ניתן להראות להיות נוכח על הממברנה שלהם. כאשר kodecytes מיוצרים עם ריכוזים שונים של מבנים FSL, הם יכולים להיות מכונה על ידי ריכוז של הפתרון FSL לבנות השתמשו כדי ליצור אותם, למשל 15 מיקרוגרם / מ"ל ​​kodecytes, או אם אחד או יותר FSL לאחר מכן נעשה שימוש במונח משולב, לדוגמא: A + ביוטין kodecytes ^7,8. כאשר תאים שונים כדי להשוות, לרבות סוג תא בתיאור מומלץ, למשל אדום ביוטין תא kodecytes או kodecytes ביוטין רירית הרחם ^7,8.

למרות תהליך הכניסה היא מאוד חזקה הכניסה (אמנם עם תעריפים שונים) תתרחש על פני טווח טמפרטורה גדול 4-37 ° C ו בתוך דקות עד שעות, כדי להשיג שליטה הכניסה לשחזור קפדנית של זמן מגע, טמפרטורה, ריכוז FSL ( כולל ניסוח diluent), וכן ריכוז במידה פחותה תא נדרשים. עד היום, כל המבנים FSL ניתן להשתמש כדי לשנות את התאים על ידי טכניקה זהה ^4-11, אולם צפוי כי בתנאים מסוימים יהיו נוחים יותר זרימת עבודה ו / או בדרישות הטיפול האופטימלי של התאים / virions להיות שונה . הריכוז המדויק FSL כדי להשיג את האפקט הרצוי צריך להיקבע על ידי המשתמש ^4. FSL כתוצאה לבנות תאים שונה / virions בדרך כלל ניתן להשתמש באותו אופן כמו תא virion ללא שינוי / במערכות ביולוגיות או אנליטי ^4-11. כמו בונה FSL יהיה לאט elute ממשטחי שונה כאשר במגע עם בתמיסות ^7,8, או להיות נצרך על ידי תאים פעילים ^11, נושאים אלה יש לקחת בחשבון ביחס לרמת האות או פעילות שהושגו על פני תקופות זמן. Kodecytes יכול להיות קבוע (למשל glutaraldehyde / פורמלין) לאחר הכניסה בתנאי מקבע אינו מכיל שומנים משחררי ממיסים את הקבוצה פונקציונלי תואם מקבע. תאים קבוע לחילופין יכול להיות שונה עם בונה FSL.

בנוסף לשינוי של משטחי תאים virion בונה FSL יכול גם להיות חדורים ישירות למחזור הדם של חיות מעבדה גרימת שינוי vivo של תאים במחזור ⁷ ו לעכב ¹² וירוסים, רעלים, ¹² ונוגדנים ^7. בונה FLS יש גם שימש לקשט ליפוזומים והוא יכול להיות מודפס על גבי משטחי נייר ^13, שם הם לשתק, ולאחר מכן יכול לשמש מבחני אבחון.

היכולת לשנות בקלות תאים חיים עם מגוון הולך וגדל של בונה FSL צריך להוכיח להיות מחקר שימושי כלי פיתוח לחקר הביולוגיה פני התא.

Materials