למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.

Summary

אנו מתארים שיטה ליצירת מודל אמין של יתר לחץ דם ורידים במוח בעכבר הבוגר. מודל זה תואר בהרחבה ונבדק בחולדה. עמית החדש בעכברים פותח את האפשרות של שימוש בבעלי חיים מהונדסים גנטיים ובכך מרחיב את היישומים של המודל.

Abstract

ההבנה של הפתופיזיולוגיה של מומים arteriovenous מוח וfistulas arteriovenous השתפרה הודות למודלים של בעלי חיים. מודל חולדה יצירת פיסטולה מלאכותית בין עורק התרדמה המשותפת (CCA) ווריד הצוואר החיצוני (EJV) תואר בהרחבה והוכיח אפשרי מבחינה טכנית. מבנה זה מעורר יתר לחץ דם עולה בקנה אחד מוחין ורידים (CVH), ולכן סייע לומד את תרומתם של יתר לחץ דם ורידים להיווצרות, תסמינים קליניים, והפרוגנוזה של AVMs המוח וAVFs dural. מודלים בעכברים מקבילים תוארו רק בקושי והראו בעיות עם היצרות של פיסטולה. מודל עכברי הוקם יאפשר המחקר של הפתופיזיולוגיה לא רק, אלא גם טיפולים גנטיים למחלות כלי דם במוח פוטנציאליים אלה.

אנו מציגים מודל של פיסטולה arteriovenous שמייצר יתר לחץ דם ורידים תוך גולגולתי עמידה בעכבר. o השקה מייקרוf העכברית CCA וEJV יכולים להיות קשה בשל האנטומיה זעירה ולעתים קרובות לגרום לפיסטולה אינו פטנט. בפרוטוקול צעד-אחר-צעד זה אנו מטפלים בכל האתגרים החשובים נתקלו במהלך הליך זה. הימנעות הכחשה מופרזת של הווריד במהלך החשיפה, באמצעות 11-0 תפרים במקום 10-0, ומה שהופך את השקה קצה לצד מתוכננת בקפידה כמה שלבים הקריטיים. למרות ששיטה זו דורשת מיומנות מייקרו מתקדמת ועקומה למידה ארוכה יותר ששווה הערך בחולדה, זה יכול להיות מפותח באופן עקבי.

מודל חדשני זה תוכנן לשלב טכניקות עכבר מהונדסים עם מערכת ניסיונית בעבר ומבוסס שהוכיחה שימושי ללמוד AVMs המוח וAVFs dural. על ידי פתיחת האפשרות של שימוש בעכברים הטרנסגניים, ספקטרום רחב יותר של דגמים תקפים ניתן להשיג והוא יכול להיות גם נבדקו טיפולים גנטיים. המבנה הניסיוני גם יכול להיות מותאם בהמשך למחקר של otמחלות כלי דם במוח הקשורים עם יתר לחץ דם ורידים כגון מיגרנה, אמנזיה הגלובלית חולפת, עיוורון משקפת חולף, וכו '

Introduction

מודלים של בעלי החיים של יתר לחץ דם ורידי המוח הוכיחו להיות כלי מרכזי בהבנת הפתופיזיולוגיה של מומים arteriovenous מוח וfistulas arteriovenous ^1-7. שימוש נרחב ביותר הוא מודל העכברים שנוצר באמצעות פיסטולה מלאכותית בין עורק התרדמה המשותפת (CCA) ווריד הצוואר החיצוני (EJV), אשר מעורר יתר לחץ דם ורידים במוח עולה בקנה אחד (CVH) בחולדה ^1,8-10. מודלים בעכברים שווי ערך, על ידי פתיחת האפשרות לשימוש בזני עכברים הטרנסגניים שונים, יאפשר מחקר נוסף על הפתופיזיולוגיה לא רק, אלא גם טיפולים גנטיים למחלות כלי דם במוח פוטנציאליים אלה. יתר על כן, המבנה הניסיוני יכול גם להיות מותאם בהמשך למחקר של מחלות כלי דם במוח אחרות הקשורים עם יתר לחץ דם ורידים כגון מיגרנה, אמנזיה הגלובלית חולפת, עיוורון משקפת חולף, וכו ^'11 עם זאת, ניסיונות קודמים להקים h מודלים בעכברים אלהave הפגין קשיים עם patency של פיסטולה בשל האנטומיה הזעירה ^5,12. כאן אנו מתארים פרוטוקול צעד-אחר-צעד שלנו להשקה מוצלחת של העכברי CCA וEJV שמיתרגם פיסטולה פטנט לטווח ארוך ויתר לחץ דם ורידים עמיד בעכבר.

Protocol

1. הכנת העכבר

1. לגרום להרדמה כללית בעכבר עם גז isoflurane. להזריק 0.15 מיליליטר של brupenorphine intraperitoneal לניהול כאב. לפני שימשיך, לבדוק אם רמת ההרדמה היא משביעה רצון על ידי לדקור כפות של העכבר.
2. שים את העכבר שכיבה על גב עם ארבעה הגפיים קבועים על ידי דבק. להסיר את השיער של הצוואר וחזה העליון עם מספריים. באמצעות הזרקה תת עורית, לנהל .2-0.4 מיליליטר של תמיסת מלח 0.9% כדי לשמור על עכבר התייבשות במהלך ההליך הכירורגי.
3. הכן את שדה הניתוח הבא שיטה סטרילית קפדנית. האזור של החתך בעור יש לנקות עם אלכוהול 90%.

2. ביתור עורקי התרדמה המשותפת והחיצוני הצוואר הווריד

1. לעשות חתך בצוואר הרחם קו האמצע אופקי על פני אזור הצוואר התחתון של העכבר. לאחר העמקת הפצע, לרומם את בלוטות רוק ורקמות רכות בצוואר הרחם באמצעות בתפר raction (איור 1). לחשוף את הווריד הנכון החיצוני הצוואר (EJV) לרוחב לשריר sternocleidomastoid (SCM). צעד זה צריך להתבצע תחת מיקרוסקופ, מאז מתיחה מוגזמת על הווריד עלולה לפגוע בו ולגרום לפקקת שלה.
2. זהירות לנתח EJV תקין לאורך מסלולו מעצם הבריח לבסיס הגולגולת. בדרך כלל מלקחיים דו קוטביים חשמליים, להקריש ולחלק כל סניפים להכין אורך מתאים למיקום מאוחר יותר הזמני קליפ וההשקה.
3. לרוחב לקנה הנשימה והמדיאלי לSCM, לחקור את עורק התרדמה המשותף (CCA). יש לחשוף אותו בזהירות מעצם הבריח רק כדי מעבר הסתעפות שלה לתוך עורקי הראש החיצוניים ופנימיים. במהלך שלב זה, יש לתת תשומת לב שוב כדי למנוע מתיחת יתר לEJV שמאוחר יותר עלול לפגוע בpatency של ההשקה.

3. הכנת ההשקה

1. לקשור את המרכז לאמנות עכשווית בניו יורק 10-0לון רק הפרוקסימלי להסתעפות שלה. בשלב הבא, תחול קליפ זמני על הפרוקסימלי CCA הקרוב לעצם הבריח ככל האפשר.
2. ברגע שהזרימה הופסקה, תחצה את העורק ממש מתחת למייתר הסתעפות ולהשקות אותו עם מי מלח כדי לשטוף את כל דם שנותר בתוך לומן. הימנע קרישה דו קוטבית בשלב זה, מאז פציעה התרמית לקיר העורק יכולה לשים את ההשקה העתיד בסכנה.
3. על מנת לשפר את הנראות של הקצוות של EJV, הקיר המדיאלי מסומן עם עט סימון כחול לאורך המסלול של venotomy המתוכנן. ברגע שEJV מסומן, להשתמש תפר 10-0 ולקשור את הקצה הדיסטלי כזנב ככל האפשר ולהחיל קליפ כלי דם זמני על הקצה הפרוקסימלי כגולגולת ככל האפשר.
4. עם מזרק 30 מחט G ו 0.5 מיליליטר בסדר, להפוך את צמצם ראשוני על האזור המסומן של EJV ומייד להשקות את לומן עם מי מלח כדי למנוע היווצרות קרישי דם. בשלב הבא, להאריך את venotomy עם microscissorsעד האורך הוא כ 2-3 פעמים הקוטר של המרכז לאמנות העכשווית. הימנע אלים מתיחה ולשים לב כדי לשמור על חוד החנית חד ומסודר.
5. בקירוב את סוף CCA לEJV. לעשות חתך לחתוך צד בסופו של התורם של המרכז לאמנות העכשווית כדי להתאים את הקוטר לאורך לגודל venotomy (איור 2).

4. קצה לצד השקה

1. השתמש תפר ניילון 11-0 monofilament להשקת קצה לצד המרכז לאמנות עכשווית לEJV. תפירת הקיר המדיאלי של ההשקה בכיוון craneo-הזנב היא הצעד הראשוני. כל תפר צריך להיות ממוקם מחוץ-בקיר הוורידים הראשון (איור 3) ומבפנים החוצה דפנות העורקים (איור 4) הבא. זה יהיה לשמור על הקשר על פני השטח החיצוניים של כלי anastomotic בכל העת (איור 5). כך או מופרע או ניתן להשתמש תפרים רציפים, אבל כל התפרים רציפים יש להדק כשלב הסופי.
2. Oפליטות הקיר המדיאלי כבר נתפר, לחזור על התהליך מהזנב לגולגולת עם הקיר לרוחב. עכשיו כל תפר צריך להיות ממוקם מחוץ-בקיר העורק ראשון וממבפנים החוצה קיר הוורידים הבא. השקיה מלוחה תעזור לשמור על לומן של ההשקה גלויה בכל העת במהלך ההליך.
3. לאחר שסיים את כל השלבים של ההשקה, להסיר את הסרטון הזמני מהווריד ראשון ומהעורק הבא. דם העורקים יזרום לתוך EJV עם דליפה קטנה אין או מההשקה (ראה קטעי וידאו דגם VH ומודל VH ^2). הדימום המינימלי צריך להפסיק ללא שימוש בדחיסת צמר גפן מעל להשקה. זה יש להימנע כדי למנוע פקקת של הווריד העדין.
4. ברגע שpulsatile לזרום דרך ההשקה הוא אישר ולא דימום לכאורה הוא ציין, להשקות את שדה הניתוח עם מי מלח ולסגור את החתך בצוואר הרחם עם תפר 6-0 ניילון. לבסוף, לנהל 0.15 מיליליטר יותר של intrapbrupenorphine eritoneal לניהול כאב שלאחר ניתוח ו.2-.4 מיליליטר של תמיסת מלח 0.9% תת-עורי לחדש כל איבוד דם במהלך הניתוח.

תוצאות

תוצאה מוצלחת של המודל היא פיסטולה arteriovenous פטנט שגורמת יתר לחץ דם ורידים במוח העכברי. כדי לאמת את המודל שנמדדנו לראשונה הלחץ תוך גולגולתי בורידי סינוס sagital של העכברים ב 2, 3 ו -4 שבועות לאחר ניתוח. 6 עכברים אחרים מונו לכל קבוצת זמן. לחץ סינוס היה 8.8 ± 1.2 מ"מ כספית בקבוצה נמ?...

Discussion

יתר לחץ דם ורידים במוח שנגרם כבר קשור באופן הדוק עם ביטויים קליניים חמורים יותר ופרוגנוזה גרועה בחולים עם AVFs dural וAVMs המוח ^3. תופעות אלה של CVH נחקרו בהרחבה במודלים של עכברים ^1,2,8. מודל מקביל בעכבר יאפשר את השימוש בבעלי החיים מהונדסים גנטי שסופו של דבר יאפשר הנ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10-0 Sterile Microsuture	Arosurgical Ic.	VT5A010Q10
11-0 Sterile Microsuture	Arosurgical Ic	VT4A00N07
DUROTIP Scissors	Aesculap	BC210R
Micro-Adson Tissue Forceps	Aesculap	BD510R
Microscissors	Aesculap	OC496R
Micro Forceps #5 Jewelers	Aesculap	BD331R
Angled Jewelers Forceps	Aesculap	BD329R
Micro Suture Forceps	Aesculap	BD338R
DUROGRIP Needle Holder	Aesculap	BM009R