ניטור המושבה ברמת ההשפעה של ההדברה לא קטלני על דבש דבורים

Summary

מינונים לא קטלני של חומרי הדברה עלולה להשפיע על מושבות בדרכים שאינן קשה לזהות באמצעות שיטות תקופתיים או ויזואלי בלבד. שיטות למדידת מסה הכולל דבורה למבוגרים, דגירה, מקורות מזון על ידי שקילה כוורות וחלקים הכוורת, צילום מסגרות התקנת חיישנים, הינם מסופקים. ניתוח נתונים מופנית גם.

Abstract

ההשפעות של חשיפה לחומרי הדברה לא קטלני דבש ג'וקים עשוי להיות משמעותי אבל קשה לזהות בשדה תוך שימוש בשיטות הערכה חזותית סטנדרטי. כאן נתאר שיטות למדוד את הכמויות של דבורים למבוגרים, דגירה, מקורות מזון על ידי שקילה כוורות וחלקים הכוורת באמצעות צילום מסגרות, על-ידי התקנת כוורות על סולמות, עם חיישנים פנימיים. נתונים אלה הערכות תקופתיות משולבים מכן עם נתונים detrended ממוצע יומי פועל כוורת המשקל והטמפרטורה כוורת פנימי. Datasets וכתוצאה מכך שימשו כדי לזהות השפעות המושבה ברמת imidacloprid המוחלת בסירופ סוכר נמוך כמו 5 חלקים לביליון. השיטות הן המטרה, דורשים הכשרה מועטה, לספק רשומות קבוע בצורה של חיישן פלט וצילומים.

Introduction

חששות הועלו לאחרונה לגבי חשיפת דבש דבורים ריכוזים נמוכים של אגרוכימיה, במיוחד בחומרי הדברה. דבש דבורים בשדה עלול להיות חשוף באמצעות יישום ישיר על איוראו בשדה, או אפילו את המושבות עצמן, על ידי מגע עם משטחים שטופלו על ידי אבק טיפולי זרעים, על ידי הצריכה של מוצרים מהצומח כגון אבקה, צוף, תפליט^{1 , 2 , 3 , 4 , 5}. רעילות חריפה מזיקה בבירור דבש דבורים, אולם הריכוזים כי גורם התמותה 50% בחרקים מבחן (LC₅₀) של חומרי הדברה רבים, כולל neonicotinoids כגון imidacloprid, הם גבוהים יותר אצל דבורה לחם שעווה⁶ ו נחשב גבוה יותר מהו טווח "שדה ריאליסטי"⁷. עם זאת, עבודה אחרונים הראו תופעות משמעותיות של חשיפה לא קטלני חומרי הדברה המושבה רמת⁸, אפילו עבור ריכוז נמוך כמו 5 חלקים לכל מיליארד (ppb)⁹.

דבש ג'וקים יש מכונה "superorganisms" כי פונקציות רבות המשויכות חיה בודדים, כולל רכש מזון, רבייה (איזה מותק ג'וקים לנהל באמצעות ביקוע המושבה), ובקרת טמפרטורה, בניצוחו של קבוצות של העובד למבוגרים דבורים^{10,11,12,13,14}. דבש דבורים מושבות, נחשב אורגניזמים, מציעים הזדמנות ייחודית ללמוד כי המבנים התומכים המושבות המורכבים, בחן, והרכבנו עם, אם נעשה בזהירות, מעט או ללא תופעות לוואי. מגדלי דבורים וחוקרים לנצל זאת על ידי פירוק כוורות לבחון אותם, בין היתר, את הנוכחות ואת המצב של תנאי הכרחי המלכה, מזיקים, פתוגנים, חנויות מזון, כמות של ברוד, ושאר גורמים¹⁵. ג'וקים יש עוד מאפיין חשוב, שלא כמו רוב homeotherms, הם הם בדרך כלל נייח כולל אפשרות להשיג את המשאבים על-ידי פריסת דבורים באיסוף יכול לאסוף מזון במרחקים עד 10 ק מ¹⁶. כוורות דבורים יכול ובכך להישמר לצמיתות על מאזניים אלקטרוניים, הנתונים המתקבלים משקל רציפה הוכח לספק מידע על דבש אחסון, שיחור מזון פעילות, שיחור מזון הצלחה, שורצים, סירופ הצריכה, קטלנית, לא קטלני חומרי הדברה, הדברה התפשטות ואפקטים שודד^{9,17,18,19,20}. כי כל חלקי של המושבה, כולל דגירה, ניתן לגשת, חיישני טמפרטורה, לחות, CO₂, קול, ושאר גורמים יכול להיות מותקן בתוך הכוורת ומשמש להשיג רציפה לנתונים אשר להודיע על בריאות ועל מצב של המושבה ²¹.

הערכות של הגודל של דבורה מבוגרים ואוכלוסיות שבוחרים שימושיים אם לא קריטי עבור פענוח סוגים רבים של רציפה לנתונים. הערכות החזותי מהר שנזיל יוחלו לימודי שדה²² אך יש חסרונות. רדיוגרפיה נערכים בדרך כלל במהלך היום, ולכן חשבון עבור דבורים הרעיה, אשר יכול לחבר חלק משמעותי של אוכלוסיית²³. הדיוק ואת הדיוק של הערכות של צילומי רדיוגרפיה גם תלוי הכשרתם וניסיונם של inspector(s). אובייקטיביות היא שיקול נוסף, במיוחד אם לפקחים כוורת מודעים כוורות מהם אילו קבוצות טיפול; הנחות על חלוקת השגיאה של אמצעים כאלה עשוי להיות קשה כדי להצדיק.

קצב של כוורת במשקל, גודל האוכלוסייה הרעיה, ואת הטמפרטורות בתוך הכוורת, לספק דוגמאות בודדות, יהיה צפוי להיות שונה באופן כמותי בין מושבות גדולות וקטנות, אז מדידה ושליטה עבור גודל המושבה לעתים קרובות מאוד מקלה על הגילוי של תופעות הטיפול בניסויים אקראי. למטרות מחקר, מדד אובייקטיבי ומדויק של הדבורים למבוגרים פותחה מבוסס על העיקרון כי ההבדל בין הכוורת סה כ משקל במהלך תקופה של חוסר פעילות, כגון בלילה, הסכום של המשקל של כל החלקים כוורת (כולל woodenware שעווה, מותק, דגירה) של משקל של הדבורה למבוגרים הכולל המוני. על ידי מסגרות שקילה ומדידת שבוחרים המסה באמצעות מסגרת תמונות, מקורות מזון יכול גם להיות מוערך על-ידי חיסור המסה שבוחרים ממשקל מסגרת, אחרי המשקולות של המסגרת הריקה, השעווה. שיטות אלה נועדו לשפר הדיוק לצפות הערכות חזותי בשדה.

Protocol

הפרוטוקולים המתוארים להלן בצע את ההנחיות טיפול בבעלי חיים של שירות המחקר החקלאי של משרד החקלאות-

1. הערכה מלאה

הערה: הערכה מלאה יש צורך לקבוע 1) המשקולות של כל החלקים הכוורת, כולל את המכסה, כיסוי, תיבות, הלוח התחתון, מסגרות, 2) כמויות של דגירה ומקורות מזון. המשקולות של כל החלקים כוורת לסכם, להחסירו המשקל הכולל כוורת כאשר כל הדבורים נכחו להניב את המשקל של כל הדבורים למבוגרים. נתונים על המשקלים של חלקים כוורת במידה רבה קבועים, כגון המכסה, הלוח התחתון ו box(es), ניתן להיעזר, וישמשו בעתיד הערכות, ובכך לזירוז ההערכות. לבצע הערכה מלאה ליד או תחילת המחקר. חלקי עץ עשוי להשתנות מבחינת לחות תוכן ²⁴ אז אני חוזר הערכות מלא מומלץ לאחר תקופות ארוכות. שוקלים לחלק הכוורת, כגון המכסה,-כל הערכה כדי להעריך שינויים בחלקים אחרים הכוורת. למקם את פרוזדור ממוסך סביב העובדים, כוורת במהלך ההערכה אם כוורות אחרות נמצאים בקרבת מקום, שודד לחץ היא דאגה.

1. שוקל כל החלקים הכוורת. השתמש בקנה מידה עם דיוק של 1 g או פחות-
   1. שוקל את המכסה, חיפוי פנימי, המלכה excluder, סירופ מזין, בחלקים אחרים על הכוורת.
   2. באמצעות כלי מרית או כוורת, להסיר, ולשקול כל חומר מזון או טיפול, כגון תוספת חלבון או שומן פטי, נח על החלק העליון של המסגרות. להחליף לאחר מכן במידת הצורך.
   3. מקום קופסת כוורת ריק (להלן " תיבת זמני ") ליד הכוורת כדי לשמש כמיקום המעבר עבור המסגרות. הצב את תיבת זמנית על גבי משטח שטוח, כמו מכסה או לוח התחתון, כדי למנוע דבורים, והמלכה במיוחד, מנפילה מחוץ לקופסה על האדמה.
   4. להעביר את המסגרות במהירות ובעדינות, רצוי בקבוצות של שניים או שלושה כדי לשמור על חלקי האשכול דבורה, לתיבה זמני אז המסגרות הם באותו סדר כפי שהיו בתיבה המקורית. לאחר כל המסגרות הועברו, לנער כל שנותר דבורים על המסגרות הזמניים תיבת ולשקול את תיבת כוורת.
   5. אם הקופסה הייתה בתיבת הנמוך, שוקלים הלוח התחתון, כמפחית כניסה כוורת בחלקים אחרים לאחר רועד הדבורים לתוך התיבה זמניים. מספר מסגרות עם סמן בלתי מחיק לפני העברתם אז הם יכולים להיות מוחלפים בכיוון המקורי שלהם-
   6. מחדש את הלוח התחתון, כמפחית הכניסה, תיבת שבוחרים וציוד אחרים. לעבור את המסגרות מהתיבה זמני בחזרה אל תיבת שבוחרים המקורי הסדר המקורי שלהם, כיוון, שוב לטפל כדי למנוע הפרעה מיותרת של הדבורים.
2. להסיר מסגרת מקצה אחד של תיבת ולבדוק ויזואלית צידי המסגרת לנוכחות של המלכה. אם המלכה, הנח אותה בעדינות בחלק של התיבה כבר יוערכו, כדי למנוע הפרעה. לנער הדבורות בעדינות אך בחוזקה לתוך תיבת בין מסגרות, ולא על טופ, במידת האפשר.
3. שוקל את המסגרת ולצלם צידי המסגרת כולה באמצעות מצלמה דיגיטלית, מקבל קרוב ככל האפשר למסגרת אז הכתיר דגירה דבש תאים נבדלים בקלות, אבל במרחק מספיק אז כל המסגרת הינה כלולה. לצלם את המסגרת, בעוד העובדים מחזיקה את זה
   1. שימוש ' בעל מסגרת ' (כל פאזל מחזיקה את המסגרת זקופה בעת בסולם, מאר לא המסרק) בסולם. שוקל את המזינים סירופ בתוך הכוורת.
      הערה: גודל המסגרת בתמונה ישמש כדי להמיר פני שטחים מ ביחס אמצעים מוחלטת.
4. להחליף את המסגרת במקומו המקורי ואת הכיוון בתיבת הכוורת. להסיר את המסגרת הבאה לפני התקנה מחדש של המסגרת הקודמת כדי לספק מקום נוסף בבטחה לנער דבורים בתוך התיבה. לבדוק נוכחות של המלכה, לנער להסיר דבורים, שוקלים, צילום ולהחליף כל מסגרת הבאים עד שיסתיים העיבוד של כל המסגרות-
5. אם הכוורת יש שתי תיבות או יותר, שוקלים ולצלם מסגרות מהתיבה הנמוך קודם.
   1. להסיר העליון בתיבה או בתיבות באופן רציף, לערום אותם ליד הכוורת הפוך לסדר המקורי שלהם. ברגע התיבה התחתונה יוערכו, הצב את תיבת הבא תוערך על הקופסא התחתונה, מקם את תיבת זמנית על גבי בשאר התיבות ללא ולהזיז מסגרות מהתיבה השניה אל תיבת זמני, כאמור לעיל. תעביר את המסגרות שלהם תיבת המקורי, בכיוון המקורי שלהם-
      הערה: באמצעות בדיקת בתיבות התחתון הראשון, מזועזעת דבורים ייפול לתוך תיבה כוורת כבר לא להיות מוטרד.
6. להשיג את המשקל הכולל כוורת בתקופה האחרונה של חוסר פעילות, כגון הלילה או בשעות הבוקר המוקדמות לפני הדבורים טסים ביום של ההערכה. המשקל הזה מייצג את כל המושבה כולל את איוראו.
7. לחשב את המסה דבורה למבוגרים על-ידי סיכום המשקולות של כל חלקי כוורת (woodenware, מסגרות, דבורה הזנה, וכו ') ולאחר מכן החסרת הסכום מ " סה כ משקל כוורת " ערך שהושג בשלב הקודם. ההבדל בין השניים הוא הערכה של הדבורה למבוגרים מסצ'וסטס
   הערה: לאחר האבחון המלא התנהלה, הערכות הבאים יכול להתבצע על בסיס חלקית, בהנחה שהחלקים למסגרת הכוורת, כגון התיבות ו הלוח התחתון, לא השתנו ניכרת במשקל. הערכות חלקית לקחת פחות זמן.
8. לערוך בדיקה חלקית על כוורת עם תיבה אחת, להסיר, לצלם, שוקל ולהחליף את המסגרות מבלי להעביר מסגרות תיבה זמניים. בכוורת תיבות מרובים, בצע ההליך כמתואר לעיל (שלב 1.5), אך ללא שקילה בתיבות הכוורת.

2. התקנה של כוורות על סולמות

הערה: המאזניים כוורת השתמשו במחקר זה הן ספסל אלקטרונית חיצונית סולמות עם קיבולת מקסימלית של פחות 100 ק ג, לדיוק תא המטען של חלק אחד 5000 עם פיצוי טמפרטורה, ו- a במחבת בגודל של 460 מ"מ x 610 מ"מ. סולמות אלו מחוברים מחוון VDC 24, אוגר נתונים של 12 סיביות. מחוון פלט עשוי להיות דיגיטלי או אנלוגי; מערכות סולם המשמש כאן היה פלט mA, נדרש כיול עקומות כדי להמיר נתונים ספקית

1. להרחבה מדרגית התקנה על משטח מוצק ומאוזן.
   הערה: היא מרוממת את המאזניים מן הקרקע באמצעות בלוקים מבטון או קרמיקה, או חתיכות עץ מיובשות הכבשן, ישמור הסולם ואת חיבורי חשמל מלבוא במגע עם אדמה או מים-
2. מכסים את התבנית סרגל עליון עם פלסטיק, בד, קרטון או חומר אחר כדי למנוע השתקפות אור מוגזמת וחימום של הכניסה לכוורת.
3. ודא כניסות נוספות כדי כוורות כי הם קרובים זה לזה הפנים כיוונים שונים כדי לצמצם את הסחף בין המושבות.
4. כיול כוורת מאזני בעת ההתקנה ולאחר מכן מעת לעת, במיוחד אם המאזניים מועברים.
   1. מקום סולם משקולות כיול על שקילת פאן ולהקליט את הפלט בקנה מידה. להבטיח כי העובי הכולל עולה על 50% של הקיבולת המרבית של הסקאלה-
      הערה: אם הפלט סולם הוא מתח או ביחידות הנוכחיות, יותר מאשר יחידות מסה, השתמש slope ו- intercept של עקומת כיול (היחסים בין המשקל הכולל ידוע על הפלט פאן וקנה מידה) כדי להמיר פלט בקנה מידה המוני יחידות.

3. התקנת חיישני טמפרטורה

הערה: חיישני טמפרטורה השתמשו במחקר זה היו משני סוגים: 1) ייעוד שונה מחוברת לכבלים מחובר ישירות אוגר נתונים המופעלים באמצעות סוללות (אשר אפשר למקם בתוך או מחוץ כוורת, אם הכבל אינו מספיק זמן); ו- 2) קטן, המופעלים באמצעות סוללות התקנים משולבים חיישנים, אוגרי נתוני, אשר נדרש הוצאתם אל מחוץ לכוורת. נתונים להורדה-

1. קבל חיישן טמפרטורה שיכולים להתאים בין מסגרות, עמיד לתנאי לחות גבוהה על הפנים של כוורת, יש מספיק כוח סוללה וזיכרון (או נגיש, באמצעות כבל או חיבור אלחוטי)-
חיישנים
2. המקום עלול להיות מושפע שעווה או פרופוליס במיכל הגנה, כגון רקמה הטבעה קלטת (קטן, חד פעמיות קופסת פלסטיק עם מכסה snap-סגור, עם חריצי האיוורור). המיכל מגן מפחית את הצטברות שעווה, פרופוליס הסותמים חיישן גישה יציאות של חיישנים או אחרת להשפיע על נתונים להורדה-
3. לצרף את החיישן מתחת הבר העליון במרכז תיבת כדי לספק נתונים אינפורמטיבי על שבוחרים לגידול (ראו להלן).
   הערה: קטע קצר של חוט מחובר לגורם עם החיישן ואת החוט משודכים לחלק העליון של המסגרת, אז המיכל תולה למטה בצד אחד. חיישנים הממוקם ישירות על המסה שבוחרים עלולים להפריע דגירה, מסרק תחזוקה, וחיישנים המוטלות על מסגרות ליד החיצוני, או להציב על הכריכה הפנימית או סגרים עפעפיו, עשוי להיות מושפע במידה רבה תנאים חיצוניים, במיוחד במזג אוויר קריר.

4. הכנת סירופ לטיפול

הערה: להפוך פתרונות טיפול טריים את היום של כל האכלה באמצעות imidacloprid אנליטית כיתה. Imidacloprid הוא מאוד מים מסיסים, ולכן בקלות incorporated בסירופ; כמה חומרי הדברה יש מסיסות נמוכה במים, צריך להיות מיושם באמצעים אחרים. ניסוחים של 1 ק ג של הפתרון לטיפול הוחלו באמצעות בקבוק פלסטיק 1 ליטר כדלקמן:

w:w

1. מיקס שליטה (ללא חומרי הדברה) סוכרוז פתרון 1:1 (למשל 500 גרם סוכרוז: 500 מ"ל מים מזוקקים). סוכרוז להמיס במים מזוקקים באמצעות בקבוקון ערבוב גדולה עם בר ערבוב על פלטה מחוממת ל יותר מ-60 מעלות צלזיוס
2. לפתרונות זה יכלול imidacloprid, לערבב פתרון סוכרוז כאמור לעיל, אך מסתיר 100 מ ל (ובכך " קצר ") כדי לאפשר את נפח נוסף imidacloprid בהתאמה " ספייק " פתרונות.
   1. לפזר 500 גרם של סוכר 400 מ ל מים מזוקקים כדי לאפשר התוספת של יתד 100 מ ל כדי להשיג 1 ק ג של הפתרון לטיפול. לנוחותכם בשטח, העברת 900 גר' " קצר " סוכר פתרון עוד בקבוק, ואז להוסיף את הדקר כל בקבוק בודד.
3. להכין פתרון מניות imidacloprid 10 עמודים לדקה על-ידי מדידת 1.0 מ"ג של חומרי הדברה על איזון האנליטי את זה ב- 100 מ של מים מזוקקים באמצעות ערבוב בר בלי חימום.
   הערה: כדי להימנע מבעיות עם חשמל סטטי, שוקל imidacloprid לתוך כלי קיבול פלסטיק קטן, nonreactive ולמקם אותם כלי קיבול ישירות בהפתרון. מערבבים את הפתרון ולהסיר את כלי קיבול לאחר imidacloprid פיזר.
4. פתרון עבור 5 ppb, מערבבים 0.5 מ"ל של הפתרון מניות לתוך 99.5 מ ל מים מזוקקים כדי להשיג 100 מ של ספייק פתרון. להוסיף את זה לרשימת 900 גרם של הפתרון סוכרוז קצר כדי להשיג 1 ק ג של 5 ppb סירופ. עבור הפתרון 20 ppb, מערבבים 2.0 מ של פתרון מניות לתוך 98.0 מ ל מים מזוקקים כדי לייצר את הפתרון ספייק 100 מ. עבור שילוב פתרון 100 ppb, 10.0 מ של פתרון מניות לתוך 90.0 מיליליטר מים עבור הפתרון ספייק מזוקקים.

5. הכנת כוורות דבורים, יישום של טיפול

1. מושבות הערך כדי לקבוע את דבורה מבוגרים ואוכלוסיות מיוחמת לפני ואחרי יישום של טיפול. לטעום material(s) של עניין, כגון דבש, לחם דבורה, דבורים או שעווה, כדי לקבוע רמות הבסיס חומרי הדברה לפני הטיפול.
   1. כדי לדגום שעווה, פתח שפופרת צנטרפוגה 50 מ ל, בחר מקטע של מסרק ריק ולאחר לגרד הפה הפתוח של הצינור לאורך המסרק עד הנאספים את הכמות הרצויה של שעווה. להימנע מלגעת השעווה בצינור. להחליף את הכובע על המרקע, לתייג את הצינור. להחליף את המסגרת בכוורת.
   2. כדי לטעום דבש או צוף, פתח שפופרת צנטרפוגה ולחץ על הפה של הצינור כנגד המקטע של המסרק המכילה את דבש או צוף. לאפשר את החומר לזרום לתוך הצינור, יותר מאשר גירוד הצינור, כדי להפחית את כמות שעווה במדגם. להחליף את הכובע על המרקע, לתייג את הצינור. להחליף את המסגרת בכוורת.
   3. מדגם דבורה לחם, בחר מסגרת המכילה לחם דבורה ולהשתמש מרית מתכת או פלסטיק נקיים כדי להסיר את התוכן של תאים אחדים של דבורה לחם ומניחים את החומר בתוך שפופרת צנטרפוגה. להחליף את המסגרת בכוורת.
      הערה: איסוף חומר מספיקות בדרך כלל אורך מספר דקות לכל מסגרת. דגימה טיפוסי לניתוח חומרי הדברה יש לפחות 3 גרם של חומר; לטעום את מותק, שעווה, ולחם דבורה לפחות 2 או 3 נקודות שונות בכל כוורת ולשלב את subsamples עבור כל כוורת.
2. זמן קצר אחרי האבחון, כגון למחרת, להסיר כל המסגרות broodless המכילות דבש, צוף ולהחליף מסגרות אלה עם קרן או מסרק מצוירות ריק כדי להקל על אחסון סירופ.
   הערה: המטרה היא להגדיל את קיבולת האחסון ריק וגם הביקוש צוף. אם הטיפול הוא להיות מיושם מעורב בתוספת חלבון, הסרה של מזון מסגרות לא יהיה נחוץ.
3. ודא הכוורת יש מזין. כמה שיותר מהר לאחר טיפול טרום האבחון, להחיל את הטיפול על ידי לשפוך את הסירופ (שלב 4.4) במזין במהירות המירבית. . שמור על עצמך לא לשפוך כל סירופ מחוץ לכוורת איפה הדבורים מן המושבות אחרים עלול למצוא את זה
   הערה: מזיני הפנימי יפעלו טוב ביותר לצמצום שודד; הדברה מסוימים משפיעים על פעילות למבוגרים דבורה, כוורות שטופלו עשוי להיות פחות זהיר. בהגנה על מזיני לשדוד דבורים ⁹.

6. ניתוח של כוורת מסגרת תמונות

הערה: מסגרת תמונות נעשים במהלך כל הערכה הכוורת. המידע יכול להיות מופק הצילומים באמצעות פרוטוקול הבאה.

1. להפעיל את תוכנת ניתוח של התמונה, כגון ImageJ, המאפשר בחירת צורה על תצלום עם כלי מעקב ומדידת האזור של הצורה הנבחרת.
2. לאחזר תמונה דיגיטלית של מסגרת. בחר ' קובץ ' ולחץ על ' פתוח '. נווט אל התיקיה שבה הצילומים נשמרים כדי לבחור תמונה עבור ניתוח. התמונה עכשיו ייפתח בתוך התוכנית ImageJ, ואת הכלים ImageJ יהיה פעיל.
3. בחר ' מצולע ' כלי מסרגל הכלים. להשתמש בעכבר כדי ללחוץ על כל פינה כדי להגדיר את האזור של המסגרת מכוסה עם המסרק. הצורה ייצמד יחד כאשר לפינה מתחיל.
4. , ברגע המסרק לאזור מוגדר באמצעות הכלי ' מצולע ', לחץ על ' ניתוח ' ובחר ' MeasureƆ תיבת דו-שיח חדש יופיע עם המדידה. להשתמש בעמודה ' באזור ' כדי למדוד את הפיקסלים בתוך אזור מוגדר ששורטט.
   שים לב: בפעם הראשונה שנעשה שימוש בתוכנית, להגדיר את התוצאות הרצויות דיווח.
   1. לחץ על ' תוצאות ' בתיבת הדו-שיח התוצאות, ובחר ' הגדרת המידות '. בדיקת האזור, ולהוריד את כל השאר.
5. כדי להגדיר האזור מכוסה על ידי דגירה רצ'ט, בחר ' פריהנד ' בכלי. לדכא את לחצן העכבר נקודת ההתחלה, מעקב סביב צאצאים. כאשר נקודת המוצא, שחרר את לחצן העכבר; הצורה בנקישה.
   1. לחץ ' ניתוח ' ובחר ' מדד '. אם התבנית שבוחרים אינו מלא, בשל גורמים כגון מחלות, השתמש ' multi-point ' בכלי בחירה כדי לספור את התאים במקום. להמיר תא ספירת ישירות ס מ ², כדי להקל על ההשוואה; בדרך כלל ישנם תאים בערך 4.01/cm ^{2 20}-
6. לחלק את הערך של הצורה שבוחרים לעקוב אחריו לפי הערך של החלק הפנימי של המסגרת כדי לקבל כיסוי מסגרת אחוז של דגירה רצ'ט-
7. למדוד את הפנים של מסגרות נציג לקבלת תקן כך ניתן להמיר את פני השטח שבוחרים ס מ ²-
   הערה: מסגרת עמוק Langstroth טיפוסי כולל שטח בגודל של ² ס מ 880 בערך ²⁰. לדוגמה, אם 20% של פנים מסגרת עמוק Langstroth הוא נמצא כדי להיות מכוסה על ידי דגירה, אז ar משטחea יהיה 0.20 x 880 ס מ ² = 176 ס מ ²-
8. לסכם את פני השטח שבוחרים עבור הכוורת. כדי להמיר אמצעי זה המוני, הכפל את פני השטח ב- 0.77 גרם/ס"מ ^{2 20}-
9. לחשב את פני השטח של דבש, uncapped צוף ואבקה מאוחסנות, לדוגמה, באמצעות השיטה המתוארת בשלבים 6.3 ל 6.6.
   הערה: אם צוף ואבקה נחשבים ביחד " בחנויות מזון " זה מקטין את הרכיבים של מסגרת לשניים (חנויות מזון, דגירה). מסגרת Langstroth טיפוסי עם קרן פלסטיק, מסרק מצוירות ריק שוקל g 556 כ ²⁰, אז כדי לחשב את המשקל של רשתות המזון, לסכם את המשקל של המסגרת עם המסרק מצוירות ריק ואת המשקל של מסה שבוחרים לחסר זה משקל לפי המשקל שנמדדו המסגרת הנדון.

תוצאות

דבש דבורים המושבה הצמיחה, פנולוגיה, נמדד באמצעות בדיקות כוורת רגילה עם ניטור רציף משקל, חשף ייצור שבוחרים נמוך משמעותית בין מושבות נחשפים imidacloprid-100 ppb.
בדיקות הראו כי דבורה למבוגרים גושים לא הושפעו באופן משמעותי על ידי חשיפה בשני ריכוזים לא קטלני של ppb 5 ו- 100, אבל ניתוח של תמונות של מסגרות שבוחרים גילה כי ייצור שבוחרים בטיפול 100 ppb היה נמוך משמעותית (כוורת (hive) איור 1). כוורת רציפה משקל הנתונים הראה המושבה שונה שיעורי צמיחה בקרב קבוצות של כוורות נחשפים ריכוזים שונים של imidacloprid. כוורת רציפה משקל הנתונים היו מחולקים לשני חלקים: ה 25 פועל נתונים ממוצע, אשר קשורה צמיחה המושבה הצלחה הרעיה ואת ההבדל בין הנתונים הגולמיים שעתי ה 25 פועל הממוצע, מדי שעה detrended נתונים. Amplitudes היומי של הנתונים detrended קשורים שיחור מזון פעילות^19,20 (איור 2). בזמן שקילה כוורות מעת לעת ייתכן גילו הבדלים משקל ממוצע בשלב כלשהו, שקילה מתמדת סיפק נתונים detrended למידע על התנהגות המושבה.

המעקה העליון של המסגרת האמצעי בכוורת מסחרי טיפוסי מהווה מיקום יעיל עבור חיישני טמפרטורה.
עובד מבוגר דבורים במושבות ליצור ולתחזק בטמפרטורות גבוהות (33-36° C) במיוחד בנוכחות שבוחרים¹⁴ והאשכול עצמה היא ניידת לנצל מזון חנויות בחלקים שונים של כוורת^25,26. כדי לצמצם את איבוד החום, אשכולות להימנע מהצורך משטח מגע גדול עם החלקים החיצוניים של הכוורת, כגון בצדדים או למטה, אז המרחק בין החלק העליון של התיבה המרכז לאשכול גדול לעיתים רחוקות. החלק העליון של התיבה שבוחרים המרכז הוכח הפחיתו את השתנות הטמפרטורה בהשוואה למקומות אחרים בכוורת, כגון החלק העליון של מסגרת החיצוני לבין הקצה העליון של תיבת שניה ("סופר") המרכז בקיץ ובסתיו תנאים²⁰. בתנאי חורף, שבו ההבדל בין טמפרטורת הסביבה של האשכול יהיה צפוי להיות הגדול ביותר נמצא באותו המיקום יש טמפרטורה הגבוהה, ההשתנות הנמוך לעומת תנאי הסביבה, המציין התרומה הגדולה ביותר מהאשכול את עצמה(דמויות 3 ו- 4; טבלה 1). הבדלי טמפרטורה משטרים לא ניתן לייחס הבדלים המסה דבורה למבוגרים (טבלה 2).

Amplitudes של עקומות סינוס להתאים טמפרטורה רציפה לנתונים היו גבוהות משמעותית בטיפול 100 ppb מאשר בטיפול 5 ppb בזמן גם קבוצת הטיפול היה שונה באופן מהותי מן קבוצת הביקורת ⁹ .
Amplitudes הם ביחס ישר השתנות הטמפרטורה, כך amplitudes גבוה יותר לציין טמפרטורות משתנה יותר בנקודה זו של הכוורת. Amplitudes התחתון משקפים את הייצור שבוחרים גבוהה יותר בקבוצות 5 ppb ושליטה הטיפול לעומת קבוצת הטיפול 100 ppb (איור 5). תוצאות אלה, יחד עם אלו מן הבדיקות כוורת כוורת רציפה משקל הנתונים, לאשר כי התנהגות ברמת המושבה היה מושפע באופן משמעותי חשיפה imidacloprid 100 ppb.

איור 1: מבוגר דבורה אמצעי דגירה. כוורת נתוני בדיקה של מאי, 2014, מרץ, 2015, על מושבות שנחשפו ל סירופ המכיל 0 (בקרה), 5 ו- 100 ppb imidacloprid ליד טוסון, AZ. (א) ממוצע (+ SEM) סה כ המסה דבורה למבוגרים; ממוצע (B) (+ SEM) אטום שבוחרים פני השטח. אזור אפור מציין תקופת הטיפול (4-6 ק ג של סוכרוז שטופלו סירופ לשבוע לכל הכוורת במשך 6 שבועות). ארבע המושבות לכל קבוצה טיפול; המושבה אחד ppb 100 מת במהלך החורף. דבורה למבוגרים גושים לא נרשמו בחודש אוגוסט. כאן נתונים פורסם בעבר והוא משמש כאן עם הרשאה⁹. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2 : דבש הדבורים הכוורת משקל הנתונים. נתוני משקל רציפה מיוני בדצמבר, ועד 2014, דבש ג'וקים נחשפים סירופ המכיל 0, 5 ו- 100 ppb imidacloprid ליד טוסון, AZ. משקל סה כ כוורת (A) (± SEM); Amplitudes (B) של סינוס עקומות להתאים לנתונים משקל detrended מאותה תקופה. אזור אפור מציין תקופת הטיפול (4-6 ק ג של סוכרוז שטופלו סירופ לשבוע לכל הכוורת במשך 6 שבועות). ארבע המושבות לכל קבוצה טיפול; המושבה אחד ppb 100 מת במהלך החורף. כאן נתונים פורסם בעבר והוא משמש כאן עם הרשאה⁹. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3: בתוך הכוורת הטמפרטורה במקומות שונים. טמפרטורות ממוצעות (± SEM) יומי (° C) במשך 3 מקומות חיישן בתוך כוורות דבורים דבש. (א) 4 כוורות יחיד-box שמר באתר בגובה רב (MLEM: ז 2412); ו- (B) 3 כוורות שמר באתר בגובה נמוך יותר (SRER: ז 719) ליד טוסון, אריזונה מ דצמבר 2013 2014 בפברואר. כוורות היו מעץ Langstroth עמוק (43.65 l קיבולת) מצוידים עם מכסה פנימי מעץ והתיבות telescoping העפעפיים מצופה מתכת. צמד תרמי טמפרטורה הגששים צורפו לברים העליון של המסגרות, חיישן אוגר נתונים משולב/טמפרטורה הונח על המסילה התחתונה של המסגרת האמצעי. נתונים אלו מראים כי המיקום חיישן בחלק העליון של המסגרת האמצעי היה עקבי גבוה יותר מאשר הסביבה בהשוואה. העמדות האחרות חיישן ואינפורמטיבי ובכך על טמפרטורה ניהול על ידי המושבות דבורה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 4 : השתנות הטמפרטורה במקומות שונים בתוך הכוורת. Amplitudes יומי ממוצע (± SEM) עבור סינוס curves מתאים לנתונים טמפרטורה detrended כל שעה על 3 מקומות חיישן בתוך כוורות דבורים דבש. (א) 4 כוורות המשיך באתר בגובה רב (MLEM: ז 2412); ו- (B) 3 כוורות שמר באתר בגובה נמוך יותר (SRER: ז 719) ליד טוסון, אריזונה מ דצמבר 2013 2014 בפברואר. כוורות היו מעץ Langstroth עמוק (43.65 l קיבולת) מצוידים עם מכסה פנימי מעץ והתיבות telescoping העפעפיים מצופה מתכת. צמד תרמי טמפרטורה הגששים צורפו לברים העליון של המסגרות, חיישן אוגר נתונים משולב/טמפרטורה הונח על המסילה התחתונה של המסגרת האמצעי. נתונים אלה מראים כי המיקום חיישן בחלק העליון של המסגרת האמצעי היה נמוך באופן עקבי, השתנות (נמדד כאן כמו משרעת של עקומות סינוס להתאים לנתונים detrended כל שעה) מאשר הסביבה בהשוואה למיקומים אחרים חיישן ואינפורמטיבי ובכך על ניהול טמפרטורת מאת המושבות דבורה. מאזניים טמפרטורת הסביבה (קו שחור מוצק) הן בצד ימין של כל תרשים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 5: טמפרטורות מושבות שטופלו בתוך הכוורת. נתוני טמפרטורה רציף בין החודשים יוני עד דצמבר, ועד 2014, דבש ג'וקים נחשפים סירופ המכיל 0, 5 ו- 100 ppb imidacloprid ליד טוסון, AZ. (א) כוורת ממוצע טמפרטורה (± SEM); Amplitudes (B) של סינוס עקומות שיתאים נתוני טמפרטורה detrended מאותה תקופה. אזור אפור מציין תקופת הטיפול (4-6 ק ג של סוכרוז שטופלו סירופ לשבוע לכל הכוורת במשך 6 שבועות). ארבע המושבות לכל קבוצה טיפול; המושבה אחד ppb 100 מת במהלך החורף. כאן נתונים פורסם בעבר והוא משמש כאן עם הרשאה (Meikle. et al. 2016a). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

השוואה	מבחן t	(ת') P	האתר	ממוצעת של diff. (° C)
Pos. 2 - Pos. 1	2.05	0.0485	MLEM	1.00 ±0.25
			SRER	4.38 ±0.12
Pos. 2 - Pos. 3	0.84	1	MLEM	2.05 ±0.21
			SRER	0.12 ±0.11

טבלה 1: ממוצע הבדלי טמפרטורה והשוואות לאחר הוק בין עמדות שונות חיישן בתוך כוורות דבורים דבש. מיקום 1: המסגרת החיצונית העליונה; תפקיד 2: המסגרת האמצעית העליונה; תפקיד 3: מסגרת האמצעי התחתון. 4 כוורות יחיד-box הוחזקו באתר בגובה (MLEM: ז 2412), כוורות 3 היו נשמרים באתר בגובה נמוך יותר (SRER: ז 719) ליד טוסון, אריזונה מ דצמבר 2013 2014 בפברואר. כוורות היו מעץ Langstroth עמוק (43.65 l קיבולת) מצוידים עם מכסה פנימי מעץ והתיבות telescoping העפעפיים מצופה מתכת. צמד תרמי טמפרטורה הגששים צורפו לעמדות 1 ו- 2 ולאחר בחיישני אוגר נתונים משולב/טמפרטורה צורפה עמדה 3.

קבוצה	תאריך	ממוצע (± SEM) דבורה למבוגרים מסה (g)	ממוצע (± SEM) שבוחרים פני השטח (2ס מ)
MLEM	18 נובמבר 2013	2119 ±412	1372 ±396
SRER	15 נובמבר 2013	2270 ±312	53 ±30
MLEM	13 פבואר 2014	2171 ±105	0
SRER	11 פבואר 2014	2027 ±487	867 ± 79

בטבלה 2: ממוצע דבורה למבוגרים בגושים, ההמונים מיוחמת, מוערך באמצעות פרוטוקולים המתוארות כאן, עבור ארבע כוורות שמר באתר בגובה (MLEM: ז 2412); כוורות שלושה שמר באתר בגובה נמוך (SRER: ז 719) ליד טוסון, אריזונה מ דצמבר 2013 2014 בפברואר. כוורות היו מעץ Langstroth עמוק (43.65 l קיבולת) מצוידים עם מכסה פנימי מעץ והתיבות telescoping העפעפיים מצופה מתכת. צמד תרמי טמפרטורה הגששים צורפו לעמדות 1 ו- 2 ולאחר בחיישני אוגר נתונים משולב/טמפרטורה צורפה עמדה 3.

Discussion

בדיוק כמו יבול מדען דורשת נתונים ומדויקים כדי להעריך את ההשפעות של טיפולים שונים על צימוח ולקבל תשואה, דבש דבורים החוקרים לדרוש נתונים ומדויקים להעריך דבורה המושבה הצמיחה ואת הפעילות. אלו סוגים של נתונים חשובים במיוחד כאשר ההשפעות טיפול עשוי להיות עדין וארוכי טווח, כגון עשוי להיות צפוי כאשר דבורים חשופים ריכוזים נמוכים של חומרי הדברה.

כוורת רציפה משקל הנתונים מכילים מידע רב על הצמיחה ואת הפעילות של המושבות נחקר, כמו גם התגובה של מושבות אלה ל אקסוגניים הפרעות, כמו שודד דבורים, התוספת של סירופ סוכר מזין⁹. עם זאת, לפרשנות הראויה משקל רציפה, נתוני טמפרטורה דורש ידע כלשהו של הגודל של המושבה על בסיס כתב-העת. בעוד גודל האוכלוסייה הבוגרת דבורה יכול להיות מוערך מן amplitudes היומי של נתונים מדי שעה detrended במהלך זרם צוף, בשל התנועה באיסוף מוגברת, מחוץ זרם צוף הגומלין ואינו מחזיק טוב²⁰. באופן דומה, המושבה משקל שינויים עקב ההצלחה הרעיה, צריכת מזון, והאוכלוסייה דבורה עליות, ירידות (למשל דבורה הורג) בחלקו פונקציה של גודל המושבה. מושבות קטנות יותר עשויים להיות בריאים אך להציג שיעורי צמיחה נמוכה, פחות מסה באיסוף, לדוגמה, פשוט בשל אוכלוסיה באיסוף קטנים יותר.

זיהוי מיקום קבוע עקבי ואינפורמטיבי עבור חיישן טמפרטורה בתוך הכוורת חיוני להפקת תוצאות לשחזור, במיוחד עם overwintering. מחקר קודם הראה כי הטמפרטורה ניטור ליד המעקה העליון של מסגרת המרכזי בתיבת דגירה (למטה) היו פחות בקורלציה עם טמפרטורות הסביבה (חיצוני) מאשר מספר תנוחות אחרות בכוורת, הושפעו יותר המושבה עצמה ²⁰. במהלך החורף, טמפרטורה הבדלים בין האשכול דבורה המושבה, אמביינט צפוי להיות גבוה אז ההבדלים בין עמדות בתוך הכוורת כנ ל יהיה צפוי להיות גדול יותר במהלך החודשים החמים יותר. בנוסף, האשכול דבורה יזיז למיקומים שונים מתוך הכוורת לנצל מזון משאבים^25,26. המחקר החורף המתוארים כאן הראה כי הטמפרטורות ומעמדות אופקי, מהאמצע העליון למסגרות החיצוני העליון, היו שונים באופן משמעותי ואילו לא היו הבדלים אנכי על המסגרת האמצעי. תנועת אוויר אופקיים בין מסגרות מוגבלת יחסית בעוד תנועה אנכית לאורך מסגרת הוא לא, אז ערבול אנכי הייתה צפויה להיות גדולה יותר. תוצאות אלו אשר כי במיקום חיישן על המעקה העליון של המסגרת האמצעית היא עשויה להיות אינפורמטיבי לגבי השפעות הטמפרטורה מהמושבה.

כוורת הערכות כפי שהם מתוארים כאן לפתור חלק מהבעיות. על-ידי חיסור הסכום של הכוורת חלקים מן המשקל הכולל כוורת נמדד בזמן חוסר פעילות, כגון בלילה, ההערכה של הדבורה למבוגרים המיסה היא עצמאית של מספר הדבורים הרעיה, ובכך לא רגיש לזמן של הערכה. הקלטת נתונים מן מאזניים מאפשרת מקום הסובייקטיביות, ומספקים מסגרת תמונות תיק, אז יכול להיות revisited ניתוחים של מזון או להיטרד פני שטחים במידת הצורך, ובכך להקטין את התלות ההכשרה של האדם עושה את הבדיקות.

השיטות המתוארות כאן אינם ללא מקורות השגיאה. כוורת חלקים צריכים להיות חופשי של הדבורים ככל האפשר, ואת כל חתיכות משמעותית של המסרק או חומר אחר אשר יוסר צריך להישקל לפני שנזרקו. הלחות רכיבי עץ יכולים להשתנות לאורך זמן, כוורות ריק יכול להפגין למדידה יומית תנודות במשקל עקב שינויים יומי בלחות היחסית²⁴. כוורת המכילה מושבה ישתנה כנראה לא כל כך הרבה דבש דבורים נוטים לשמור על לחות קבועה יחסית בתוך הכוורת²⁷, אשר לרכך את ההשפעה הסביבתית. שיטות אלה גם תלוי עובדת במהירות. ברגע כוורת, מפורקים לתנאי טמפרטורה וגז שינוי דרסטי, מזג האוויר קריר יכול להשפיע על בריאות שבוחרים¹⁴. מפרקים כוורת ללא מסך להרחקת דבורים מגבולות מושבות יכול לקדם שודד, במיוחד בתקופות של ישובי צוף.

שינויים של הליכים אלה נחוצים מעת לעת. בזמן זה האינטרס של החוקרים לאסוף כמה שיותר מידע ככל האפשר, יש מקרים, כמו מתי יש לבדוק כוורות רבות, כאשר שודד הלחץ הוא גבוה או כאשר תנאי מזג האוויר אינם מיטביים, עובדים עליך לנוע במהירות, forgo נתונים מסוימים. אם נתונים על עתודות מזון אינם קריטיים, המסגרות המכילות רק דבש ו/או אבקה, או מסגרות עם רק שעווה או קרן, צריך להיות שקל אבל לא צולם. רמות של הזחלים uncapped וביצים גם הם עניין יש חוקרים, הם לעיתים קרובות זוהו בתצלומים מסגרת; עם זאת, על מנת להימנע דגימה הטיה חוקר חייב להיות בטוח היכולת לזהות אותם כל התמונות. לעתים קרובות רק רצ'ט דגירה יכול להיות אמין ועקבי מזוהה על תמונות שצולמו בתנאי שדה. לגבי היישום של טיפול, כמה כוורות, במיוחד אלה נמאס מינונים גבוהים יותר של imidacloprid, יכול להיות אדיש, גורם לירידה את צריכתם של סירופ והן את היכולת שלהם להגן על הכוורת שלהן. אם מושבה נכשל לצרוך סירופ שלה לאחר 5-7 d, הסירופ צריך להיות מוסר שקל, שנמחקו (כדי למנוע זיהום עקב תסיסה) והציע המושבה סירופ טריים. על ידי שקילה את הסירופ זרוקים, חוקרים יהיה תיעוד של כמה המושבה כל צרכו, ולכן ניתן לחשב הכולל מינון. לבסוף, היישום של טיפולים בסירופ סוכר הוא היעיל ביותר כאשר ישנם מקורות צוף חלופי ספורים או בכלל לא. מקורות צוף חלופית לדלל את הטיפול תואר לא ידוע. חוקרים צריך לזכור, כפי צויין בסעיף פרוטוקול, חומרי הדברה כגון imidacloprid קשורים עם רמות פעילות מופחתת, כולל הגנה על הכוורת, בהתאם הריכוז. המושבה מופחתת ההגנה עשויה גם להוביל שודד מוגברת, בלבול אפשרי של טיפולים.

התוצאות שהוצגו כאן הצג כך רציף פיקוח על הכוורת משקל, הטמפרטורה הפנימית הם רגישים המושבה ברמת התנהגויות, אפילו עם הכבוד שינויים התנהגותיים שנגזרות נמוך מאוד (5 ppb) ריכוזים של חומרי הדברה העצבים. הלאה יישום של שיטות אלה רעלנים עצביים אחרים, חומרי הדברה עם אחרים דרכי פעולה, כגון הרגולטורים הצמיחה חרקים, יגביר את ההבנה שלנו של ההשפעות של שדה-ריאליסטיות מינונים על דבש ג'וקים.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Langstroth hive equipment (box)	Mann Lake Ltd, Hackensack, MN	KD-700
Langstroth hive equipment (frame)	Mann Lake Ltd, Hackensack, MN	WW-900
Langstroth hive equipment (lid and cover)	Mann Lake Ltd, Hackensack, MN	WW-302
Langstroth hive equipment (base)	Mann Lake Ltd, Hackensack, MN	WW-316
Langstroth hive equipment (internal feeder)	Mann Lake Ltd, Hackensack, MN	FD-505
Cordovan Italian queens and bee packages	C.F. Koehnen & Sons, Glenn, CA
Scale, bench (100 kg max. capacity): model B-2418	TEKFA, Copenhagen, Denmark	discontinued
Scale, bench (100 kg max. capacity): Diamond Series	Avery Weigh-Tronix , Fairmont, MN	1824-200
Imidacloprid, analytical-grade CAS # 138261-41-3	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103	37894
Electronic scale, precision (precision = 0.1 mg): Adventurer Pro 260	Ohaus,  Parsippany, NJ	AV264C
Electronic scale, portable (15 kg max. cap.): Ranger Count 3000	Ohaus, Parsippany, NJ	RC31P15
Thermocouple probe: TMC6-HD	Onset Computer Corp., Bourne, MA	TMC6-HD
Datalogger, 12-bit: Hobo U-12	Onset Computer Corp., Bourne, MA	U12-012
Temperature and r.h. datalogger: iButton Hygrochron	Baulkham Hills, NSW 2153, Australia	DS1923
Temperature datalogger: iButton Thermochron	Baulkham Hills, NSW 2153, Australia	DS1922L
Nalgene plastic bottle	Thermo Scientific, Rochester, NY	2104-0032
Tissue embedding cassette	Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA	B1000731WH
Digital camera: Pentax K-01	Ricoh Imaging Co., Ltd.	15241
ImageJ version 1.47 software	W. Rasband, National Institutes of Health, USA
Centrifuge tubes, 50 ml	Fisher Scientific, Asheville, NC	14-959-49A