התפלגות המים xylem במפעלי וודי דמיינו בעזרת מיקרוסקופ אלקטרוני לסריקת ההקפאה

Summary

התבוננות בחלוקת המים בתוך העצה מספקת מידע משמעותי בנוגע לדינמיקה של זרימת מים בצמחי הודי. במחקר זה, אנו מדגימים את הגישה המעשית להתבונן הפצת מים עצה באתרו באמצעות קריוסטט ו-הקפאה-SEM, אשר מבטלת שינויים מעשיים במצב המים במהלך הכנת המדגם.

Abstract

מיקרוסקופ אלקטרוני סריקה מותקן מותקנת-יחידת (ההקפאה-SEM) מאפשר תצפית דגימה בטמפרטורות מתחת ושימש לחקר הפצת מים ברקמות הצמח בשילוב עם הקפאת טכניקות קיבוע באמצעות חנקן נוזלי ( _{ב 2}). עבור מינים וודי, עם זאת, ההכנות להתבוננות במשטח החתך הרוחבי של עצה כרוכות בקשיים כתוצאה מכיוון של סיבי עץ. בנוסף, מתח גבוה יותר בעמודת המים ב-עצה יכול מדי פעם לגרום לשינויים העובדתיים בהפצת המים, במיוחד במהלך קיבוע המדגם והגבייה. במחקר זה, אנו להפגין הליך יעיל להתבונן התפלגות המים בתוך עצה של צמחים וודי באתרו באמצעות קריוסטט ו-הקפאה-SEM. בתחילה, במהלך איסוף המדגם, מדידת פוטנציאל המים עצה צריך לקבוע אם המתח הגבוה נמצא בתעלות עצה. כאשר הפוטנציאל הגלום במים נמוך (< ca. 0.5 MPa), נדרש הליך הרפיה במתח כדי לאפשר שימור טוב יותר של מעמד המים ב-עצה במהלך דגימת קיבוע ההקפאה. בשלב הבא, צווארון המים האטומה מוצמד מסביב לגבעול העץ ומתמלא ב-LN₂ לצורך הקפאת הקיבעון של מעמד המיים של xylem. לאחר הקציר, יש לנקוט כדי להבטיח כי המדגם נשמר קפוא תוך השלמת ההליכים של הכנה לדוגמה להתבוננות. קריוסטט מועסק בבירור לחשוף את המשטח הרוחבי עצה. בתצפיות ההקפאה, התאמת הזמן לחריטה בהקפאה נדרשת כדי להסיר אבק כפור ולהדגיש את קצה קירות התא על משטח הצפייה. התוצאות שלנו להפגין את תחולת טכניקות ההקפאה-SEM להתבוננות של הפצת מים בתוך עצה ברמות סלולר ו subcellular. השילוב של ההקפאה-SEM עם שאינם הרסניים טכניקות תצפית באתרו יהיה מאוד לשפר את החקירה של הדינמיקה זרימת מים צמח וודי.

Introduction

זמינות של משאבי מים (כלומר, משקעים, תוכן אדמה) קובעת בקפדנות את התמותה ואת ההתפלגות הגיאוגרפית של מינים צמחיים, שכן הם צריכים לקלוט מים מהאדמה ולהעביר אותו לעלים לייצור פוטוסינתטי. הצמחים חייבים לשמור על מערכת התחבורה. המים שלהם תחת תנודות המים בפרט, צמחים וודי ליצור מתחים גבוהים התעלות שלהם לאורך הזרמים דיות כמו, במקרים מסוימים, הם צריכים להחזיק את הכתר שלהם יותר מ ~ 100 m מעל הקרקע. כדי לשמור על עמודי המים בלחץ שלילי כה גבוה, מורכבות התעלות ברצף של תאים צינורי עם קירות תאים קשיחים והידרופוביות מסוג¹. הפגיעות בתפקוד הלקוי של המין השני במינים היא הדטרמיננטה טובה של הישרדות המינים תחת אספקתהמים. בנוסף, לימוד מעמד המים של התעלות הוא חשוב להערכת מצבם הבריאותי של העצים הבודדים החשופים ללחצים בריאותיים או ביוטיים. מדידת זרימת sap או פוטנציאל מים יכול לספק הערכות של מעמד המים של צמח וודי בשל הפונקציה הידראולי משולבת של התעלות עצה. יתר על כן, להמחיש את התפלגות המים בתאי עצה יכול להבהיר את המצב של רכיבים בודדים של מערכת הידראולי עצה.

מספר טכניקות להמחיש את מצב המים של התעלות האלה הם³. השיטות הקלאסיות והשימושיות להתבוננות במסלולי המים ברקמת העור כרוכות בצביעת עמודת המים על-ידי הטבאתה בקצות הענפים החתוכים לצבע או על-ידי הזרקת צבע לתוך עץ עומד. צילומי רנטגן רכים מאפשרים גם הדמיה של הפצת מים של דיסקי עץ חתוכים בשל עוצמת הספיגה הדיפרנציאלי של קרני רנטגן של הלחות ב-עצה^5,6. שיטות אלו, עם זאת, מספקות רק שירים של תנועת מים או הפגנת הפצות מאקרוסקופי במים. לאחרונה, טכניקות תצפית שאינן הרסניות, כגון מיקרו מיקוד רנטגן טומוגרפיה ממוחשבת (μct)^7,8,9,10ודימות תהודה מגנטית (MRI)^{11, 12}, שופרו באופן משמעותי כדי לאפשר השגחה של מים בתוך שתילים שלמים. לשיטות אלה שאינן הרסניות יש יתרונות גדולים בכך שאנו יכולים להתבונן במצב המים של xylem ללא אפקטים מלאכותיים, ואנו יכולים לעקוב אחר הדינמיקה של זרימת המים באמצעות הדמיה רציפה או החדרת סוכן ניגודיות¹⁰. עם זאת, אנחנו צריכים להשתמש ב-MRI מותאם אישית עבור הדמיה של הצמח או מתקן מיוחד עבור Μסינכרוטרון מבוסס-Ct כדי לקבל את התמונות אשר יכול לזהות תוכן המים ברמה התאית. בנוסף, למרות מערכת μct מבוסס סינכרוטרון לקבל תמונות משובחות עם רזולוציה מרחבית גבוהה, הדומה למיקרוסקופיה קלה^7,8,9, תאים חיים יכולים להיפגע על ידי ה קרינה של אנרגיה גבוהה X-ray^13,14. שימוש במיקרוסקופ אלקטרוני סריקה שבו יחידות ההקפאה מותקנות (ההקפאה-SEM) היא שיטה שימושית מאוד לאיתור בדיוק את המים ב-עצה ברמה התאית, למרות שהדבר דורש לקצור את הדגימה להסתכלות. כדי לתקן את המים ב-עצה, חלק מהגבעולים (כלומר, זרדים, ענפים או גבעולים) קפואים באתרו על ידי חנקן נוזלי (LN₂). תצפיות של פני השטח של גזוז, יצורים קפואים על ידי ההקפאה-SEM לספק תמונות מוגדלות ביותר של מבנה עצה שממנו אנו יכולים לזהות את המים ב-עצה כקרח. הגבלה משמעותית של שיטה זו היא כי התבוננות רציפה על מתנוכי המים בתוך אותה דוגמית היא בלתי אפשרית. עם זאת, היישום של μCT או MRI עבור התבוננות רציפה של עצים החיים בשדה הוא מאוד מאתגר משום שמכשירים אלה אינם ניידים. לעומת זאת, לבית-SEM יש פוטנציאל לשימוש בטכניקה זו על עצים גדולים בניסויים בשטח כדי להמחיש בבהירות את תוכן המים במישור הסלולר בלבד, אלא גם ברמת מבנה עדינה יותר, למשל, מים בבורות בין-כלים¹⁵, מים ב החללים הבינתאיים¹⁶, או בועות בעמודת המים¹⁷.

מחקרים רבים התבוננות מים עצה על ידי ההקפאה-SEM דווחו ^{5,12,18,19,20,21,23}. Utsumi ואח ' (1996) הקים בתחילה את הפרוטוקול להתבוננות של עצה באתרו על ידי הקפאת קיבעון של גזע חי באמצעות מילוי LN₂ לתוך מיכל להגדיר על גזע²¹. הטמפרטורה של המדגם נשמרה למטה-20 ° c במהלך איסוף המדגם במהלך הכנת ההקפאה-SEM כדי למנוע המסת הקרח בתוך התעלות עצה. שיטה זו שימש להתבונן במים ב-עצה כדי להבהיר את הפצת המים תחת שינוי משטר המים^11,12,24,^25,26, ^27,28, הווריאציה העונתית של הפצת מים^21,29,30, ההשפעה של מחזורים להפשיר הקפאה^{17,31, 32}, התפלגות המים בעץ רטוב⁵, שינויים בחלוקת המים במהלך המעבר מ סאפרווד לשמוע²⁰, קורס הזמן העונתי של פעילות הקמשוקה והבידול של כלי³³, והתוצאה הנגרמת על ידי מתחים ביוטיים מסוימים^23,34. מוליכות הידראולית ופגיעות תעלות כדי קוויטציה גם אומתו באמצעות ההקפאה-SEM^35,36. המלון שימש לחקר התפלגות אלמנט על פני השטח של מדגם המכיל מים³⁷, והוא מצויד באנרגיה המדלדת בעזרת הספקטרומטריה.

הקפאת קיבוע של גזע חי אשר מכיל תעלות תחת מתח הידראולי גבוה לעיתים גורם cavitations אשר נצפו על ידי המקפיא-SEM כמו גבישי קרח שבורות לומן של תעלות^38,39. במיוחד, מינים ברועלים עם תעלות ארוכות ורחבות יותר פגיעים לחפצים הנובעים ממתח, כגון הפחתת החיתוך של המדגם, גם אם בוצעו מתחת למים^3,40. הממצאים החזותיים להיות בולט לאחר הדגימה של עץ הטרנס (כלומר, הדגימה בזמן היום) או בתנאים חמורים בצורת והם יכולים להטעות הערכה יתר של מופע מוגזם^{3,38, 39}. לפיכך, יש לשחרר את המתח העובד בתעלות כדי למנוע את האפשרות הארטיטיבית^3,12,³⁹.

טכניקת שבר ההקפאה באמצעות סכין מותקן בחדר דגימה מועסק לעתים קרובות כדי לחשוף את משטח הדגימה עבור התבוננות ההקפאה-SEM. עם זאת, הקפאת שבורה מטוסים של רקמות הצמח וודי, במיוחד בחלקים רוחבי של xylem משני, הם גסים מדי כדי להתבונן בבהירות תכונות אנטומית ומים ברקמה⁶. היישום של קריוסטט עבור זמירה דגימה מאפשר הכנה מהירה ובאיכות גבוהה של משטחים לדוגמה^20,23. המטרה הכוללת של שיטה זו היא מתן ראיות עם הרזולוציה אלקטרון מיקרוסקופ של התפלגות המים בסוגים שונים של תאים עצה באתרו ללא התרחשות של חפצי הדגימה. אנו מציגים את ההליך המעודכן שלנו, אשר כבר השתפר בהתמדה מאז שאימצנו אותו לראשונה, לגבי הדגימה, זמירה וניקוי משטח הדגימה להשגת מיקרוגרפים אלקטרונים באיכות גבוהה של דגימות מתקן ההקפאה של xylem.

Protocol

הערה: תרשים סכמטי של פרוטוקול זה מוצג באיור 1.

1. דגימה: הרפיה מתיחות בתוך עמודת המים של קסיאו-תעלות

הערה: טיפול ההרפיה הבאה מומלץ לפני היישום LN₂ כדי להימנע מהקפאה וממתחים-חפצים המושרה בהפצת המים הקפילאם.

1. הקף ענף ועלים לדיגום עם שקית ניילון שחורה כדי להאביק את הפוטנציאל המים בין עצה ועלים יותר משעתיים לפני הדגימה.
2. לקבוע את פוטנציאל המים של לפחות שני עלים מן המדגם באמצעות תא לחץ או פסיכרומטר. כאשר פוטנציאל המים גבוה מ-ca.-0.5 MPa (כלומר, אין מתח מועט מאוד), מדגם ניתן לקצור לאחר הקפאת (להתייחס לסעיף 2: הקפאת קיבעון). כאשר פוטנציאל המים נמוך מ-0.5 MPa, יש צורך בטיפול בהרפיה כמתואר להלן.
3. לתקן את הצווארון מסביב לגבעול כדי להתמלא במים. גביע פלסטיק ללא תחתית יכול לשמש כקולר הניתן לאטימה. יש לנקוט כדי לסגור בחוזקה את החללים בין הגבעול לצווארון באמצעות סרט דביק למניעת דליפת מדיה נוזלית המשמשים לאחר מכן. לקצירת גבעולים גמישים כגון ענפים דקים או זרדים, כיור חלק חיתוך לתוך דלי מלא מים על ידי כיפוף הגבעול. חותכים מתחת למשטח המים בעזרת מזמרה או מסור. העבירו את הדגימה למיכל אחר של מים במהירות האפשרית כדי למזער את חשיפת הקצה לאוויר.
4. שמור את החלק החתוך. של הדגימה מתחת למים עבור מינים הרחבה, ודא כי האורך מהנקודה שבה מדגם ההקפאה עבור SEM יתקבל לקצה לחתוך של הגבעול שנקטפו הוא ארוך יותר מאשר הדגימות ' אורך כלי מקסימום כדי למנוע מתח-חפצים המושרה בתוך דגימת ההקפאה.
5. מכסים את המדגם המכיל עלים עם שקית פלסטיק שחור כדי להפחית את דיות. לשמור על קצה לחתוך של המדגם במים ולשמור על מצב זה כ 30 דקות כדי להרגיע את המתח עצה. הימנע מזמן הרפיה ארוך (> 1 h) בשל מילוי מלאכותי אפשרי של מוליכי החמצן¹².
6. למדוד את פוטנציאל המים שוב כדי לאשר את ההרפיה של המתח עצה (כמעט 0 MPa).
   הערה: לפני הדגימה, יש לטפל באורך כלי הקיבול המקסימלי של מינים היעד או לקבוע אותם בדגימות דומות על-ידי שיטת הזרקת האוויר. בעת דגימת עץ גדול, או ענף גדול, קשה לנהל את הליכי ההרפיה המותחים המתוארים לעיל. לכן יש לאסוף דגימות מעצים גדולים במהלך תקופת הזריחה כאשר פוטנציאל המים הניתן גבוה יותר.

2. הקפאת קיבעון עם LN₂

1. חותכים ופותחים צד אחד של קולר עם מספריים או סכין שכלי. חברו בחוזקה את הצווארון סביב הגבעול עם סרט דביק תוך החזקת הצמצם במאוזן.
2. ללבוש כפפות בידוד/כפפה, אבל הקפד להחזיק את הבקבוק של_{2 ב} בבטחה, ולרוץ_{ב 2} לתוך הצווארון כדי למלא אותו ב₂. שמור אותו מתמלא בהתמדה להוסיף LN₂ כדי להקפיא לחלוטין את המים ב-xylem. הזמן הנדרש להקפאה תלוי בגודל המדגם; 1 דקות לאחר הרתיחה של שפך_{ב 2} הפסיק הוא מספיק עבור ענף קטן או שתיל, בעוד יותר מ 20 דקות יש צורך בגבעול עץ גדול יותר²⁰. הוסף LN₂ ברציפות בזמן ההקפאה כפי שהוא מתאדה במהירות בשל הבדלי טמפרטורות גדולות בין LN₂ וטמפרטורות הסביבה.
3. לנתק את הצווארון מן החלק הקפוא של הגבעול לדוגמה כדי להסיר את LN₂ אחרי זמן מספיק קפוא. הקפד ללבוש כפפות בידוד כדי למנוע מגע עם פוטנציאל LN₂ נשפך הנגרמת על ידי ניתוק הצווארון.
4. לקצור את המדגם עם יד יפה מסור מיד.
5. לכסות את המדגם קפוא עם פיסת רדיד אלומיניום או לשים אותו לתוך צינור לדוגמה, שבו כתובים מספרי מזהה לדוגמה. מקום במהירות את המדגם שנקטפו לתוך מיכל מלא ב-LN₂ או לארוז לתוך קופסה מבודדת מלא קרח יבש.
6. אחסן את הדגימות במקפיא עמוק עד להשגחה. טמפרטורת האחסון המועדפת היא-80 ° c על מנת למנוע סובלימציה קרח והדרכה במהלך האחסון.

3. הכנה לדגימה

הערה: כדי להתבונן, יש לגזוז דגימה ומשטח התצפית חייב להיות מהוקצע בטמפ ' תת-אפס כדי לשמור על הפצת המים בתוך מיקומו באתרו. מיקרוטומה ביולוגית עם מערכת קריוסטט (קריוסטט) היא אידיאלית לקיצוץ וחשיפת המשטח של הדגימה בסוג זה של התבוננות על ידי ההקפאה-SEM.

1. הגדר את הטמפרטורה של חדר הדגימה של הקריוסטט ל-30 ° c, אשר בדרך כלל קר מספיק כדי לשמור את המצוף של רוב הצמחים במצב קפוא.
2. לקצץ מדגם לתוך חתיכה קטנה (< ca .2 ס"מ גובה ו < ca. 1 ס"מ רוחב או קוטר) כי ניתן לכוונן את המדגם של מתקן-SEM. השתמש בסכין חדה או מסור משובח לקיצוץ כדי למנוע שבירת הקרח במדגם. במקרה של מדגם גדול יותר שלא ניתן לגזור בסכין, במהירות לחתוך מראש עם מסור מקורר בתוך המקפיא.
3. הצמד את החלק החתוך לצ, מחזיק להקפאה באמצעות הרכבה על מדיום הטבעה של רקמות (g., מתחם OCT) לצורך הקפאת ההקפאה. ואז, חברו את הצ למחזיק. דגימות של הקריוסטט
4. חתוך את פני השטח על ידי גילוח שוב ושוב עם 5 – 7 יקרומטר סעיפים בעובי. זמירה על ידי גזירה יותר מ 1,000 כדי 2,000 μm, בעומק מוחלט מהמשטח הראשונית באוסף לדוגמה, הוא שימושי לחיסול החלק הפגום של המדגם שנגרם על ידי מראש חיתוך עם סכין או ראיתי כמתואר בשלב 3.2.
5. לאחר חיתוך בערך משטח של המדגם, להתאים חלק בלתי מנוצל של להב מיקרוטומה מעל פני השטח של הדגימה. אל תאפשר ללהב לגעת במדגם שיעלה על הגדרת העובי.
6. לפני החתך הראשון של חלק הלהב שלא נעשה בו שימוש, הרחב מעט את המרחק בין המשטח של הדגימה לבין הלהב.
7. חותכים את פני השטח של הדגימה רק פעם או פעמיים. בנוסף, החלק את הלהב שוב כוונון חלק להב שאינו בשימוש על פני הדגימה.
8. חזור על שלבים 3.6 ו-3.7 שלוש או ארבע פעמים. זה חשוב על מנת לקבל משטח ברור ללא "סימני סכין" (איור 4).
9. לאחר החיתוך הסופי, הגדר את מיקום הלהב רחוק מהדוגמה כדי למנוע מאבק לדבוק במדגם.
10. לנתק את צ'אק מבעל הדגימה ולנתק את הדגימה מן צ ' אק על ידי הסרת מדיום הטבעה קפואה עם סכין חדה. ודא כי הדגימה ממוקם בחדר קריוסטט כדי למנוע את משטח מהוקצע מאבק כפור.
11. עם מדיום הטבעה של רקמות. בחדר קריוסטט

4. העברה לחדר הדגימה

הערה: על פני השטח-הדגם המוכן להיות מוגן מפני גידול של טמפרטורה או הצטברות של כפור במהלך ההעברה מחדר ההקפאה לשלב התצפית בחדר הדגימות של ההקפאה-סם.

1. שמרו על טמפרטורת הבמה הקרה בחדר הדגימות של ה-SEM-סם בנמוך מ-120 ° c עם LN₂ בהתאם למדריך למשתמש של הציוד.
2. מניחים את מחזיק הדגימה עם הדגימה מוכן לתוך מכולה בידוד מלא ב-LN₂ בחדר קריוסטט.
3. החזיקו את מחזיק הדגימה עם. מוט החלפהמתחת לחדר השני הימנע מחשיפת מחזיק הדגימה לאוויר כאשר הדבר אפשרי.
4. הגדר במהירות את מחזיק הדגימה לחדר הפינוי מראש של תא הדגימה של ה-SEM-סם ברגע התחלת פינוי של תא טרום הפינוי. ואז, מניחים את מחזיק הדגימה על הבמה הקר לאחר האוויר מפונה לחלוטין. למרות שמעט הצטברות כפור היא בלתי נמנעת, הליך "הקפאת חריטה" (שלב 6) יכול להסיר אותו.

5. הגדרת SEM

הערה: הגדרה אופיינית להתבוננות מתוארת להלן. חלק מהשינויים נדרשים בהתאם למצב הוואקום או לקרן האלקטרונים.

1. הגדר את פרמטרי ה-SEM להשגחה כדלקמן:
   מתח תאוצה: 3 – 5 kV
   טמפרטורת הבמה: <-120 ° c
   גלאי: פליטה משנית

6. הקפאת חריטה

הערה: הקפאת-תחריט היא ההליך להדגשת הקצה של קירות התא של המדגם על ידי סובלימציה קלה של גביש קרח. הקפאת חריטה כרוכה גם הסרת dusts כפור פני השטח.

1. הפעל את מתח ההאצה של הרובה החשמלי בזמן הקפאת החריטה. מוטב לערוך חריטה בהקפאה תוך כדי צפייה בדגימה.
2. העלו את טמפרטורת הדגימה ל-100 ° c.
3. המתן מספר דקות עד להסרת אבק פרוסט ורמת פני השטח של הקרח בתאים עצה ירדה מעט בהשוואה לקירות התא.
4. הנמך את טמפרטורת הדגימה ל-120 ° c.
   הערה: אם אין בקר טמפרטורה מותקן עבור הבמה הדגימה, להחזיק את הדגימה באמצעות מוט החליפין ולנתק אותו משלב הדגימה לכמה דקות. שימו לב לדגימה מספר פעמים במהלך תהליך ההקפאה, כדי לאמת את סטטוס הסובלימציה של הדגימה.

7. ציפוי מתכת (אופציונלי)

הערה: השיפורים האחרונים בכלי SEM ועיבוד התמונה יכולים לספק תמונות באיכות גבוהה של דגימות חשמל ללא ציפוי מתכת. עם זאת, מרכיבים שאינם מוליכי החשמל, כגון חומרים ביולוגיים, לעיתים מגובים; בהירות גבוהה יותר במיקומים ספציפיים של הדגימה בשל הצטברות של אלקטרונים ("טעינה"). חשיפת הדגימה לקורות אלקטרונים למשך פרק זמן ארוך יותר, או להגדלה גבוהה, מגבירה את אפקטי הטעינה. ציפוי המשטח של הדגימה עם חומרי מתכת חשמליים מוליך מונע התרחשות של טעינה. השתמש במערכת ציפוי ואקום אשר מותקן בתוך יחידת ההקפאה כדי למנוע את הטמפרטורה של הדגימה להגדיל במהלך ציפוי.

1. ודא כי חומר הציפוי מותקן בראש מאייד מיועד של מערכת הציפוי.
2. שמרו על טמפרטורת השלב הקרה במערכת הציפוי שמתחת ל-170 ° c.
3. מניחים את מחזיק הדגימה בשלב הקר של מערכת הציפוי לאחר הקפאה מספקת.
4. פתח מחיצה בין השלב הקר לראש המאייד.
5. הגדר את הערך הנוכחי ואת ערך המתח של ראש המאייד ב-ca. 30 mA ו-ca .5 V, בהתאמה.
6. להתנדף חומר ציפוי עבור ca. 30 לחלוק את פני השטח של הדגימה.
7. הגדר את שני ערכי המתח הנוכחיים של ראש המאייד באפס וסגור את המחיצה.
8. מניחים את מחזיק הדגימה על השלב הקר של חדר הדגימה להשגחה.

תוצאות

תמונות מייצגות של משטחי חיתוך רוחבי של עץ מחטניים וברועלים, שנצפתה על ידי המקפיא-SEM, מוצגים באיור 2. בהגדלה הנמוכה, האזור השחור בתמונות מציין את החללים שמהם המים לחלוטין או בחלקו נעלמים, והאזור האפור מצביע על קירות תא מסוימים, ציטופלסמה ומים (איו...

Discussion

שיטות ההתבוננות ב-"קריו-SEM" שהוצגו במסמך זה מעשיות לצורך המחשה מהירה של חלוקת המים בקנה מידה תאי. באמצעות שיטה זו, לחקור את השינויים בחלוקת המים בתוך עצה יכול לעזור להבהיר את המנגנון של מינים העצים סובלנות ללחץ אביוטיים (מחסור במים או הקפאה) או מתחים ביוטי (מחלת עץ).

הצעד המכרי?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
coating material	JOEL Ltd., Japan	Gold wire, 0.50 × 1000 mm, 99.99 %, Parts No. 125000499
cryo scanning electron microscope	JOEL Ltd., Japan	JSM-6510 installed with MP-Z09085T / MP-51020ALS
cryostat	Thermo Scientific	CryoStar NX70
microtome blade	Thermo Scientific	HP35 ULTRA Disposable Microtome Blades, 3153735
tissue freezing embedding medium	Thermo Scientific	Shandon Cryomatrix embedding resin, 6769006