Fusion and Transmitochondrial Cybrid Generation

ליצירת ציבריד טרנסוכונדריאלי, השתמשו בתאים המקבלים את המיטוכונדריה שהתרוקנו למיטוכונדריה על ידי טיפול Rhodamine 6G, ובצעו איחוי עם מיטוכונדריה שבודדו מהתאים התורמים למיטוכונדריה. להבטיח ביטול תקין של תפקוד המיטוכונדריה בתאים המקבלים וטיהור אברונים מתאי התורם על ידי זריעת מספר קטן של תאים שטופלו ברודמין 6G ובידוד מיטוכונדריה בתווך תרבית שלם בצלחת בת שש בארות. בדוק אם לא נותרו תאים ששרדו בבארות לאחר חודש של תרבית.

כדי להמשיך באיחוי, הוסיפו בזהירות את התאים שטופלו ברודמין 6G לגלולת המיטוכונדריה המבודדת. לאחר מכן צנטריפוגה במשקל 520 גרם למשך חמש דקות כדי לאפשר לתאים להתערבב עם המיטוכונדריה. הוסף 100 מיקרוליטר של 50% פוליאתילן גליקול והשהה בעדינות את הגלולה למשך 30 שניות ואז אפשר למתלה לנוח ללא מגע למשך 30 שניות נוספות.

לבסוף, מעבירים את התערובת לצלחת בת שש בארות עם מדיום תרבית תאים שלמה טרייה, ומניחים אותה באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני. בדרך כלל, לאחר כשבוע, cybrids transochondrial צריך להתחיל לגדול, יצירת שיבוטים שניתן לבחור בנפרד או לערבב בבריכה לפני הניתוח שלהם. מקטעי ההגבלה שהתקבלו מפולימורפיזם אורך מקטע הגבלה, או RFLP, ניתוח של מיטוכונדריה מסוג בר היו שונים מהמוטנטיים.

ניתוח RFLP של קווי התאים הטרנסרוכונדריאליים החדשים הצביע על כך שמקטעי הגבלה היו זהים לאלה שהתקבלו בתורמים המיטוכונדריאליים שלהם בהתאמה ושונים מאלה שנוצרו עם קווי התאים המקבלים. יתר על כן, ההבדל בפרופיל גנוטיפ גרעיני טיפוסי של DNA בין שני קווי התאים המשמשים בתהליך ההכלאה יכול לשמש גם כדי לאשר את טוהר הדנ"א הגרעיני.