קח דיסק ספיר HPF ו- FSF מטופל מראש המכיל תאי HeLa יציבים, שטוף אותו עם חיץ PBS-A במשך חמש דקות, וחזור על תהליך זה שלוש פעמים. מעבירים את דיסקיות הספיר לצלחת תרבית בקוטר 35 מ"מ המכילה מיליליטר אחד של חיץ PBS-A בטמפרטורת החדר. החליפו את חיץ PBS-A בצלחת התרבית במיליליטר אחד של תמיסה מפחיתה ודגרו במשך שעה בטמפרטורת החדר.
מכינים את מבשר הזהב במיליליטר אחד של תמיסה מפחיתה ומיד מערבבים על ידי מערבולת. הוסף 80 מיקרוליטר של 500-מילימולר D-פניצילאמין במים מזוקקים כפול לתמיסת מבשר הזהב. ומיד מערבולת.
מחליפים את התמיסה בכלי המתורבת במיליליטר אחד של תמיסת מבשר זהב ודגרים במשך שעתיים בארבע מעלות צלזיוס. הוסיפו 20 עד 100 מיקרוליטר של תמיסת הנתרן בורוהידריד הטרייה לתמיסת מבשר הזהב, נערו מיד כדי לערבב היטב, ודגרו במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. החלף את התמיסה בשני מיליליטר של מאגר PBS-A כדי לעצור את התגובה.
לאחר מכן מכינים את תערובת שרף האפוקסי בהתאם להוראות היצרן, מעבירים את דיסקיות הספיר לקפסולות הטבעה שטוחות ותחתונות, ומחדירים עם שרף למשך 30 דקות לפחות בטמפרטורת החדר. פילמרי הדגימה ב 60 מעלות צלזיוס בתנור במשך 18 שעות לפחות. הכינו חלקים דקים במיוחד של הדגימה הפולימרית על ידי חיתוך בלוקי הדגימה בזהירות באמצעות סכין גילוח כדי לחשוף את דיסקיות הספיר.
טובלים את קצות הבלוק עם דיסקיות ספיר בחנקן נוזלי למשך מספר שניות ומפשירים את טמפרטורת החדר. חזור על פעולת ההקפאה-הפשרה מספר פעמים כדי לנתק את הדיסקים מהבלוקים. חלבון EGFP-MTn-KDEL הופיע כננו-חלקיקי זהב בגודל שניים עד חמישה ננומטרים המופצים באופן בלעדי בלומן ההיקפי של חדר המיון ובחלל הפרי-גרעיני של מעטפת הגרעין.
מבנה האולטרה שהשתמר היטב איפשר זיהוי מולקולה בודדת של חלבונים מתויגים והקל על ניתוח אינטראקציות אברונים, כגון אינטראקציות מיטוכונדריה במיטרה. ננו-חלקיקים של חלבון Ost4-EGFP-MTn תיארו את קרום ה-ER בקרום החיצוני של מעטפת הגרעין. באופן דומה, תאי הביטוי Mito-acGFP-MTn הציגו תיוג ספציפי במטריצה המיטוכונדריאלית.
