הכינו מכונת הקפאה בלחץ גבוה או HPF, לפחות שעתיים לפני תחילת הניסוי בהתאם להוראות היצרן. מעבירים נשאי אלומיניום HPF מסוג A לצינור צנטריפוגה של שני מילימטר המכיל אתנול של מיליליטר אחד ומסוננים אותם בשואב קולי למשך 10 דקות. יבשו את המנשאים בכלי פטרי מכוסה בנייר סינון איכותי.
השרו את המנשאים שנוקו מראש ב-1-hexadecene. השתמשו בפינצטה עדינה כדי להרים דיסק ספיר מוכן מראש מצלחת תרבית תאי HeLa. גע במשטח המסומן בנייר סינון איכותי כדי להסיר את המדיום העודף.
הרכיבו את דיסק הספיר במחזיק דגימות HPF וסגרו במהירות את הדיסק עם נשא אלומיניום בעומק 0.025 מילימטרים המכיל 1-הקסדצן. שאפו לתמיסה עודפת עם נייר סינון איכותי. טען את מחזיק הדגימה להקפאה בלחץ גבוה.
פרוק את מכלול מנשא דיסק הספיר תחת חנקן נוזלי בקופסת קריו מוקצף. הכינו שני מיליליטר של קיבוע החלפת הקפאה או תמיסת FSF, אחד במיכל פוליפרופילן עגול של 20 מ"מ במכסה אדים והקפיאו אותו באמצעות חנקן נוזלי. השתמש בזוג פינצטות מקוררות מראש כדי לטעון את דיסקי הספיר ומכלולי הנשא לתוך המיכל עם תמיסת FSF קפואה, אחת מתחת לחנקן נוזלי.
העבר מיכל זה לתא מכונת החלפת הקפאה אוטומטית מקוררת מראש לעיבוד FSF במינוס 90 מעלות צלזיוס. שמור את הדגימות בטמפרטורה של מינוס 90 מעלות צלזיוס למשך שעה, ולאחר מכן הפרד את דיסקיות הספיר מהנשאים באמצעות פינצטה מקוררת מראש, וודא שהצדדים המסומנים של דיסקי הספיר פונים כלפי מטה. שמרו את הדגימות בטמפרטורה של מינוס 90 מעלות צלזיוס למשך 8 עד 10 שעות נוספות לפני ההתחממות למינוס 60 מעלות צלזיוס תוך שלוש שעות.
החליפו את תמיסת ה-FSF במיכל באצטון מקורר מראש ודגרו במינוס 60 מעלות צלזיוס למשך שעה. חזור על שטיפת אצטון זו פעמיים. התחממו למינוס 30 מעלות צלזיוס תוך שלוש שעות.
בינתיים, להכין מראש לקרר שני מיליליטר של תמיסת FSF שניים בצינור צנטריפוגה של שני מיליליטר במינוס 30 מעלות צלזיוס. החליפו את האצטון בתמיסת FSF שתיים ודגרו במינוס 30 מעלות צלזיוס למשך שלוש שעות. לאחר מכן החלף את תמיסת FSF שתיים במיכל באצטון מקורר מראש ודגר במשך 30 דקות במינוס 30 מעלות צלזיוס.
חזור על שטיפת אצטון זו פעמיים. מחממים למינוס 30 עד 4 מעלות צלזיוס תוך שעתיים. החלף את האצטון בשני מיליליטר של חיץ HEPES מולארי 0.2.
החליפו את החיץ פעם אחת ודגרו בטמפרטורת החדר או בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.
