התחל על ידי הנחת תרחיף תאי לב עוברי מנותק קפוא המכיל בקבוקוני קריו באמבט מים 37 מעלות צלזיוס למשך דקה עד שתי דקות. מוסיפים מיליליטר אחד של מדיום שלם, שחומם מראש ב-37 מעלות צלזיוס לתרחיף המופשר ומערבבים שלוש פעמים עם פיפטה. לאחר מכן להעביר את ההשעיה צינור חרוטי 15 מיליליטר, המכיל 10 מ"מ של מדיום שלם חם.
מעבירים את כל מתלה התא על מסננת של 30 מיקרומטר ושוטפים את המסננת במיליליטר אחד עד שניים של תווך חם ושלם. אספו את הזרימה באותו צינור חרוט. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינורות ב 300 G במשך חמש דקות.
לאחר הסרת הסופרנטנט, שטפו את הגלולה עם PBS והעבירו את תרחיף התא לתוך צינור מיקרו של 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה את תרחיף התא ולהוסיף 100 מיקרוליטר של microbeads מגנטיים שסופקו לתאים כדורים. הומוגניזציה של המתלה חמש פעמים באמצעות קצה פיפטה חזיר רחב לפני 15 דקות של דגירה בטמפרטורת החדר.
בינתיים, שטפו את עמוד ההפרדה המגנטי עם 500 מיקרוליטר של חיץ קשירה. לאחר השלמת הדגירה, דללו את תערובת תרחיף תאי המיקרו-חרוזים באמצעות 500 מיקרוליטר של חיץ קשירה. לאחר מכן, הוסף 0.6 מיליליטר של תרחיף התא לעמודת ההפרדה המגנטית.
לאסוף את שפכי התא החי בצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. לאחר מכן, שטפו את צינור המיקרו 1.5 מיליליטר שהכיל את תרחיף התא באמצעות מיליליטר אחד של חיץ קשירה. לאחר השטיפה, מעבירים את חיץ הקישור מצינור המיקרו 1.5 מיליליטר לעמוד ואוספים את השפכים באותו צינור 15 מיליליטר.
חזור על השטיפה של צינור 1.5 מיליליטר באמצעות מיליליטר אחד של חיץ קשירה. לאחר צנטריפוגה של השפכים ב 300 גרם במשך חמש דקות, להסיר את supernatant מבלי להפריע גלולת התא. הוסף מיליליטר אחד של תמיסת PBS BSA וערבב בעדינות על ידי פיפטינג באמצעות קצה פיפטה פתח רחב.
לאחר מכן להעביר את השעיית התא לתוך צינור מיקרו 1.5 מיליליטר. שוב, צנטריפוגו את מתלה התא והוציאו את הסופרנאטנט מבלי להפריע לכדורית התא. חזור על שתי שטיפות של מיליליטר אחד של PBS BSA.
לאחר הסרת מיליליטר אחד של PBS BSA, להשעות מחדש את התאים ב 100 מיקרוליטר של תמיסת PBS BSA. מערבבים אותו על ידי pipetting 10 פעמים. לקבוע את הריכוז על ידי ביצוע בדיקת טריפאן כחול כדי להבטיח ספירת תאים של יותר או שווה ל 100, 000 תאים ולבצע הערכה מבוססת פלואורסצנטיות עבור הכדאיות של התאים.
השלב הנוסף של מיון והסרת התאים המתים לאחר ההפשרה איפשר רכישת תרחיף תאים נקי יותר עם כדאיות תאים גבוהה משמעותית ושיפר את איכות הדגימה ההתחלתית. ליתר דיוק, נעשה שימוש בשתי שיטות ספירה שונות כדי לכמת את התאים והגרעינים, כולל כחול טריפאן והערכה מבוססת פלואורסצנטיות של הכדאיות. בפרוטוקול זה נצפה כי כדאיות התא עברה מ-80% ל-90% לפני בידוד גרעינים לפחות מ-5% לאחר בידוד גרעינים.
