Luciferase Assay for the Detection of Autophagy Protease ATG4B

התחל על ידי פתיחת התוכנית ואתחול משאבת המזרק על ידי לחיצה על בקרת המתקן, ובחר משאבה 2, ולאחר מכן לחיצה על Init. כדי לשטוף את הצינורית במים המיוננים, לחצו על 'שטיפה' ולאחר מכן לחצו על 'הבא'. בחר משאבה 2 והגדר את תושבת הקצה לקצה הרצוי.

לאחר מכן לחץ שוב על הבא. לחץ על התחל כדי להתחיל בשטיפת צינור. יש לחזור על השטיפה עם מתנול.

בינתיים, הכינו פתרון מצע עובד על ידי דילול מלאי המצע ב-1 עד 100. לבסוף, לשטוף את הצינור עם דילול עובד של מלאי המצע PBS. טען את הצלחת לתוך קורא הלוחות.

ואז, בהגדרות מדידה, בחר את הצמצם למפתח צמצם US luminescence של 384 לוחות, ואחריו המרחק בין לוח לגלאי ל- 0.6 מילימטר, וזמן המדידה כ- 0.5 שניות. לאחר קביעת הגדרות המדידה, בכרטיסייה הגדרות פרוטוקול-כללי, בחר את סוג הלוח כ- 384 Nunc ובחר באפשרות הדו-כיוונית לפי עמודות כמצב המדידה. הזן 1 בכרטיסייה מספר החזרות של הבדיקה.

כעת, בכרטיסיה ניפוק, בחר את מדידת החלוקה הרצויה. לאחר מכן הגדר את זמן המדידה עבור כל באר כמו שנייה אחת ובחר את המשאבה המשומשת הרצויה. מהירות חלוקה של 200 מיקרוליטר לשנייה.

ואת נפח חלוקת ל 50 מיקרוליטר. בחר נפח ניפוק כנפח מילוי המזרק עבור משאבה 2. ולאחר מכן הגדר את התחל לחלק במספר מידה ל- 1.

בכרטיסיה בחירת באר, השתמש בתפריט הנפתח הוספה/הסרה של דגימות ובחר את סוג הדגימה הרצוי, ובחר את הבארות שיש למדוד. לאחר מכן, התחל את המדידה על ידי לחיצה הפעל. אות ההארה הבסיסית מ- DMSO נראה בעמודה 1, והירידה באות ההארה בנוכחות מעכב ATG4B, FMK-9a, נראית בעמודה 24.